[目的]结核病是全球最重要的人畜共患传染病之一,ASAP1与结核病易感性相关。本文旨在为了明确在细胞水平ASAP1表达与结核分枝杆菌感染的关系,探究ASAP1是否参与巨噬细胞对Mtb的吞噬以及了解该蛋白表达对巨噬细胞吞噬结核分枝杆菌的影响。[方法]以人源单核细胞建立的不同ASAP1表达水平的巨噬细胞作为模型,通过感染结核分枝杆菌开展了一系列体外试验,使用BCG以及Mtb H37Ra菌株感染THP-1分化的巨噬细胞,Western blot以及荧光定量PCR检测感染后ASAP1的表达;建立不同ASAP1表达

探讨Mce4E蛋白在牛结核分枝杆菌致病机理中的作用。以Mce4E蛋白刺激肺泡巨噬细胞24和48h后,MTT检测分析表明,Mce4E蛋白对巨噬细胞的活性有显著的抑制作用(P

【目的】通过测定先天性免疫效应因子分泌水平的变化,研究鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)体外对巨噬细胞先天性免疫应答调节的影响。【方法】将培养好的鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分为4组,分别用PBS(CT组,对照组)、Escherichia coli K88(EC组)和Lactobacillus rhamnosus(LR组)处理12 h,以及先用Lactobacillus rhamnosus预处理1 h,再用Escherichia coli K88处理12 h(LR-EC组)。试验结束时,收集各组的细胞培养液,用ELISA检测TNF-α、IFN-γ、IL-1β、I...

红细胞广泛吞噬作用的发现和研究王旭东，饶家荣（云南农业大学，昆明６５０２０１）关键词两栖动物，鱼类，红细胞，吞噬ＴＨＥＤＩＳＣＯＶＥＲＹＡＮＤＳＴＵＤＩＥＳＯＦＴＨＥＥＸＴＥＮＳＩＶＥＥＲＹＴＨＲＯＣＹＴＩＣＰＨＡＧＯＣＹＴＯＳＩＳ￥ＷａｎｇＸｕｄｏ...

吞噬作用是一种对抗微生物病原体的重要机制,但许多细菌均有抗吞噬作用。利用透射电镜和激光共聚焦显微镜结合细胞生物学技术,对黑腹果蝇Drosophila melanogaster S2细胞吞噬热灭活大肠埃希菌(heat inactivated Escherichia coli,HIEC)和热灭活金黄葡萄球菌(heat inactivated Staphylococcus aureus,HISA)的作用进行了研究。结果表明:S2细胞能够在接种后1 d内有效清除HIEC,但不能清除HISA;经聚肽糖(PG)或脂多

为探究克氏原螯虾(Procambarus clarkii)免疫调节作用的分子机制,本研究分析了与3-羟基丁酸共培养的克氏原螯虾的血淋巴细胞转录组数据,发现细胞骨架基因呈显著的差异表达,推测其可能与克氏原螯虾的免疫调节相关。本研究对细胞骨架基因进行注释,并验证了其对细胞免疫调节的影响。注释结果显示,5个细胞骨架基因中4个为驱动蛋白超家族(kinesin family,KIF)基因,均含有KISc结构域,且编码氨基酸以谷氨酸、亮氨酸为主,蛋白质二级结构主要由α-螺旋组成。各物种中除kinesin-like protein的保守结构域及保守基序数量、种类和位置有所差别,其余KIFs基因大致相同。q RT-PCR结果表明,KIFs基因在克氏原螯虾的造血组织和鳃中表达量较高,在眼柄、肌肉等组织中表达较低(P<0.05)。RNAi结果证明,0.10μg/g体重剂量ds KIF11的敲降效果最佳,可将KIF11的表达量敲降至8.01%(P<0.05);与对照组相比,随着KIF11基因的敲降,血淋巴细胞对FITC标记的副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和红色荧光微球的吞噬率分别下降36.26%(P<0.01)和41.94%(P<0.01)。上述结果表明KIFs基因保守性较高,参与了血淋巴细胞的吞噬作用,这一结果为深入研究KIFs基因在先天免疫中的功能和机制提供了依据。

探讨干酪乳杆菌LC2W细胞壁组分体外对小鼠巨噬细胞功能的影响。以培养液单纯培养小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞作为对照,研究干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖对RAW264.7细胞代谢水平、吞噬中性红能力及释放NO的影响。不同浓度磷壁酸和肽聚糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞代谢MTT能力、吞噬中性红能力有明显增强作用,并呈一定的剂量效应,在相同质量浓度时,两种细胞壁组分激活巨噬细胞能力无显著差异。同时诱导产生NO量也随着浓度增大而增加,当浓度达到50μg/mL时,磷壁酸诱导能力显现出较高的水平。干酪乳杆菌LC2W细胞壁主要组分磷壁酸和肽聚糖能激活小鼠巨噬细胞RAW264.7细...

【目的】副结核病被世界动物卫生组织（OIE）列入必须报告的《OIE疫病、感染及侵染名录》，我国将其列为二类动物疫病，引起多种反刍动物慢性、增生性肠炎，感染动物通过肠道间歇性排菌而成为养殖场的持续传染源，给养殖业带来了巨大经济损失。其病原体副结核分枝杆菌（MAP）属于胞内寄生的革兰氏阳性菌，为三类动物病原微生物，包括S型（羊型，细分为Ⅰ型、Ⅲ型和骆驼型）和C型（牛型、Ⅱ型，包括B型（野牛型））。有研究表明，各亚型MAP无宿主特异性，但具有地域性，内蒙古作为国内该病的首发地区，获得并准确鉴定内蒙古地区MAP菌株亚型及基因特征，对副结核病的预防控制意义重大。【方法】对内蒙古地区来源的28份MAP阳性的羊源病料进行MAP分离培养，菌落Ziehl-Neelsen染色，染色阳性菌扩繁，提取扩繁菌液基因组DNA，进行IS900基因、IS1311基因和DMC基因扩增、测序和序列分析，同时IS1311基因PCR产物进行Hinf I和Mse I双酶切鉴定。【结果】28份样品经过7—12周培养，共有9支培养基长出菌落，菌落半透明乳白色、表面光滑。挑取单菌落进行抗酸染色，在显微镜下观察到呈不规则（单个或分枝状）、红染的细短杆菌，符合分枝杆菌的形态学特征及抗酸染色特性。9株分离菌IS900、IS1311和DMC基因PCR扩增产物均与目的基因片段预期大小一致。确定了本研究9株分离株均为MAP菌株，分别命名为MAP-NM1至MAP-NM9。DMC基因扩增产物大小为310bp，符合Ⅱ型MAP特征；IS1311基因扩增产物经HinfⅠ和MseⅠ双酶切，本研究9株MAP均得到4条目的条带，与Ⅱ型MAP一致；IS1311基因测序结果与S型、C型、印度野牛型和美国野牛型MAP代表株对照分析显示，9株MAP IS1311基因片段的64、65、68、223、236、422、527、628位碱基位点符合C型和B型MAP特征；IS900基因测序结果序列分析显示，9株MAP IS900基因片段第169位及第216位碱基分别为C（胞嘧啶）和A（腺嘌呤），符合Ⅱ型和Ⅲ型MAP特征；17株来自GenBank数据库的MAP IS900基因参考序列与本研究9株分离株IS900基因系统进化树显示，本研究9株MAP均划分于Ⅱ型MAP分支；3个基因测序结果进行Blast在线分析，与本研究所得分离株同源性最高的参考序列均为Ⅱ型MAP，且同源性均高于98%。综上所述，本研究9株MAP分离株均为Ⅱ型MAP。【结论】首次分离得到内蒙古地区羊源Ⅱ型MAP菌株。

罗非鱼是重要的经济鱼类,而嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)是其主要病原菌之一,只有充分的掌握该病原菌的感染机制才能提供更好的预防和治疗手段。本研究首先通过转录组筛查尼罗罗非鱼(Oreochromisniloticus)脾脏中与细菌感染相关的基因,然后通过荧光定量PCR证实上述基因的表达变化,最后使用秋水仙素试验和交叉免疫试验进行验证。研究结果显示,尼罗罗非鱼在感染嗜水气单胞菌之后,吞噬作用发生显著增强。秋水仙素试验发现,微管蛋白的功能受到抑制可以显著降低罗非鱼对嗜水气单胞菌的防御能力。交叉免疫试验证实,通过迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)激活吞噬作用也可以提高罗非鱼对嗜水气单胞菌的防御能力。本研究旨在了解吞噬作用在罗非鱼抵御嗜水气单胞菌感染过程中发挥重要作用,并试图通过交叉免疫试验为细菌疫苗的制备提供新思路。

DNA螺旋酶中的GyrA与GyrB亚基只有互作重组后才有酶活性。为寻找GyrB亚基和GyrA亚基相互作用的关键区域,构建了不同的GyrB亚基突变体,分析GyrB各突变体与GyrA亚基的相互作用对全酶活性的影响。结果显示:GyrB亚基C端是其与GyrA相互作用的主要结构域,结合GyrB的二维结构,提出GyrB中第531550位氨基酸是影响螺旋酶功能的关键区域,并可能是理想的新药设计靶标。

[目的] 本研究旨在探究CXC趋化因子配体17（C-X-C motif chemokine ligand 17，CXCL17）对巨噬细胞的趋化作用并解析其涉及的分子机制。[方法] 首先，本研究构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌，该菌经IPTG诱导后高效的表达CXCL17蛋白，并主要以包涵体形式存在；包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。其次，通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白的最佳浓度范围，并以该浓度设置浓度梯度处理猪巨噬细胞，通过Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性；最后，通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况，以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果] 研究发现，重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L~(-1)，37℃诱导表达7 h的条件下，能够获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白经纯化后纯度可高达95%。使用该重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖的诱导猪巨噬细胞迁移，其主要的机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排，促进细胞微丝骨架的解聚、聚合，从而有利于巨噬细胞的迁移。[结论] 本研究制备了重组猪CXCL17蛋白，并探究了CXCL17调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制，为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供理论依据。

采用PMA和ox–LDL构建THP–1巨噬细胞源性泡沫细胞模型,观察不同浓度(5、10、15 nmol/L)仙人掌多糖(ODP–Ia)对泡沫细胞内脂质、胆固醇蓄积以及介导胆固醇流出的ABCA1、ABCG1、SR–BI基因表达的影响。结果显示:THP–1巨噬细胞泡沫化后胞内蓄积了大量脂质,高剂量(15 nmol/L)ODP–Ia能够显著减少胞内脂质、胆固醇蓄积,并增强ABCA1、ABCG1、SR–BI m RNA及蛋白表达(与单独ox–LDL处理组比较,P<0.05),但效果均次于阳性对照依折麦布组(P

【背景】副结核病（paratuberculosis,PTB）是由副结核分枝杆菌（Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis,MAP）主要引起反刍动物的一种慢性消耗性传染病。患病动物表现为肉芽肿性肠炎和肠道的功能失调、顽固性腹泻、渐进性消瘦、营养不良、贫血、嗜睡甚至死亡。PTB给畜牧业造成巨大的经济损失，并且严重威胁公共卫生安全。由于目前临床上对于PTB的检测和控制手段不够完善，现有的PTB疫苗保护效果不佳，并且干扰牛结核病的诊断，因此亟需研发免疫原性强、保护效果佳的疫苗以用于PTB的防控。【目的】通过筛选MAP免疫原蛋白，并对其免疫保护效果进行评价，为PTB的防控提供数据支持。【方法】根据MAP的p22、map1272c、map3531c、map3783、map3701c以及map3527这6个基因，分别构建5种重组质粒，在获得5种重组蛋白基础上，联合MONTANIDE ISA 61 VG佐剂皮下多点注射免疫小鼠，通过IFN-γ ELISPOT试验筛选出最佳免疫原；随后将最佳免疫原和已报道的66NC融合蛋白混合，经皮下多点注射免疫小鼠，在二免3周后用1×10~8 CFU的MAP K-10菌株腹腔感染小鼠。通过IFN-γ ELISPOT试验，抗体监测和细胞因子检测，分析感染后小鼠的体重、肝脏病理学和组织病理学变化及其荷菌数差异，综合评价候选亚单位疫苗的免疫原性和免疫保护效果。【结果】以MAP p22、map1272c、map3531c、map3783以及map3701c为基础成功构建和表达了5种融合蛋白58F、62F、69F、46F和52F，其中免疫58F后产生的IFN-γ水平最高，是更具潜力的候选免疫原，且以融合蛋白组合66NC+58F诱导持久高滴度的IgG、IgM、IgG1和IgG2a水平，诱导特异性的IFN-γ、TNF-α和IL-17A的释放；在保护效果评价中，融合蛋白组合66NC+58F抵抗MAP感染造成的体重下降，显著减轻肝脏的病理损伤，降低MAP在肝脏中的定植。【结论】融合蛋白组合66NC+58F诱导小鼠产生Th1和Th17型免疫反应，对MAP感染有着一定免疫保护作用，是PTB重要的候选亚单位疫苗。

“９０６”生长调节剂除对鸡腹腔巨噬细胞随机运动功能的影响（１２．１９±２．６５）与对照组（１１．３±３．０１）比较差异不显著外，对鸡腹腔巨噬细胞吞噬百分率（３５．３％），噬菌指数（１．６５±０．５）及Ｆｃ受体Ｅ花环形成率（３９．７％）与对照组（分别为２７．７％、１．２５±０．５、３１％）相比均差异显著，证明“９０６”生长调节剂对鸡腹腔巨噬细胞功能具有良好的促进作用，其作用机理可能与油菜素内酯有关。

“９０６”生长调节剂对鸡腹腔巨噬细胞功能的影响ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＧｒｏｗｔｈＲｅｇｕｌａｔｏｒ“９０６”ｏｎＦｕｎｃｔｉｏｎｏｆＰｅｒｉｔｏｎｅａｌＭａｃｒｏｐｈａｇｅｓｉｎＣｈｉｃｋｅｎ￥“９０６”生长调节剂是一种含有油菜素内酯（Ｂｒａｓｓｉｎｏｌ...