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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
丁双阳 何钟佩 王保民
在离体培养条件下,研究了外源 Bt 杀虫晶体蛋白对棉花胚珠内源激素系统变化及发育过程的影响,结果表明,外源 Bt 杀虫晶体蛋白明显影响胚珠发育的进程,内源 CTKs,GAs,ABA 含量下降,IAA 含量增加,胚珠总糖含量增加,可溶性蛋白含量降低,最终胚珠干重显著降低。0～200ng/mL 范围内,随外源Bt 杀虫晶体蛋白浓度增加,对胚珠发育的影响增大。
[期刊] 林业科学
[作者]
李长友 袁强 张永安 戴莲韵 黄大昉
利用苏云金芽孢杆菌cry基因的PCR RFLP鉴定体系和SDS PAGE方法分析了来自我国不同森林立地带土壤中的 72株苏云金芽孢杆菌的cry1、cry2、cry3、cry4、cry5、cry8、cry9、cry10、cry11、cry1I等 10类基因类型和表达蛋白 ,并进行了杀虫活性的生物测定。研究表明 :同时含有cry1,cry2 ,cry1I 3类基因的有 2 1株菌 ,6株菌含有cry1,cry2类基因 ,4株菌含有cry1和cry1I类基因 ,只含有cry1基因的有 1株 ,cry2类基因的 4株 ,36株菌不含所鉴定的 10类cry基因。同时证明 ,绝大多数含有cry1基因的菌株...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王广君 张杰 吴隽 宋福平 黄大昉
通过对Cry1Ba3蛋白序列的分析,以及与已知Cry蛋白比较,设计了6对特异性引物,通过PCR扩增获得6种不同长度的cry1Ba3基因片段。将这些基因片段克隆到pET-21b载体上,导入大肠杆菌BL21中进行诱导表达,最终得到6种不同长度的Cry1Ba3蛋白片段。采用浸叶法检测这些蛋白片段对小菜蛾的杀虫活性,研究结果表明含有第1～685位和含有第22～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒性,与全长Cry1Ba3蛋白相比,没有改变;含有第54～655位氨基酸的蛋白片段对小菜蛾的毒力明显降低;而含有第22～627位和含有第85～655位氨基酸的蛋白片段完全丧失了对小菜蛾的活性。上述结果表明Cry1...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
沙莉 章淘 黄张敏 黄志鹏 关雄
分离自武夷山土壤的苏云金芽胞杆菌BRC-HZP7菌株对小菜蛾和甜菜夜蛾幼虫有较好的毒杀作用.对该菌株进行了生理生化测定、cry基因的PCR-RFLP检测,以及通过SDS-PAGE检测晶体蛋白,并对蛋白点进行肽段指纹图谱鉴定.结果表明该菌株含有cry1Aa、cry1Ba、cry1Ia、cry2Ab、cry2Ac、cry2Ae等6种cry基因.从选取的8个蛋白条带肽段指纹图谱可以看出:标记3、6、7、8的4个蛋白点都是杀虫晶体蛋白,蛋白点6、7、8分别鉴定为Cry2Aa、Cry1Aa、Cry1Ba,蛋白点3可能是Cry1Ba的部分片段.表明该菌株有丰富的ICP资源,可作为杀虫应用的候选菌株.
[期刊] 华北农学报
[作者]
杜立新 董明 王容燕 马铭泽 王金耀 曹伟平 宋健 冯书亮
苏云金芽孢杆菌SHJ-5菌株是从黑龙江采集的土样中分离获得的新菌株,对其伴孢晶体形状、基因型、蛋白表达以及杀虫活性进行了系统研究。菌株SHJ-5产生的伴孢晶体形状为钝菱形;利用PCR-RFLP技术对该菌株的基因型进行鉴定,结果表明,该菌株含有cry1Aa、cry1Ea、cry1Be、cry1Ah、cry1Ai、cry2Ab、cry1i和vip3A基因;SDS-PAGE晶体蛋白检测结果显示,该菌株表达130～150 kDa和60 kDa大小蛋白;生物活性测定表明,菌株SHJ-5对棉铃虫和小菜蛾有较高杀虫活性,校正死亡率分别为100%和96.7%。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王清锋 喻子牛
利用ＰＣＲ片段延伸连接技术将ｃｒｙ１Ｅ的原启动子准确地更换为ｃｒｙ３Ａ启动子，重组ｃｒｙ１Ｅ经载体ｐＨＴ３１５克隆至枯草芽胞杆菌无芽胞突变株１Ｓ８和苏云金杆菌以色列亚种无晶体突变株４Ｑ７，获得重组菌３Ａ１ＥＢｓ和３Ａ１ＥＢｔ。聚丙稀酰胺凝胶电泳和生物测定表明，克隆改造后的ｃｒｙ１Ｅ可表达，表达的Ｃｒｙ１Ｅ对海灰翅夜蛾有毒（幼虫死亡率６０％～７０％）。
[期刊] 林业科学
[作者]
陈颖 韩一凡 李铃 田颖川 聂绍基
本研究首先建立了美洲黑杨叶片外植体的再生系统，并利用Ｈｏｒｓｃｈ等人１９８５年发明的叶盘法，将分别带有嵌合基因ＮＰＴＩＩ和１．８ｋｂ或２．１ｋｂＢｔ．基因的土壤杆菌ＬＢＡ４４０４与美洲黑杨叶片共培养。采用３０ｍｇ／ｌ和５０ｍｇ／ｌ两种浓度的卡那霉素筛选转化子，约２８天左右的时间，有不定芽从外植体切口处形成。两种卡那霉素浓度下共形成２７５个伸长芽，存活了１８７株。这１８７株分别进入卡那霉素３０ｍｇ／ｌ，５０ｍｇ／ｌ的生根培养基后，生根率分别为９．６２％和８．０２％。ＰＣＲ反应证明部分植株已成功地进行了转化。
关键词：
美洲黑杨,Bt.基因,转化,PCR反应
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘松江 龚文芳 孙君灵 庞保印 杜雄明
【目的】天然彩色棉是理想的绿色、环保、健康纺织原料,建立并优化棕色棉和绿色棉胚珠离体培养体系,研究渗透压调节剂、植物生长调节剂和类黄酮代谢前体物质等生长物质对彩色棉胚珠培养纤维发育的影响,为彩色棉纤维色泽改良提供一定的理论基础。【方法】以棕1-61、RT白絮、绿棉CC28为材料,采用常规栽培管理方法种植,在开花当天标记棉铃,取开花后3 d的棉铃进行离体培养。所有处理均在BT培养基基础上添加10.0μmol·L-1的IAA和5.0μmol·L-1的GA3,此外分别采用不同浓度的渗透压调节剂(甘露醇、氯化钠、氯化钾、蔗糖)、植物生长调节剂(茉莉酸甲酯、油菜素内酯)和类黄酮代谢前体物质(苯丙氨酸、阿...
[期刊] 华北农学报
[作者]
臧大康 郑桂玲 周洪旭 张媛 李国勋 李长友
以本实验室分离的Bt菌株B-DLL质粒DNA为模板,利用cry8类基因特异性引物JJX5和JJX3扩增出3.5kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD 18-T中,筛选获得一个含新基因的克隆pMD-cry8new。序列测定表明,该基因编码区为3 525 bp,编码的蛋白质由1 174个氨基酸残基组成,理论分子量为133.05 kDa,等电点为pH4.69,为弱酸性蛋白。该基因核苷酸序列已在GenBank登录(Accession number:HQ174208),编码的氨基酸序列与Cry8Fa1的同源性最高达99.8%,被国际Btδ-内毒素命名委员会正式命名为Cry8Fa2。将cry8Fa2基因插...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
赵直 吴钢 王闵霞 朱旭东 蒲志刚 张志勇 彭正松 蔡平钟
以分离的3株苏云金芽孢杆菌质粒为模板,通过设计一对特异引物,PCR扩增得到3条全长3.6 kb的基因序列,其各自都包含一个完整的开放阅读框,编码序列全长分别是3468、3450、2697 bp(Genebank登录号分别为GQ385073,GQ385074,GQ385075);它们与cry1A类基因同源性都高达95%以上;分别编码1159、1150和902个氨基酸。并在此基础上采用生物信息学方法对这3个基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、跨膜结构域以及功能域等方面进行了预测和分析。为转基因抗虫植物和微生物杀虫工程菌的构建提供了基因来源。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
姚宝安 王祥 夏雪山 赵俊龙 马丽华 孙明 喻子牛
捻转血矛线虫是世界各国危害牛、羊等反刍动物的主要寄生虫之一.目前虽然有特效的化学药物驱虫,但因其具一定的副作用,寄生虫易产生耐药性,药物易在内品残留,危害人类健康.苏云金芽胞杆菌是一种革兰氏阳性细菌,它在形成芽胞的同时,在菌体一端形成一种蛋白性质伴胞晶体,它对昆虫有较高毒力,对人畜安全无毒,不污染环境,成本低,已广泛用于防治农、林、仓贮害虫和医学
[期刊] 中国农业科学
[作者]
白耀宇 蒋明星 程家安
目的研究转Bt基因水稻表达的外源Bt杀虫蛋白在土壤中的环境去向,以便进行转BT基因水稻的生态风险性评价。方法室内采用ELISA法,研究转Bt基因水稻克螟稻2号(KMD2)粉碎叶片中Cry1Ab杀虫蛋白在3种水稻土,即青紫泥田、黄筋泥田和黄松田土中不同土壤含水量、土壤pH值和温度条件下的降解动态。结果供试叶片粉中Cry1Ab蛋白在3种水稻土中的降解动态均可用一级化学反应动力学指数方程来拟合,降解半消减期t0.5为1.8～4.0d。结论土壤含水量、pH和温度对Cry1Ab蛋白降解速率均有一定影响,但pH和温度的影响更为明显。通常pH较低的酸性土壤和低温不利于土壤中Cry1Ab蛋白的降解,特别是在酸...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
戴经元 钱江伟 邓英 孙明 喻子牛
用苏云金杆菌菌株ＨＤ－１和７２１６的伴胞晶体蛋白碱解产物作抗原，制备相应抗血清，并用协同凝集反应测定ＨＤ－１和７２１６的晶体蛋白的含量，其最低检测量分别为７８ｎｇ／ｍｌ和１３０ｎｇ／ｍｌ。用生物测定方法测定ＨＤ－１和７２１６经碱溶的晶体蛋白对小菜蛾幼虫的ＬＣ５０值分别为０．４５２μｇ／ｍｌ和０．７６３μｇ／ｍｌ。两种方法测定的结果有一定的相关性。用协同凝集反应测定苏云金杆菌晶体蛋白含量比火箭免疫电泳、环状沉淀反应、双相单扩散反应的灵敏度高，比ＥＬＩＳＡ的灵敏度略低，但操作更简便、快速。
关键词：
苏云金杆菌 晶体蛋白 协同凝集反应
[期刊] 西南农业学报
[作者]
肖留斌 王震 谭永安 柏立新
为探讨棉花蛋白质含量对绿盲蝽若虫生长发育的影响,采用3种棉花(苏棉9号、中棉29号、鲁棉研15号)的蕾、花、叶分别饲喂绿盲蝽若虫,测定其生长发育参数,同时测定不同棉花上这3种器官的蛋白质含量,并进行品种、器官二因素方差分析与不同因素间相关性分析。研究结果显示:不同品种间的蛋白质含量存在显著差异,同一棉花品种上叶与蕾中的蛋白质含量均显著高于花中的蛋白质含量达14.9%以上。不同棉花品种上若虫存活率的高低、发育历期的长短均与其取食器官的蛋白质含量密切相关,叶片、花、蕾上的若虫发育历期和蛋白质含量的相关系数分别为0.9976、0.9586、0.9377,其差异程度达显著水平。不同棉花相同器官饲喂的绿...
关键词：
绿盲蝽 发育历期 棉花 蛋白质含量
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李云河 张永军 吴孔明 原国辉 郭予元
采用ELISA 方法研究了Bt 棉花叶片中Cry1Ac 杀虫蛋白在不同环境条件空气介质中和土壤介质中的降解规律。结果表明,不同环境下Bt 杀虫蛋白降解趋势有明显差异。不同温湿度及光照条件的空气介质中,Bt 杀虫蛋白的降解速度一般在初期较快,经过短暂的缓慢降解阶段后进入相对稳定状态(含量50 ng·g-1左右)。高温低湿条件下,Bt 杀虫蛋白降解较快,达到稳定水平的时间短。Bt 杀虫蛋白在光照和非光照环境下的的降解动态没有显著性差异。自然条件下Cry1Ac 蛋白在土壤介质中初始阶段降解迅速,30 d 后降解了85%左右。随着冬季的到来,杀虫蛋白降解趋于缓慢。次年春天后,杀虫蛋白的降解加快,至4 ...
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转Bt基因棉花 Bt杀虫蛋白 降解动态
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