- 年份
- 2024(4619)
- 2023(6538)
- 2022(5457)
- 2021(5104)
- 2020(4359)
- 2019(9465)
- 2018(9652)
- 2017(17891)
- 2016(10084)
- 2015(11035)
- 2014(11265)
- 2013(10520)
- 2012(9807)
- 2011(8924)
- 2010(8914)
- 2009(8044)
- 2008(7981)
- 2007(7467)
- 2006(6187)
- 2005(5617)
- 学科
- 济(31568)
- 经济(31514)
- 管理(24781)
- 业(21667)
- 企(17670)
- 企业(17670)
- 方法(12623)
- 学(12372)
- 数学(10532)
- 数学方法(10316)
- 中国(9362)
- 财(9297)
- 制(8847)
- 农(8531)
- 体(7684)
- 理论(7283)
- 融(7020)
- 金融(7013)
- 银(6811)
- 银行(6770)
- 行(6534)
- 业经(6427)
- 地方(6355)
- 贸(5869)
- 贸易(5869)
- 环境(5783)
- 易(5716)
- 务(5663)
- 财务(5637)
- 财务管理(5620)
- 机构
- 大学(137649)
- 学院(137436)
- 研究(53512)
- 济(47616)
- 经济(46350)
- 管理(44389)
- 中国(38087)
- 理学(37859)
- 科学(37359)
- 理学院(37303)
- 管理学(36259)
- 管理学院(36014)
- 农(32991)
- 京(30020)
- 所(29561)
- 研究所(27380)
- 农业(26461)
- 业大(25684)
- 财(23921)
- 中心(23604)
- 江(21877)
- 院(19916)
- 技术(18889)
- 财经(18618)
- 范(18587)
- 省(18510)
- 北京(18453)
- 师范(18217)
- 州(17284)
- 室(17127)
- 基金
- 项目(96957)
- 科学(73953)
- 基金(68628)
- 研究(65147)
- 家(63523)
- 国家(63036)
- 科学基金(51446)
- 省(39344)
- 社会(38781)
- 社会科(36592)
- 社会科学(36580)
- 基金项目(35900)
- 自然(35274)
- 自然科(34513)
- 自然科学(34498)
- 自然科学基金(33880)
- 划(33719)
- 教育(30489)
- 资助(28220)
- 编号(25227)
- 重点(22834)
- 成果(21770)
- 计划(20781)
- 发(20329)
- 部(20187)
- 创(20055)
- 科研(19362)
- 课题(19223)
- 创新(18900)
- 科技(18832)
共检索到207680条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李薇 罗维 余兴龙 李润成 白霞 葛猛 王亚 向卫军 李晶
通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C)。将3个重组质粒分别用SacⅡ切出l 767 bp的PCV-2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化。用脂质体将3种自身环化的基因组转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法分别传代,第5代细胞培养物分别用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测转染的细胞,检测结果均为阳性,说明已获得PCV-2共3个亚群1A、1B、1C的感染性克隆。用1A、1B、...
关键词：
猪圆环病毒2 感染性克隆 基因亚群 毒力
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐彦召 王青 胡建和 余娟 陈仕均
【目的】建立一种利用ＣＭＶ启动子获得拯救猪繁殖与呼吸综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）的方法，为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒提供操作平台。【方法】根据ＰＲＲＳＶ的基因序列特征和ＣＭＶ启动子的序列特征，对ＰＢｌｕｅＳＣＰＲｉＣｔⅡＳＫ（＋）载体进行多克隆序列改造；设计特异性引物，分６段扩增、组装出ＰＲＲＳＶ的全长ＣＤＮＡ并扩增ＣＭＶ真核启动子序列；采用酶切、连接、转化等方法将连接成功病毒的全长ＣＤＮＡ置于ＣＭＶ真核启动子序列的下游，获得含有ＣＭＶ启动子和猪繁殖与呼吸综合征病毒ＣＨ－１Ａ株全长ＣＤＮＡ克隆的重组质粒ＰＳＫ－ＣＨ－１Ａ；再将重组质粒直接转染ＭＡＲＣ－１４５宿主细胞，得到猪繁殖与呼吸综合征病．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
温立斌 张丹 何孔旺 解建平 董美响
利用无缝克隆方法构建ＺＪ－Ｒ全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆；通过生物信息学技术预测ＺＪ－Ｒ病毒结构蛋白的Ｂ细胞抗原表位，人工合成选定的表位肽，然后偶联ＫＬＨ免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体；免疫组化试验证实该多抗与转染ＰＫ１５细胞的ＺＪ－Ｒ双拷贝串联分子克隆具有反应性。结果表明构建的ＺＪ－Ｒ双拷贝串联分子克隆具有感染性。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
祁小乐 高宏雷 高玉龙 邓小芸 步志高 王晓燕 王笑梅
【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究。【结果】构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P1...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王晓钧 魏丽丽 相文华 张晓燕 吕晓玲 赵立平 朱远茂 邵一鸣 沈荣显
马传染性贫血病毒(equineinfectiousanemiavirus,EIAV)驴强毒株DV是一株经过驴体传代获得的而具有超强毒力的毒株,对马和驴均可100%致死。用PCR方法分段扩增了DV其前病毒基因,将包含全基因片段的3个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到pLG338上,命名为pD70344。将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞,连续盲传3代并以反转录酶活性测定,RT-PCR鉴定其病毒活性,透射电镜观察发现细胞培养物中存在大量典型病毒粒子,证明获得了1株具有感染性的EIAV病毒粒子,命名为pD70344V。经序列测定确认了本试验首次构建了1株完全来源于EIAV强毒基因的感染性...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭龙军 陆月华 黄立平 危艳武 刘长明
【目的】中国猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)感染存在不同基因型毒株(PCV2a、PCV2b和PCV2d),有必要阐明不同基因型PCV2毒株的致病性差异。【方法】采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株,对拯救的毒株进行体外生物学特性试验。【结果】构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆,经转化细胞后拯救4个克隆毒株,经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代,病毒增殖能力稳定,毒价均可达到105.0TCID50.mL-1;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邹兴启 赵启祖 范运峰 朱元源 王琴 徐璐 范学政 宁宜宝
【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈中元 刘荭 李正秋 王敏 张奇亚
为查明养殖鲤(Cyprinus carpio)突然大批发病死亡的原因,对鲤病样品进行了细胞攻毒、空斑测定、电镜观察,以及鱼体感染等实验。先以患病鲤的组织匀浆液,经过滤后,分别接种到草鱼鳍条细胞(GCF)、鲤上皮瘤细胞(EPC)等14种培养细胞中。利用倒置显微镜观察显示,在1~2 d内,该病鱼组织匀浆液可使其中9种细胞出现典型的细胞病变。收集出现病变的细胞液(即病毒悬液),进一步进行病毒滴度检测、空斑测定和鱼体感染实验。结果显示,在GCF细胞上的病毒滴度为107.3TCID50/mL;在FHM,TSB和GCO等细胞中可产生直径1~4 mm的圆形空斑,空斑的大小与宿主细胞的种类和接种的病毒浓度有关...
关键词：
鲤 病毒 细胞培养 病毒感染 空斑实验
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张龙现 宁长申 吴宁鹏 郎利敏 贾志阳
采用鸭源贝氏隐孢子虫卵囊经口感染2日龄雏鸡,感染剂量分别为8×10~5,16×10~5,32×10~5,64×10~5个/只,设空白对照组.在 PID5,PID10,PID25各取2只鸡进行病理剖检并取其喉头、气管、法氏囊进行扫描电镜观察.在 PID20和 PID25对各试验组动物进行称重,并在 PID25全剖杀实验动物采摘法氏囊并称重;计算各组动物法氏囊与体重元比.结果表明:接种后第4 d 在各组鸡粪便中查到隐孢子虫卵囊.持续排卵囊时间25 d 左右;排卵囊高峰期分别为8×10~5为 PID8～15,16×10~5为 PID12～16,32×10~5为 PID5～16,64×
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨明生
20 0 1年 4月对彭泽鲫鱼卵感染水霉的问题进行了研究 ,设计了 11个处理组 ,对受精卵、未受精卵、死胚卵进行了观察 ,孵化 116h均未见到霉卵出现。另外探讨了孔雀石绿对胚胎发育的影响 ,使用孔雀石绿处理 ,浓度在 2 0mg L内 ,每次不超过 10分钟对胚胎发育是安全的 ,但会明显延迟出膜时间
关键词：
彭泽鲫 孔雀石绿 水霉 抗性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
商艳红 刘欣辛 李金磊 王淑娟 魏静 赵岩 崔保安 魏战勇
【目的】观察猪圆环病毒2型(PCV-2)感染对猪肾传代细胞(PK-15细胞)炎性细胞因子白细胞介素(IL)mRNA转录水平的影响,探讨宿主与病毒之间的作用关系及细胞炎性反应机制。【方法】以未感染PCV-2的PK-15细胞为对照组,运用相对定量PCR技术,测定和分析PCV-2感染PK-15细胞后,PCV-2DNA相对含量的变化,以及炎性细胞因子IL-6、IL-8、IL-12p35、IL-12p40、IL-13、IL-17、IL-18mRNA转录水平在1,6,12,24,48,和72h的变化。【结果】PCV-2感染后,PK-15细胞的IL-6、IL-13、IL-17、IL-18的mRNA转录水平在...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
王全溪 李巧苹 许文滉 罗奕梁
采集61头有呼吸道疾病症状猪的病料,采用分子生物学方法进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、PRRSV变异株、猪圆环病毒2型(PCV-2)的检测,并采集血液分离血清,用放射性免疫法检测其外周血中促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量.结果表明:PCV-2核酸阳性率为72.13%,PRRSV为39.34%,PRRSV变异株为22.95%;临床存在混合感染,特别是PRRSV与PCV-2的混合感染,感染率达16.39%;PRRSV、PRRSV变异株和PCV-2的感染均比对照组极显著地提高ACTH的含量,其中以PRRSV变异株与PRRSV的混合感染对ACTH的影响最大,ACTH含量达32.20 pg....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周斌 党占国 刘珂 陈溥言
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的E0、E2和E012基因并进行了克隆与鉴定。构建了真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假型病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假型病毒上清液,将假型病毒上清液超速离心后用抗CSFV的多抗进行Western-blot检测。结果证明E012蛋白能够在假型病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面;用其感染多种宿主细胞,48h后检测发现在猪肾细胞(SK6,PK15)和猪睾丸细胞(ST)上,标记基因...
[期刊] 中国高等教育
[作者]
王爱祥
高校思想政治教育仪式的核心要义就是社会主义核心价值观教育。尊重和处理好参与仪式的主体间关系是思想政治教育仪式体系建构所必须坚持的原则。仪式情境的完善重点在于艺术化的表达和互动功能的发挥。"道之以德,齐之以礼,有耻且格。"习近平总书记指出"礼仪是宣示价值观、教化人民的有效方式,要建立和规范一些礼仪制度,如升国旗仪式、成人仪式、入党入团入队仪式等,利用重大纪念日、民族传统节日等契机,组织开展形式多样的纪念庆典活动,传播主流价值,增强人们的认同感和归属感。"思想政治教育仪式作为表达共同理想信念、价值追求和
[期刊] 中国卫生经济
[作者]
郝一炜 刘晓宇 陈吟 路凤 贾梦 郭默宁
目的：研究北京市65家二、三级综合医院感染性疾病住院患者收治空间吸纳能力与病种结构的关联性，对感染性疾病住院医疗资源的空间利用现状进行客观分析，为相关政策的制定提供了数据支撑。方法：分别对比城6区和10郊区二、三级综合医院空间吸纳能力指标的差异性，使用象限气泡图对二、三级综合医院空间吸纳能力和病种结构的关联性进行可视化分析。结果：空间吸纳能力方面，城6区二、三级综合医院收治郊区患者占比差异有统计学意义（P=0.003），10郊区二、三级综合医院收治外区患者占比差异无统计学意义（P=0.336）；城6区二、三级综合医院和10郊区三级医院的空间吸纳能力和病种结构均呈现出明显关联性，10郊区二级综合医院则未呈现出明显关联性。结论：城6区三级综合医院的感染性疾病病种结构指标占优，空间吸纳能力明显更强，二者关联性也更强，其发挥了疑难重症感染性疾病住院服务的功能；4个远郊区仅有区综合医院能够提供感染性疾病住院服务，且收治病例数较大，满足了该区常见多发感染性疾病住院诊疗需求，应结合实际情况加强对10郊区的感染性疾病医疗资源投入和能力建设。
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
