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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 郭诗芬  钟婷婷  卢文斌  刘忠松  邬贤梦  官春云  肖钢  
为明晰油菜BnaYUCCA10基因与油酸含量之间的关系,以miRNA测序得到的BnaYUCCA10基因为对象,采用实时荧光定量PCR(RT–PCR)技术研究BnaYUCCA10基因在30份不同油酸含量的甘蓝型油菜不同部位和生长时期的表达情况,并对BnaYUCCA10基因是否参与油酸的代谢进行分析。结果表明:营养生长期大部分油菜材料的BnaYUCCA10基因表达量随生育进程逐渐增加,高油酸材料与非高油酸材料间无显著差异;在开花1 d的花中的表达量高于花蕾和开花5 d的花中的表达量,且在高油酸材料与非高油酸材料中的表达量差异显著;在角果期的表达量随生育进程逐渐降低,在高油酸材料与非高油酸材料中的表达量差异显著;BnaYUCCA10基因在角果期及开花5 d的花中的表达量与油酸含量呈极显著正相关,在高油酸材料中的表达量显著高于非高油酸材料的。推测BnaYUCCA10基因可能参与了种子中的油酸代谢,可为油菜油酸调控机制的研究提供参考依据。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)  [作者] 郭诗芬  钟婷婷  卢文斌  刘忠松  邬贤梦  官春云  肖钢  
为明晰油菜BnaYUCCA10基因与油酸含量之间的关系,以miRNA测序得到的BnaYUCCA10基因为对象,采用实时荧光定量PCR(RT–PCR)技术研究BnaYUCCA10基因在30份不同油酸含量的甘蓝型油菜不同部位和生长时期的表达情况,并对BnaYUCCA10基因是否参与油酸的代谢进行分析。结果表明:营养生长期大部分油菜材料的BnaYUCCA10基因表达量随生育进程逐渐增加,高油酸材料与非高油酸材料间无显著差异;在开花1 d的花中的表达量高于花蕾和开花5 d的花中的表达量,且在高油酸材料与非高油酸材料中的表达量差异显著;在角果期的表达量随生育进程逐渐降低,在高油酸材料与非高油酸材料中的表达量差异显著;BnaYUCCA10基因在角果期及开花5 d的花中的表达量与油酸含量呈极显著正相关,在高油酸材料中的表达量显著高于非高油酸材料的。推测BnaYUCCA10基因可能参与了种子中的油酸代谢,可为油菜油酸调控机制的研究提供参考依据。
[期刊] 中国农业科学  [作者] 刘芳  肖钢  官春云  
【目的】脂肪酸去饱和酶2基因(FAD2)是控制油菜中油酸含量的重要基因,通过研究GATA和GT转录因子与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子的互作关系及其转录调控机制,为高油酸油菜育种提供分子理论基础。【方法】通过缺失启动子片段及生物信息学分析,预测BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子区潜在顺式作用元件;从PlantTFDB转录因子数据库中筛选候选转录因子,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测转录因子的表达规律,并与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2表达规律对比,进一步筛选候选转录因子;利用酵母单杂交验证转录因子与启动子序列的互作情况;将转录因子与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子序列共转入拟南芥,通过Western blot检测报告基因GFP的蛋白表达情况,分析转录因子对于启动子功能的影响。【结果】单独敲除BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子中的GT或GATA顺式作用元件后,GFP蛋白丰度均下降,表明GT和GATA顺式作用元件在调节基因转录中起重要作用。酵母单杂交结果显示,GATA家族转录因子(Bna010243-1、Bna026124-1和Bna026124-2)和GT家族转录因子(Bna010915和Bna013749)可以与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子相互作用。Western blot结果显示,当GATA家族转录因子与含有GATA元件的启动子片段共转化拟南芥时,GFP蛋白含量明显高于无转录因子时,当敲除GATA元件时,GFP蛋白含量无明显变化;当GT家族转录因子与含有GT元件的启动子片段共转化拟南芥时,GFP蛋白含量有明显变化,当敲除GT元件时,GFP蛋白含量无明显变化。【结论】GATA家族的转录因子Bna010243-1、Bna026124-1和Bna026124-2可以与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子中GATA元件相互作用,增强基因的表达水平。GT家族的转录因子Bna010915可以与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子中的GT元件发生互作,正向调节基因表达;Bna013749通过与BnA5.FAD2和BnC5.FAD2启动子中的GT元件发生互作,负向调节基因表达。
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