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[期刊] 中国农业科学
[作者]
龚宜超 董雅娟 柏学进 封纪武 李兴芳 刘昌菊
【目的】利用分子生物学方法探讨5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Aza)体外诱导牛骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)向心肌细胞的分化,为转基因良种肉牛培育提供种子细胞,提高转基因效率。【方法】利用获取的纯化稳定的P4、P8、P12代BMSC各经5、10、15μmol·L-1的5-Aza进行体外诱导分化,统计并计算心肌细胞的转化率,对诱导出现的心肌样细胞进行形态学观察和RT-PCR鉴定。【结果】诱导后细胞大多呈现梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成。相同代数的BMSC在10μmol·L-1的5-Aza作用下诱导效果最佳;在相同浓度的5...
关键词：
骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷 心肌细胞
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王绩 李维琳
本文论述了用ＣＣＤ图像传感器实现核酸电泳凝胶图像的实时检测及图像处理与分析的系统。该系统不仅可以同时检出核酸的分子量和核酸的浓度等往往需要用不同的方法和多种仪器分析和计算才能得到的参数，还提高了测量的精度和实验工作效率，使传统凝胶图像的记录与分析智能化。
关键词：
CCD 核酸电泳 图像处理
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
孔红 成仿云
滇牡丹Paeonia delavayi是中国西南地区特有种,其分类一直存在争议。回顾了滇牡丹的分类历史和分类处理,综述了滇牡丹在细胞学及分子生物学的研究现状及进展,着重介绍了滇牡丹的染色体核型、Giemsa C-带、同工酶生化标记、分子标记及基因序列测定等研究成果,认为染色体核型、Giemsa C-带、同工酶生化标记、分子标记等结果支持将滇牡丹复合群归并为滇牡丹一个种的分类处理,基因序列分析只涉及滇牡丹的2个居群,认为二者亲缘关系很近。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈泽斌 任禛 夏体渊 王定康 陈兴位 林丽 靳松 徐胜光 华金珠 何峰
厌氧氨氧化（ＡｎＡｅｒｏｂｉｃ Ａｍｍｏｎｉｕｍ ｏｘｉｄＡｔｉｏｎ，ＡｎＡｍｍｏｘ）在海洋氮素循环中起了重要作用，而有关天然淡水生态系统中厌氧氨氧化菌的研究报道并不多。为探索滇池沉积物中是否存在厌氧氨氧化菌及厌氧氨氧化菌的种类，以滇池沉积物总ｄｎＡ为模板，Ｐｃｒ扩增沉积物样品中厌氧氨氧化菌特异性１６Ｓ ｒ ｄｎＡ片段，通过构建克隆、测序，将文库中有效克隆序列分别提交到Ｇｅｎ ｂＡｎｋ中进行相似序列搜索，并利用ｍｅＧＡ４．０绘制系统发育树。分析发现，滇池沉积物中存在厌氧氨氧化菌，且种群多样性水平低，低于目前已报道的大部分自然生态系统，所有克隆序列与已发现的厌氧氨氧化菌ｃＡｎｄｉｄＡｔｕＳ ｂｒ．．．
[期刊] 实验技术与管理
[作者]
李佛生 汪红 李一璠 王甜 樊佳 王茂林 林宏辉
为了丰富分子生物学实验教学内容,加深学生对分子杂交原理等专业理论知识的理解,在分子生物学实验教学中开展液相Northern杂交检测microRNA的实验探索。利用荧光标记的寡核苷酸做探针,通过探针灵敏性、杂交温度、杂交时间和杂交液等不同杂交条件的探索,从而简便、准确、灵敏地杂交检测不同植物中的microRNA。整个实验过程仅需几个小时即可完成,且实验结果直观生动。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
皇甫一凡 昝林森 王洪宝 成功 刘扬 高建斌 李耀坤 杨宁
【目的】建立稳定成熟的牛成肌细胞胰岛素诱导成脂分化体系,为肉牛肉脂品质的改良提供参考。【方法】取1日龄荷斯坦公牛犊后腿肌肉,用Ⅳ型胶原酶消化法分离成肌细胞,用胰岛素诱导成肌细胞成脂分化,以未添加胰岛素的培养基为对照组,检测成肌细胞成脂分化过程中细胞形态的变化,并分析与成肌细胞和脂肪细胞分化相关基因(C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ、Myf5、MyoD)分别诱导第3,6,9,12,15天相对表达量的变化,分析牛成肌细胞的诱导分化情况。【结果】成功分离培养了牛原代成肌细胞。胰岛素处理组细胞中脂滴的油红O染色明显,C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ和MyoD相对表达量明显增高...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘雨潇 华进联 张慧茹 窦忠英
对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明...
关键词：
心肌细胞 体外培养 小鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘霞 王常勇
为获得高纯度和高存活率的心肌细胞,探索心肌细胞大量培养的条件,并为进一步研究心肌细胞的细胞生物学特性奠定基础,同时为生理学和药理学研究提供细胞来源,试验采用胰蛋白酶顺序消化法及差速贴壁法,从1～2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,观测心肌细胞的形态、结构、搏动状态和反映心肌细胞代谢状况的生化参数。结果表明,分离所得的心肌细胞纯度高,培养第3天就开始自发搏动,后连接成片,进而同步收缩;心肌细胞的亚显微结构包括肌丝、Z线、线粒体和大量糖原颗粒,葡萄糖比消耗率为7.44nmol/(个·d),乳酸比产率为3.83nmol/(个·d),乳酸转化率为51%,细胞代谢非常旺盛,说明试验培养条件有利于心...
关键词：
心肌细胞 细胞分离 细胞培养 大鼠
[期刊] 华北农学报
[作者]
胡晓婷 宋福平 冯书亮 杜立新 宋健
简要描述了苏云金芽孢杆菌近年来分子生物学研究的进展情况,重点阐述了cry基因鉴定方法。另外分析了目前转基因植物与基因工程菌的研究,并对今后的研究进行了展望。
关键词：
苏云金芽孢杆菌 分子生物学
[期刊] 草业科学
[作者]
程航 陈玲玲 夏方山 闫慧芳 毛培胜
种子作为最基本的生产资料,是农业生产得以发展的必要条件。老化将导致种子质量下降,最终失去生命力,给生产带来巨大经济损失。因此,研究种子老化机制对寻找应对种子老化的办法具有重要的意义。目前,关于种子老化的研究大多集中在生理生化变化方面,而随着分子生物学技术的飞速发展,合理运用这些技术,必将使从更深层次解释种子老化机制成为可能。本文对近年来种子老化分子生物学方面研究取得的成果进行了综述,发现种子老化后其遗传完整性降低,与能量代谢、信号转导、刺激响应、衰老死亡以及糖酵解途径等相关的基因表达发生变化,一些与脂质过
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘俊平 曹鸿国 安志兴 赵慧英 温叶飞 张涌
对采用组织块法分离培养的大鼠心肌细胞进行了鉴定及相关的生物学特性研究,以进一步用于心脏细胞工程、组织工程的种子细胞及其他方面的研究。结果显示,分离培养出的心肌细胞呈多种形态,整体形如铺路石样,生长中的心肌细胞常伸出伪足,形状为星形,培养至第4天的心肌细胞常可相互交织形成细胞簇,出现节律性的搏动;心肌细胞的PAS糖原染色呈阳性,胞浆内大量的糖原颗粒被染成品红色;细胞凋亡-Hoechst检测试剂盒荧光染色显示,心肌细胞核内荧光物质分布均匀一致,没有出现细胞凋亡时所特有的荧光致密浓染或碎块状致密浓染现象;对第1代和第6代心肌细胞生长曲线测定显示,心肌细胞生长曲线呈"S"型,2代心肌细胞生长曲线趋于...
关键词：
SD大鼠 心肌细胞 生物学特性
[期刊] 世界农业
[作者]
胡美华 陈竹君
植物的胞系雄性不育的机理十分复杂，国内外学者从细胞形态学、组织化学以及生理生化等各方面对败育的机理进行了广泛研究，但败育的机理仍是个难解的谜。从理论上讲，胞质雄性不育系经多代回交转育后同保持系在核基因组成上是一致的，因此雄性不育系和保持系育性的表达差...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭志林 王新庄 张涌 王木 王轶敏 胡文举
采用大鼠心肌细胞条件培养基对兔胚胎干细胞(Embryonic stem cells,ESC)进行分离、传代培养,研究大鼠心肌细胞条件培养基对兔ESC分离培养效果的影响。结果显示,用SD大鼠心肌细胞条件培养基培养的兔ESC集落呈岛屿状生长,碱性磷酸酶染色呈强阳性,体外分化可形成类胚体状结构,贴壁的类胚体周边会出现许多分化的上皮样细胞或单个散在的细胞;常规冻存后再传代的兔ESC集落具有较为一致的生长特征,并呈现胚胎干细胞集落所特有的岛屿状生长形态;传至第5代的兔ESC集落核型正常率>75％。表明SD大鼠心肌细胞条件培养基可用于兔胚胎干细胞分离培养。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈吉刚 陈维虎 周继勇 王金勇 齐静 郑肖娟 俞照正 孙红霞
将去除信号肽的鸡IL-2基因编码框克隆到原核表达载体pBAD/HisB,实现了重组鸡IL-2(rchIL-2)蛋白在大肠杆菌中的高效表达。SDS-PAGE分析显示,表达蛋白的分子量约为18kD。用rchIL-2为抗原制备了单克隆抗体和多克隆抗体,建立了检测rchIL-2含量的抗原捕获ELISA,探讨了天然chIL-2蛋白的体外表达动力学。非变性条件下纯化的rchIL-2(0.4ng)对ConA活化的鸡T淋巴细胞具有明显的增殖活性,而对鸭及鹅的T淋巴细胞无增殖活性。抗chIL-2多克隆抗体可完全中和rchIL-2和天然chIL-2蛋白的生物学活性,而单克隆抗体无中和rchIL-2和天然chIL-...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
吴鑫杰 陈楠 黄春筱 王慧娟 王卫民 王焕岭
以团头鲂为研究对象，采用ＨＥ染色及电镜方法观察低氧对心脏组织结构的影响。结果显示，低氧可导致团头鲂心脏组织结构的变化及线粒体损伤；通过ＴＵＮＥＬ及荧光定量ＰＣＲ检测发现低氧能诱导心肌细胞凋亡并引起抑凋亡基因ＢＣＬ－２表达量的变化；基于蔗糖梯度离心法提取心脏线粒体，并分析线粒体中ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活性的变化，结果显示低氧（ＤＯ：（２．５±０．５）Ｍｇ／Ｌ）可引起团头鲂心脏线粒体中ＭＤＡ含量及ＳＯＤ活性的降低。
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