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[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
吴田 蓝增全
分析已发表的植物1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)合成酶(ACS)基因序列,设计一对简并引物,在随机选择的非洲菊、月季、桂花、茶梅和山茶等5种植物花瓣cDNA中进行PCR扩增.结果表明,在5种植物花瓣中都能扩增出约800 bp的特异片段,登录GenBank发现均未被注册,因此将序列提交到GenBank并获得了序列号.在NCBI上进行Blast比对,发现所克隆的5个ACS基因均与其他植物花瓣的ACS基因有一定的序列相似性,最高达94%,最低为80%.将5个ACS基因的片段进行多序列比较分析,发现茶梅ACS基因与山茶ACS基因的序列差异最小,序列相似性达99%.本试验设计的ACS基因简并引物在植物...
关键词：
ACS基因 简并引物 基因克隆
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
吴田 蓝增全
为获得通用的适用于植物花瓣ACO基因克隆与检测的引物,根据Genbank中收录的双子叶木本植物的ACO基因序列,设计1对简并引物,并用其对随机选择的7种植物(紫罗兰、多头菊、冬樱、迎春、云南杜鹃、垂丝海棠、山茶)的花瓣的RNA进行PCR扩增。结果发现:从7种植物花瓣中都能扩增出约800 bp的特异片段,登录Genbank发现均未被注册,将序列提交Genbank数据库,获得7种植物花瓣ACO基因的登录号(JX503067、JX503068、JX503069、JX503070、KC112390、KC112392、KC112393);在NCBI上进行blast比对,发现所克隆的7个ACO基因均与其他...
[期刊] 华北农学报
[作者]
范丙友 高水平 刘改秀 史国安 李嘉珏 孔祥生
根据GenBank登录的牡丹ACS基因DNA全长序列(FJ769773),设计一对特异性引物,在优化的PCR扩增体系的基础上,应用高保真DNA聚合酶KOD-Plus从洛阳红牡丹叶片总DNA中扩增出牡丹ACC合成酶基因片段PsACS-4。测序结果表明:克隆序列长970 bp,不包含牡丹ACS基因内含子序列,与目标序列同源性达100%;用SacI和SmaI对重组质粒和空载体pBI121双酶切、连接,将PsACS-4基因片段反身插入到植物表达载体pBI121的35S启动子下游,成功构建了牡丹ACS反义基因植物表达载体。
关键词：
牡丹 ACC合成酶 反义植物表达载体
[期刊] 华北农学报
[作者]
符秀梅 朱红林 周秀 李小靖 陈银华
乙烯在植物生长发育过程中发挥着重要的作用。ACC氧化酶是乙烯生物合成途径的限速酶。通过反义基因工程调控ACC氧化酶基因的表达,进而起到调控乙烯的生成是乙烯研究的主要途径。本研究采用RT-PCR方法获得番茄ACC氧化酶基因cDNA序列1 018 bp,构建该基因的正义、反义、RNA i表达载体,通过电转化法导入农杆菌LBA4404中。
关键词：
番茄 ACO基因 cDNA 表达载体构建
[期刊] 草业科学
[作者]
郭欢 崔彦农 吴凡 张乐 许香玉 包爱科
在研究植物功能基因表达模式中肌动蛋白(Actin)编码基因是最常用的内参基因之一。本研究根据藜科植物Actin基因编码区保守序列设计一对简并引物,以盐生植物四翅滨藜(Atriplex canescens)4周龄幼苗叶片的总RNA为模板,采用逆转录PCR(reverse transcription PCR,RT-PCR)方法扩增出Actin基因片段并连接到pMD19-T载体上,所得阳性克隆经PCR检测后进行测序。序列分析结果表明,该基因片段长度为598bp,编码198个氨基酸;该序列与Genbank中登录的
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶晓霞 周兴文 刘雪琴 刘欣 符慧文 吴有栋 赵仕花
【目的】分析8种黄色花植物花瓣的解剖结构、色素含量和有色体分布情况，探寻黄色花花瓣的呈色规律，为黄花观赏植物花色的呈色机理研究提供理论依据。【方法】利用光学显微镜观察8种黄色花植物花瓣的表皮细胞、栅栏组织及其色素分布情况，分析表皮细胞形态特征及有色体分布特征；利用分光光度计测定花瓣中的类黄酮和类胡萝卜素含量，分析主要呈色色素的分布规律，探究黄色花花瓣的呈色机理。【结果】在8种黄色花植物花瓣细胞中，除黄槿和黄花菜外，其余6种植物花瓣中均观察到有色体分布。花瓣中的花色素和有色体主要分布在上、下表皮和栅栏组织，有色体的形状多为球状和结晶状。花瓣表皮细胞的形状表现为不规则形和多边形（包括长多边形），垂周壁样式有浅波形、深波形、平直形或弓形；上表皮细胞大多呈不规则凸起，下表皮细胞凸起幅度小。崇左金花茶、黄槐、黄花夹竹桃、蟛蜞菊和黄蝉的类胡萝卜素含量较高，而黄槿、黄花菜和黄花美人蕉的类胡萝卜素含量相对较低。其中，黄花夹竹桃的类胡萝卜素含量最高，且显著高于黄槿、黄花菜和黄花美人蕉（P<0.05，下同），黄槿的类胡萝卜素含量最低，且显著低于黄花夹竹桃、崇左金花茶、黄槐、蟛蜞菊和黄蝉；黄槐的类黄酮含量最高，且显著高于黄花菜、黄蝉、黄花夹竹桃、黄花美人蕉和黄槿；而黄蝉和黄花菜的类黄酮含量较低，显著低于崇左金花茶、黄槐、黄花夹竹桃、蟛蜞菊和黄槿。【结论】黄色花植物花瓣中色素种类、有色体的分布及花瓣表皮细胞的形态特征均影响其花色形成和呈色。其中，类胡萝卜素和类黄酮含量越高，有色体在花瓣表皮细胞中的分布越集中，花瓣颜色就越深，呈色效果就越明显。因此，在开展黄色花呈色机理研究过程中需着重分析色素种类、含量及有色体分布和表皮细胞的形态特征。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
程影 黄锐之 钟新民 侯喜林 吴学龙 王五宏 李必元 刘智宏
采用PCR克隆技术,根据已报道的拟南芥的AtHSP22基因全长及其他物种同源序列设计特异引物,在十字花科植物大白菜、普通白菜、芥菜型油菜、甘蓝型油菜、花椰菜、芥菜、荠菜、萝卜3个属10个物种中成功克隆得到耐热相关基因HSP22的同源序列10条。序列比对分析表明:这些同源序列的相似性达89.3%以上,所推导的氨基酸序列相似性达92.1%以上。由进化树可直观地看出,芸薹属与荠属亲缘关系最近,首先聚为一类;其次与萝卜属、拟南芥属聚为一类。由氨基酸序列预测的高级结构存在明显差异,且无规则卷曲最多,α-螺旋均在30%以上,因而属于α结构蛋白。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄小云 陈再刚 杨俊年 胡廷章
利用RT-PCR技术,通过同源克隆从辣椒中分离到CaCOI1.2基因,采用生物学软件对序列进行生物信息学分析,采用实时定量RT-PCR技术分析基因的表达模式。结果表明:克隆到的CaCOI1.2基因长度为2041 bp,推测其读码框大小为1812 bp,编码603个氨基酸。在CaCOI1.2蛋白质N-端有一个F-box结构域,C-端有6个富含亮氨酸结构域。CaCOI1.2蛋白的氨基酸与已知其他植物COI1蛋白序列有53.03%~93.37%的一致性。聚类分析结果显示:CaCOI1.2与番茄、烟草和葡萄等双子叶植物的亲缘关系较近,而和水稻、玉米、高粱等单子叶植物的亲缘关系较远。CaCOI1.2在辣...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
阮小蕾 刘丽芳 陈秀 何自福 李华平
通过分析多种不同来源的植物RIPs的氨基酸序列,据其保守区域设计1对植物通用简并引物P1、P2,对基因组进行PCR扩增,分别从海芋Araceae macrorrhiza、烟草Nicotiana tobaccum、剑麻Agavaccae aga-ve、望江南Cassia occidentalis、那坡指天蕉Musaspp.(BB)、邻水野蕉Musaspp.(AA)中获得1个基因片段。BLAST分析表明:它们推导的氨基酸序列只与多种不同来源的RIPs有相似性。其中,与葫芦科2个代表RIP相应区段的相似性最高,与-βluffin基因的相似性分别为97.2%、98.5%、97.9%、89.4%、97....
关键词：
核糖体失活蛋白 基因克隆 序列分析
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
潘德灼 林伟彬 谭芳林 陈伟
以秋茄(Kandelia candel)叶片为试验材料,采用RT-PCR的方法获得秋茄查尔酮合酶(chalcone synthase,CHS)基因的cDNA序列,命名为KcCHS,GenBank登录号为KX673194.1.序列分析结果表明,KcCHS基因的cDNA序列长度为1170bp,编码389个氨基酸,属于CHS超家族.序列比对结果显示,秋茄与其他物种的CHS基因核苷酸序列具有较高的相似性,平均达到80%以上.系统进化分析显示,KcCHS基因与余甘子CHS基因亲缘关系最近.实时荧光定量PCR分析表明
关键词：
秋茄 查尔酮合酶基因 克隆 盐胁迫
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈佳 马俊莲 张子德 唐霞
从上西早生(Uenishiwase)柿叶片中,提取了基因组DNA。以基因组DNA为模板,经PCR扩增,克隆到一个549 bp的ETR5的DNA片段。序列分析表明,上西早生柿基因与洋梨ETR5的核苷酸同源性为79.0%,氨基酸同源性为81.0%;并且含有其他植物ETR5的保守氨基酸区和不变氨基酸残基,表明克隆到的序列是上西早生柿ETR5的基因片段。设计了2对带限制性内切酶位点的特异性引物,以测序质粒为模板,PCR扩增到2个ETR5-Uenishiwase片段。2个片段经单酶切消化后连接成反向互补的大片断。连接片断经双酶切消化后,连接到植物表达载体pBI221上,构建成Uenishiwase-ET...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
赵露 苑雪琪 李俊 杨雪梅 魏云洁 许永华
[目的]克隆白屈菜CmTLP基因并进行植物表达载体构建,为进一步研究CmTLP基因的功能及探索耐寒抗寒药用植物分子育种奠定基础。[方法]基于白屈菜转录组数据,分析得到白屈菜TLP基因开放阅读框,以18S RNA为内参基因,采用qRT-PCR法检测CmTLP基因在不同温度(20(CK),10,0,-7,-20℃)下白屈菜植株中的相对表达量。用RT-PCR法克隆该基因并构建植物表达载体,电击法转化根癌农杆菌。[结果]qRT-PCR结果表明,CmTLP基因在-7℃、12 h时,相对表达量最高;-7℃、24 h时,相对表达量最低。克隆白屈菜TLP基因,命名为CmTLP。该基因开放阅读框长度为696 bp,编码由231个氨基酸组成的肽链;分子质量为24.66 ku,为酸性蛋白。系统发育树表明,CmTLP基因与博落回、月季、胡桃的氨基酸序列有较高的同源性。构建了植物表达载体pRI201-AN-CmTLP,并成功转化根癌农杆菌。[结论]克隆了白屈菜CmTLP基因,构建植物表达载体pRI201-AN-CmTLP,并成功转化根癌农杆菌。
关键词：
白屈菜 植物表达载体 抗寒机理 类甜蛋白
[期刊] 世界农业
[作者]
俞志华
基因是染色体上具有一定座位的遗传单位,是ＤＮＡ分子中一定长度的核苷酸序列。植物的生长发育是在多种代谢和生理过程基础上所发生的基因在时空上表达的综合现象,开发和分离潜在的各种有价值的基因并深入研究其表达机理,对作物品种的改良具有重要意义。因此对植物基因的?..
[期刊] 草业科学
[作者]
刘津岐 刘永萍 张俊逸 文阳兴家 楚光明
本研究基于盐爪爪属(Kalidium) 5种植物共503个地理分布点和29个环境变量，运用ArcGIS和最大熵模型(MaxEnt)，分析了其在基准和未来时段不同气候情景下的潜在适生区、驱动因子及其生态位参数，并利用土地利用数据与基准时段下盐爪爪属5种植物的高适生区进行叠加分析。结果表明：1)盐爪爪属5种植物适生区分布的主要驱动因子存在差异，但气候因子是所有盐爪爪属植物适生区分布的主导因子，地形和土壤对适生区分布的贡献率相对较小。2)与基准相比，只有2050时段RCP 8.5气候情景下里海盐爪爪(Kalidium caspicum)的中、高适生区面积有所收缩，其余各时间段不同气候情景下盐爪爪属5种植物中、高适生区面积都出现了不同程度的扩张。3)盐爪爪属5种植物中、高适生区主要驱动因子的生态位参数存在差异。4)基准时段下盐爪爪属5种植物的高适生区部分土地已经被开发利用。本研究对盐爪爪属分布区的管理、保护与利用具有一定的理论意义与参考价值。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
鲁彦君 韩彦莎 李妮亚 侯佩臣 黄旭新 邓澍荣 赵瑞 沈昕 陈少良
【目的】从秋茄中克隆液泡膜水通道蛋白KcTIP1基因,并研究其对植物耐盐性的作用机制。【方法】以秋茄幼嫩叶片为材料,通过PCR扩增克隆KcTIP1基因并构建其表达载体,采用根癌农杆菌介导法,用含重组质粒的农杆菌转化烟草植株,通过卡那霉素筛选和转基因烟草基因组PCR、RT-PCR鉴定,获得转基因再生植株;并选取其中2个阳性株系和野生型株系进行盐处理,测定野生型烟草(对照)与盐处理烟草根、茎、叶鲜质量,光合参数,叶片组织Na+、K+浓度以及根尖Na+、K+的流速。【结果】成功克隆得到了KcTIP1基因,对其编码蛋白氨基酸序列进行分析表明,秋茄KcTIP1包含MIP家族的特征序列SGGHVNPAVT...
关键词：
秋茄 烟草 KcTIP1基因 耐盐性
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