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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
戴津泼 华松 张涌
利用PCR反应延伸过程中,3′端碱基不配对,PCR反应不能启动的等位基因特异性PCR分析法(AS-PCR)原理,采用生物软件DNASTAR分析牛、羊线粒体细胞色素b(Cytb)基因,以牛、羊碱基差异较大位点作为上游引物的3′端来设计引物,进行PCR扩增反应,分析牛羊异种克隆胚中线粒体的变化情况。结果表明,AS-PCR法是一种快速、有效鉴定异种重构胚中线粒体异质性的方法。
关键词：
AS-PCR 核移植 线粒体 细胞色素b
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘晓燕 杨梅 张寒莹 王正朝 汪立琴 陈童 郭志勤 王锋
【目的】利用核移植技术生产异种重构胚,研究供体细胞对异种核移植效率的影响。【方法】以新疆盘羊和绵羊耳皮肤组织建立成纤维细胞系,进行细胞遗传学分析;以来自不同个体、不同代次、不同汇合度和不同保存方式的盘羊成纤维细胞为核供体,当地绵羊卵母细胞为受体,进行异种重构胚的构建。【结果】来自3只盘羊耳皮肤成纤维细胞的异种重构胚的卵裂率与囊胚率均无显著差异;采用10代以内的细胞作为核供体,细胞代次不会影响重构胚的发育率;生长到70%～80%汇合的供体细胞重构胚的囊胚率显著高于刚完全汇合组和汇合2～4d组;将供体细胞4℃保存2d,虽降低了卵裂率,但囊胚率没有受到显著影响;盘羊的染色体数目为2n=56,核型式为...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赛务加甫 张立 杨丽 彭新荣 郭志林 李向臣 权富生 安志兴 郑月茂 赵雪 张涌
以山羊皮肤成纤维细胞为供体细胞,绵羊去核卵母细胞为受体细胞进行种间体细胞核移植,构建山羊-绵羊重构胚,并对其采用离子霉素联合6-DM AP法和胞质注射绵羊精子提取物法进行激活,比较两种不同激活方法对山羊-绵羊种间体细胞核移植重构胚的激活效果。结果表明,共构建获得山羊-绵羊重构胚238枚,重构胚在体外能够发育至囊胚阶段;离子霉素联合6-DM AP法激活的卵裂率为58.33%(70/120),囊胚发育率为4.28%(3/70);胞质注射绵羊精子提取物法激活的卵裂率为63.55%(75/118),囊胚发育率为6.66%(5/75),两种方法的激活效果差异不显著。
关键词：
异种核移植 成纤维细胞 激活 山羊 绵羊
[期刊] 华北农学报
[作者]
汪立芹 王静 赵云程 林嘉鹏 黄俊成
旨在研究羔羊、胎儿成纤维细胞、绵羊类胚胎干细胞及处理方式对核移植效率的影响。比较了羔羊皮肤成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;胎儿成纤维细胞饥饿及消化后平衡时间对细胞可用率的影响;羔羊成纤维细胞、胎儿成纤维细胞、类胚胎干细胞在可用率及对融合率的差异和类胚胎干细胞与转基因羔羊皮肤成纤维细胞对核移植效率的影响。结果表明,饥饿对胎儿成纤维细胞可用率影响不大(P>0.05),但平衡时间影响极大(P<0.01);饥饿及平衡时间对胎儿成纤维细胞影响都很显著(P<0.01);胎儿成纤维细胞的可用率极显著高于类胚胎干细胞和羔羊皮肤成纤维细胞(P<0.01),融合率显著高于羔羊(P<0.05),但...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李俊杰 李俊 孙洁 桑润滋
【目的】提高山羊卵丘细胞核移植效果。【方法】采用秋水仙胺提高山羊卵母细胞去核率,5-氮-2'-脱氧核苷(5-aza-dC)和曲古菌素A(TSA)影响山羊卵丘细胞核移植胚胎。【结果】0.5μg·ml-1秋水仙胺处理山羊卵母细胞效果最好,胞质突起率达91.7%(P<0.05);通过比较盲吸去核法与化学辅助去核法的去核率及构建卵丘细胞核移植胚胎的体外发育能力发现,化学辅助去核法的去核率达100%,所构建的重构胚体外发育能力较高,桑椹胚率和囊胚率分别达25.2%和13.1%,显著高于盲吸去核法(P<0.05)。采用0.01μmol·L-1的5-aza-dC处理山羊卵丘细胞,核移植胚胎桑椹胚率和囊胚率分...
关键词：
山羊 卵丘细胞 核移植效果
[期刊] 华北农学报
[作者]
贾瑞贞 李煜 杨利军 黄翔华
研究了牛体细胞核移植过程的去核方法、融合条件等对重构胚发育的影响,旨在探索一种简化的核移植操作程序。结果表明,添加FSH,LH,最高成熟率为81.7%。在电压为2.6 kV/cm时,融合率为93.96%。激活后重构胚在压制的WOW内进行培养,采用半卵法去核的卵裂率和8-细胞发育率分别为61.2%和3.27%,盲切法去核的卵裂率和8-细胞发育率分别是70.8%和7.56%。
关键词：
体细胞 核移植 徒手克隆 牛
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨月春 王士勇 李钟淑 李福俊 方南洙
为了研究延边黄牛体细胞克隆胚胎内部的活性氧水平,以延边黄牛孤雌激活胚胎为对照,用2,′7′-二氯荧光素二乙酸酯和二氢乙锭两种染料分别对体细胞克隆胚胎进行染色,测定其内部超氧阴离子和过氧化氢含量。结果表明,2细胞期处理组间超氧阴离子水平差异不显著(P>0.05),其它细胞期体细胞克隆组均显著高于孤雌激活组(P<0.05),过氧化氢水平各细胞期体细胞克隆胚胎均显著高于孤雌激活胚胎(P<0.05)。因此,延边黄牛体细胞克隆胚胎氧化损伤水平显著高于孤雌激活胚胎。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹俊伟 马利兵 张弛 毕聪明 赛务加甫 舒建洪 华松 张涌
以牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体细胞,比较了不同同步化诱导方式(血清饥饿法与接触抑制法)、供体细胞冷冻与否、供体动物性别与年龄等因素对体细胞核移植效率的影响。结果表明,接触抑制法处理的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于饥饿法(P<0.05);未冷冻的供体细胞核移植胚囊胚率显著高于冷冻供体细胞(P<0.05);成年母牛供体的囊胚率显著高于成年公牛(P0.05)。试验表明,以接触抑制法诱导未冷冻成年母牛外耳皮肤成纤维细胞为核供体,有利于核移植胚囊胚的发育。
关键词：
牛 供体细胞 体细胞核移植 胚胎发育
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
薛振华 潘登科 朱振营 罗学明 云鹏 王晓凤 肖炜
为探讨体细胞核移植技术用于种公猪的实际生产,复制优秀种公猪的可行性,精选优秀种公猪作为供体,取其耳组织成纤维细胞作核供体,体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎,胚胎体外培养后进行移植。试验先后移植了3 437枚1～4细胞期克隆胚胎到18头受体母猪的输卵管内,28d经B超检测,有16头受体母猪妊娠(88.89%),11头妊娠足月(68.75%)分娩产下53头仔猪,体细胞克隆猪的生产效率为2.80%(出生仔猪/移植胚胎)。早期生长性状测定结果显示,0和7d时克隆猪的体质量和体尺与普通公猪无显著差异(P>0.05)。利用体细胞核移植技术生产克隆种公猪,可以延伸种公猪的利用时间和空间,放大优秀种猪...
关键词：
种公猪 体细胞核移植 胚胎移植 克隆
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
剧世强 赵雪璠 张妍婷 孔妍 李建珅 芮荣
以小鼠卵丘细胞为供核细胞,猪体外成熟去核卵母细胞为受体,构建小鼠-猪种间体细胞核移植(iSCNT)胚胎,并以猪体细胞核移植(pSCNT)胚胎为对照,采用开放式拉长细管(OPS)法对所获iSCNT胚胎进行冷冻保存,研究不同冷冻保护液(ES、EFS和EDFS)及胚胎不同发育阶段(2-、4-、8-细胞)对冷冻效果的影响。结果显示:小鼠-猪iSCNT胚胎卵裂率与猪pSCNT胚胎相比无显著差异(P>0.05),但其8-细胞发育率则明显较低(28.1%对56.8%,P<0.05)。采用ES液作为冷冻保护液,iSCNT胚胎冻后存活率与EDFS组相似,但显著高于EFS组(28.6%和22.7%对9.5%,P<...
关键词：
种间核移植 胚胎 玻璃化冷冻
[期刊] 中国农业科学
[作者]
潘晓燕 于永生 刘晓辉 王正朝 王晓阳 朴庆林 张立春 金海国
【目的】利用体细胞核移植技术制备转毛角蛋白Ⅱ型中间丝K2.9基因的高绒质绒山羊胚胎,为绒山羊优良品种的培育提供一种全新的技术材料。【方法】以含有Neor基因标记的K2.9毛囊特异表达载体pcDNA3.1-K转染绒山羊胎儿成纤维细胞,经G418筛选获得转K2.9基因细胞,将获得的转基因阳性细胞与体外成熟的绒山羊卵母细胞进行核移植,并对生产的重构胚进行了体外培养。本文分别进行了激活方法、供体细胞和卵母细胞来源的筛选,且对获得的囊胚进行了PCR鉴定。【结果】(1)Iono+6-D对成年羊卵母细胞的孤雌激活效果好于A23187+6-D,显著提高了胚胎的卵裂率。(2)羔羊孤雌胚的卵裂率显著低于成年羊,但...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王亚刚 隋丽娜 彭新荣 赛务加甫 郭志林 李向臣 王勇胜 张涌
分离牛卵母细胞,分别用添加表皮生长因子(EGF)和发情牛血清(发情当天血清(OCS(0 d))和发情第7天血清(OCS(7 d)))的培养液进行成熟培养后去核,构建牛体细胞核移植胚并进行体外培养,研究EGF和OCS对卵母细胞成熟及核移植胚体外发育的影响。结果表明EGF添加组和OCS(0 d)添加组卵细胞的成熟率及核移植胚的卵裂率和囊胚率分别为74.5%,84.6%,25.9%和83.9%,78.8%,31.3%。在牛卵母细胞成熟液中添加EGF、OCS(0 d)更有利于牛核移植胚胎的发育。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱玉霞 王玉涵 李钟淑 方南洙
为确定延边黄牛体细胞核移植过程中卵母细胞的最佳去核时期,本试验选取体外成熟22 h的中期(MⅡ期)卵母细胞与体外成熟28 h的末期(TⅡ期)卵母细胞进行化学辅助去核操作,并将去核的卵母细胞作为受体构建重构胚,后期观察发育情况。结果显示,M期卵母细胞的显核率与TⅡ期卵母细胞的显核率无显著差异;但是TⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率均显著高于MⅡ期卵母细胞所得重构胚的卵裂率及囊胚率。综上所述,卵母细胞体外成熟28 h后的TⅡ期可作为延边黄牛核移植去核操作的理想时期,在TⅡ期卵母细胞中选择化学辅助去核法去核能够提高延边黄牛体细胞克隆的效率。
[期刊] 华北农学报
[作者]
林峰 渊锡藩 张英汉 李峰
为了开发波尔山羊胚胎移植技术 ,提高群体繁殖力 ,采用两种超数排卵方法对 67只波尔山羊进行处理 ,结果表明 :FSH法的获胚平均数、获胚率、可用胚平均数极显著高于FSH -HCG法 (p
关键词：
波尔山羊 超数排卵 胚胎移植
[期刊] 水产学报
[作者]
余来宁 危起伟 张繁荣 杨东 姚雁鸿 刘红艳
为了保存濒危鱼类中华鲟种质资源,对其囊胚细胞和原肠细胞进行了冷冻保存和核移植试验。用二甲亚砜(DMSO)、1,2-丙二醇(PG)、羟乙基淀粉(HES)3种抗冻剂,配制4种冷冻保护液:CP1(12%D)、CP2(10%P)、CP3(8%D+6%E)、CP4(7%P+6%E),冷冻细胞存活率分别为47.4%±4.7%、64.4%±3.6%、54.7%±4.7%、76.7%±5.7%,CP4保存效果最好,说明添加非渗透型抗冻剂羟乙基淀粉能提高冷冻保存细胞的存活率。比较了两种冷冻方法,发现细胞在-7℃平衡30min之后直接投入液氮的一步冷冻降温法是可行的。对不同发育时期的胚胎细胞冷冻存活率进行了比较,...
关键词：
中华鲟 胚胎细胞 冷冻保存 核移植
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