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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨笑柳 剧世强 崔盼盼 陈长超 芮荣
［目的］本试验旨在探究ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制对猪卵母细胞成熟和纺锤体组装的影响及潜在机制。［方法］猪ＧＶ期卵母细胞分组进行体外成熟培养，在各组中分别添加０、１、３和５μｍｏｌ·ｌ～（－１）ＡｕｒｏｒＡ－Ａ特异性抑制剂ｍｌＮ８０５４，观察其对卵母细胞发育与成熟的影响及纺锤体结构的变化；免疫印迹检测磷酸化ＡｕｒｏｒＡ－Ａ和ＴＡＣＣ３的表达。［结果］ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制导致猪卵母细胞成熟明显受阻（Ｐ＜０．０５），且主要阻滞在Ｐｒｏ－ｍⅠ期及ｍⅠ期；ｍⅠ期纺锤体形态明显异常，出现单极或多极纺锤体，异常率显著上升（Ｐ＜０．０５）。ＡｕｒｏｒＡ－Ａ抑制后，猪卵母细胞磷酸化ＡｕｒｏｒＡ－Ａ和酸性卷曲转化相关蛋．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈长超 王令怡 孙嘉豪 靳莎莎 芮荣 剧世强
［目的］本试验旨在研究猪卵母细胞成熟过程中细胞骨架的动态变化以及秋水仙碱对卵母细胞成熟及ＭⅠ期纺锤体的影响。［方法］采用间接免疫荧光结合激光共聚焦显微成像技术，检测微管蛋白（α－ｔｕｂｕｌｉｎ）等细胞骨架蛋白的表达与亚细胞定位，之后采用秋水仙碱处理猪卵母细胞，研究秋水仙碱对卵母细胞成熟及ＭⅠ期纺锤体结构的影响。［结果］猪卵母细胞α－ｔｕｂｕｌｉｎ在生发泡破裂（ＧＶｂＤ）之后开始组装，第一次减数分裂中期（ＭⅠ）形成典型的纺锤体结构，第一次减数分裂后期至末期（ＡｔⅠ）则分布于两组染色体之间，第二次减数分裂中期（ＭⅡ）在染色体附近重新组装形成典型的纺锤体；微丝蛋白（Ｆ－Ａｃｔｉｎ）在ＧＶｂＤ之后富集．．．
关键词：
猪 卵母细胞 减数分裂 纺锤体 秋水仙碱
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
贺依静 李桥 彭磊 李佳 初亚婕 林其昕 芮荣 剧世强
【研究目的】本研究旨在探究Xklp2靶蛋白（targeting protein for Xklp2， TPX2）在猪卵母细胞减数分裂过程中的表达定位及其潜在功能。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体（cumulus oocyte complexes， COCs）并随机分组后进行体外成熟培养，通过间接免疫荧光染色与蛋白免疫印迹等方法检测TPX2在卵母细胞减数分裂过程中的亚细胞定位与动态表达情况；通过生发泡期（germinal vesicle， GV）显微注射特异性siRNA探究敲低TPX2对卵母细胞减数分裂进程、纺锤体结构以及早期凋亡的影响。【结果】TPX2在第一次减数分裂中期（metaphase I， MI）表达量显著上升，其亚细胞定位与α微管蛋白（α-tubulin）的分布特点相似，并主要富集在纺锤体两极。TPX2表达被敲低后卵母细胞第一极体（first polar body， PB1）排出率显著下降（P < 0.05），且大多数细胞被阻滞在生发泡破裂期（germinal vesicle breakdown， GVBD）期和第一次减数分裂后末期（anaphase I and telophase I， ATI），同时纺锤体结构异常比例显著升高（P < 0.05），并伴随染色体排列紊乱。与对照组相比，敲低TPX2后卵母细胞早期凋亡率急剧增加（P < 0.05），凋亡相关基因Caspase 3表达量以及Bax/Bcl2比值显著升高（P < 0.05）。【结论】TPX2与猪卵母细胞减数分裂过程中的纺锤体组装及细胞周期调控密切相关，敲低TPX2引起卵母细胞纺锤体结构异常，并诱导早期细胞凋亡，最终导致卵母细胞成熟失败。
[期刊] 华北农学报
[作者]
郝瑞荣 吕丽华 高俊杰 张春香
为了探究AY 9944-A-7在3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)阻滞的绵羊卵母细胞减数分裂恢复过程中的作用,将绵羊卵丘-卵母细胞复合体(COCs)、分离的卵丘-卵母细胞(split COCs)和脱卵丘后制成的裸卵(DOs)培养于含250μmol/L IBMX的体外成熟液中,分别添加10,20,30,40μmol/L的AY 9944-A-7以诱导卵母细胞恢复减数分裂。结果表明,10~40μmol/L的AY 9944-A-7极显著地提高了绵羊COCs的生发泡破裂(GVBD)率和第一极体(PBI)排出率(P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
华再东 郑新民 魏庆信 许厚强 刘西梅 李莉
通过采集屠宰场废弃猪卵巢,体外分离和培养猪卵母细胞,探讨基础培养基、激素、卵泡直径大小及卵丘细胞层数对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:改良TCM199(mTCM199)较NCSU-23培养猪卵母细胞成熟率显著提高(P
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
陈晓宇 李青旺 胡建宏 王立强 张德福 卜书海 韩增胜
以TCM-199成熟培养猪卵巢表面直径2～3mm,3～5mm和5～8mm卵泡内的卵母细胞,比较了成熟培养液中添加以上各组卵泡液(pFF)对猪卵母细胞体外成熟(IVM)的影响,以成熟培养48h后排出第一极体为成熟标准对猪卵母细胞进行成熟鉴定。结果表明,2～3mm,5～8mm和3～5mm3组卵泡内卵母细胞的体外成熟(IVM)率依次升高,分别为12.7%,31.3%和46.0%,各组间差异显著(P<0.05);添加3～5mm卵泡液的卵母细胞体外成熟率(42.0%)也显著高于5～8mm组(11.0%)和2～3mm组(12.7%)(P<0.05)。试验同时观察记录了不同直径卵泡内卵母细胞的等级,结果发...
关键词：
猪 卵泡 卵母细胞 体外成熟
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
陈勇 夏国良 苏友强 傅国栋
本实验建立了昆明白小鼠卵丘-卵母细胞复合体（CEO）、自然课卵（NO）和探卵（DO）3种细胞模型，并观察其在体外培养时卵母细胞的成熟情况。3种细胞模型在M199培养液中自发成熟时，其卵母细胞生发泡破裂（GVBD）主要发生在培养后1～5h。培养至24h，CEO、DO和NO的GVBD发生率分别为97．3％，87．3％和81．2％，CEO和NO间GVBD％差异显著（P＜0．05）。CEO中卵母细胞的第一极体（PB1）主要集中在8～14h排出（24h时，PBI％为86．6％），DO主要在10～16h排出PBI（24h时，71．7％），而NO在培养24h内很少有PB1排出（17．4％）。4mmol·L－...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
王松波 夏国良 周波 穆欣艺 张美佳
采用体外培养方法和放射免疫分析法(RIA)研究磷酸二酯酶5(PDE5)抑制剂Sildenafil(西地那非)对小鼠卵母细胞体外自发成熟的作用。结果显示:该抑制剂显著抑制(P<0.05)小鼠卵母细胞的自发成熟,且其抑制作用是可逆的。放射免疫分析实验表明,Sildenafil对卵丘细胞(CCs)和裸卵母细胞(DOs)内环鸟苷一磷酸(cGMP)水平没有显著的升高作用,却能够显著提高CCs和DOs内环腺苷一磷酸(cAMP)的水平。以上结果提示,cGMP和cAMP信号通路之间的互作可能参与了PDE5调控的小鼠卵母细胞自发成熟过程。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
周波 洪海燕 旭日干 夏国良
选用磷酸二酯酶3(PDE3)特异性抑制剂Milrinone和PDE4特异性抑制剂Rolipram以及细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)抑制剂Roscovitine(ROSC)对绵羊卵丘卵母细胞复合物(COCs)的体外自发成熟进行研究,拟建立一种模拟体内卵泡环境的绵羊卵母细胞体外培养模型。以M 199为基础培养液,绵羊COCs在含有5 0 μmol/L的Milrinone、Rolipram、ROSC或不含上述任何抑制剂的培养液中分别培养2 4h。COCs在含有5 0 μmol/LROSC的培养液中培养2 4h ,转移到含有2 0IU/LFSH的培养液继续培养2 4h检查核相。结果表明:COCs在M...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张建超 夏国良 崔胜 吕忠显 李美玲 邵育静
实验研究了一氧化氮合成酶抑制剂 L - NAME对昆明白小鼠卵母细胞成熟和排卵的影响。初情期前的昆明白小鼠注射 PMSG促进发情 ,注射 h CG促进排卵 ,并在注射 h CG前后各 3h注射 L- NAME。注射h CG后 18h颈椎脱臼处死小鼠 ,取输卵管冲卵。统计排卵数及卵母细胞的减数分裂情况发现 ,注射 L- NAME后排卵数明显减少 ,卵母细胞减数分裂恢复异常 ,大部分排出的卵母细胞处于 MI期 ;PB1的排出率降低 ,形态异常或退化死亡的卵母细胞数增加。结果直接证明 :在体内 ,NO可促进小鼠卵母细胞的减数分裂的恢复 ;NO对于小鼠排卵具有重要的促进作用 ;NO对小鼠卵母细胞质的成...
关键词：
小鼠 卵母细胞成熟 一氧化氮 排卵
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张莉 冯书堂
卵母细胞是胚胎工程和发育生物学的重要组成部分,它是体外受精、性别控制、克隆及转基因等技术成功与否的前提和关键。影响猪卵母细胞体外成熟的因素很多,本文将从物理因素和化学因素两方面作简要综述。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马利兵 华松 曹俊伟 杨丽 张涌
哺乳动物有腔卵泡中的卵母细胞在体外会自发恢复减数分裂,适当延迟减数分裂的自发恢复,能促进核与胞质成熟的同步化,有利于后续胚胎的发育。本试验研究了磷酸二酯酶3(PDE 3)特异性抑制剂milrinone对山羊卵母细胞体外成熟及孤雌胚发育的影响。结果表明,milrinone抑制山羊卵母细胞体外成熟的时间为6 h,其最佳剂量为100μmol/L,经milrinone处理体外培养28 h成熟的山羊卵母细胞用于孤雌激活,能显著提高孤雌激活胚的卵裂率及囊胚率。说明成熟培养液中添加适当剂量的milrinone,能显著提高体外成熟的山羊卵母细胞的质量。
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄承俊 郭林林 孙守强 林峰 刘海军
为了提高牛卵母细胞体外成熟率,以机械裸卵(DOs)、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)和添加的离散卵丘细胞的不同组合,对卵丘细胞在卵母细胞体外成熟过程中的影响进行了探索,并对不同卵丘细胞的作用途径和强度进行了分析。试验结果表明:添加离散卵丘细胞能够显著促进DOs的体外成熟(57.98±14.27 vs 35.53±14.00,P0.05);卵母细胞胞外卵丘细胞对与之共培养的DOs的体外成熟促进作用效果不明显(35.83±18.32 vs 35.53±14.00,P>0.05)。分析结果显示:卵...
关键词：
卵丘细胞 卵母细胞 体外成熟 牛
[期刊] 华北农学报
[作者]
李晟阳 罗光彬 张晓华 何丽华 姚汝强 纪英卓 郭建华
探讨了促性腺激素(FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟的影响,最终找到了其合理的使用剂量。在成熟液中添加LH浓度分别为1,5,10 IU/mL时,与没有添加FSH与LH的对照组(15.9%)相比,成熟率有显著提高,成熟率分别为49.1%,30.0%,36.3%。LH浓度为1 IU/mL的实验组成熟率最高,显著高于对照组(p
关键词：
猪卵母细胞 体外成熟 FSH LH
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱桂玉 冯书堂 李吉涛 牟玉莲 潘登科 郭炳冉
【目的】研究探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进猪卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。【方法】对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的猪卵母细胞进行了体外成熟培养试验,应用mRNA差异显示(DDRT-PCR)和半定量反转录PCR技术(RT-PCR),对这2类猪卵母细胞中mRNA的差异表达进行研究,得到了14条差异表达条带,经过回收、克隆、测序后,再运用半定量(RT-PCR)进行检测。【结果】体外培养的裸卵细胞的各项成熟指标均低于卵丘-卵母细胞复合体。3个基因(PELP1,Myo5b and CAST)和一条新EST序列在有卵丘和无卵丘的猪卵母细胞中表现出差异表达...
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