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[期刊] 中国农业科学
[作者]
曹晓艳 冯建荣 王大江 白茹 刘月霞
【目的】从蛋白质组水平探索杏树自交不亲和的分子遗传机制。【方法】采用双向差异凝胶电泳和质谱检测技术,对自交不亲和杏品种‘新世纪’在小蕾期、大蕾期、自花授粉后24 h及异花授粉(‘新世纪’ב巴旦水杏’)后24 h的花柱进行差异性蛋白质组学研究。【结果】在‘新世纪’杏的小蕾期、大蕾期、自花授粉后24 h、异花授粉24 h后的花柱中共检测到约1 500个蛋白点,其中有66个差异表达的蛋白点。自交不亲和杏柱头对自体与异体花粉感应在蛋白质组水平有差异,其中异花授粉后花柱中特异表达的蛋白点1个,异花授粉后表达丰度明显升高的蛋白点4个,表达丰度明显降低的蛋白点29个;质谱分析只有13个蛋白质点得到归属鉴定...
关键词：
杏 自交不亲和 花柱 蛋白质组
[期刊] 中国农业科学
[作者]
齐秀娟 方金豹 陈锦永 顾红 张绍铃
【目的】了解软枣猕猴桃(Actinidia arguta)受精前和受精后(授粉前和授粉后120 h)子房蛋白质组的变化,为阐明猕猴桃属植物双受精的分子机制提供依据。【方法】应用石蜡切片技术、差异凝胶电泳(DIGE)、质谱(MALDI-TOF/TOF)和生物信息学技术,对其授粉前及授粉后120 h的子房形态及蛋白质组变化进行分析。【结果】授粉后120 h,子房中的胚囊已经完成了双受精;用DeCyder V 6.5软件分析,在授粉前、授粉后120 h的子房中共检测到约1 500个蛋白质点,其中55个有差异表达;质谱鉴定了差异2.0倍以上的蛋白质点13个,其中8个获得理想结果,分别属于6种蛋白质;在...
关键词：
猕猴桃 受精 子房 蛋白质组
[期刊] 林业科学研究
[作者]
何兴波 雷莉莉 杨绍彬 傅建敏 李芳东
采用双向凝胶电泳和质谱检测技术,对自交不亲和的杏李品种‘风味玫瑰’自花及异花授粉(‘风味玫瑰’ב恐龙蛋’)的花柱进行差异性蛋白质组学研究。研究结果表明,自花授粉与异花授粉有79个差异蛋白点,表达量差异在2倍以上的蛋白点有43个,其中自花授粉中表达丰度明显升高的蛋白点有6个,表达丰度明显降低的蛋白点有37个。只有34个蛋白点在质谱分析中成功鉴定,其中5种蛋白质分别为催化调节蛋白、防御/胁迫蛋白、结构蛋白等。这5种蛋白质直接或间接地影响花粉管在花柱中的生长。
[期刊] 林业科学
[作者]
冯建荣 陈学森 吴燕
Frozen young leaves of apricot(Armeniaca vulgaris) ‘Katy’ and ‘Xinshiji' were used for isolation of total DNA. Total RNA was isolated from their styles at the balloon stage. DNA and cDNA were amplified through PCR using AS1 Ⅱ and ArmyC5R as primers designed according to the conserved (C1,C5) sequenc...
关键词：
杏 自交不亲和 S-RNase基因 序列
[期刊] 华北农学报
[作者]
岳雷 李中勇 尹宝颖 张媛 徐继忠
为探讨外源多胺调控鸭梨自交不亲和的生理生化机制，分别以自花授粉和外源亚精胺处理后１～３ ｄ的花柱为试材，测定了不同处理不同时期花粉管生长发育动态，利用双向电泳技术和质谱分析技术分析了外源亚精胺处理前后不同时期鸭梨花柱蛋白的差异表达。结果显示：与对照相比，不同浓度的Ｓｐｄ处理均能极显著促进花粉管生长，０．２５ ｍｍｏｌ／ｌ Ｓｐｄ处理７２ ｈ后可使大量花粉管到达花柱基部；在自交花柱电泳图谱中发现了３种特异蛋白质，Ａ蛋白质ｍｒ Ａ＝２８．０ ｋ ｄＡ，ｐ Ｉ＝５．７；Ｂ蛋白质ｍｒ Ｂ＝２８．５ ｋ ｄＡ，ｐ Ｉ＝５．７；Ｃ蛋白质ｍｒ Ｃ＝２２．０ ｋ ｄＡ，ｐ Ｉ＝５．３，这３种特异蛋白质可能与自．．．
关键词：
亚精胺 鸭梨 花粉管 花柱蛋白
[期刊] 华北农学报
[作者]
范惠玲 白生文 李华清 孙万仓
芸芥与芸薹属植物具有亲缘关系，也是芸薹属植物的重要育种资源。自交亲和性是芸芥的一种重要变异性状。为了探明芸芥自交亲和基因的表达器官，并分离与自交亲和性有关的ｃＤＮＡ片段，以芸芥的一对近等基因系，自交亲和系（Ｓｃ）与自交不亲和系（ＳＩ）为试材，利用差异显示ＲＴ－ＰｃＲ技术分别对开花前和开花后的叶片、花药和柱头进行鉴定。结果表明，不论开花前还是开花后，芸芥自交亲和系与自交不亲和系的叶片或花药间的扩增带型是一样的，但在近等基因系的柱头间得到了差异表达条带。这证明芸芥自交亲和基因不是组成型表达，而是组织特异性表达，柱头是其唯一的表达器官。在开花前的自交亲和系中共得到了２条ｃＤＮＡ片段，一条小于１００ ．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐学清 曹瑞兵 蔡梅红 任雪枫 周斌 陈溥言
对含猪瘟病毒E2蛋白A/D抗原区基因插入的重组酵母菌株进行诱导表达,通过对诱导时间、重组酵母菌株、菌体密度、培养液pH、甲醇剂量等培养条件与表达产量关系的分析,对重组蛋白的表达条件进行了优化。优化后的条件为:28～30℃,225r/min振荡培养至BMGY中菌体OD600值为3.0～3.5时,将菌体转入相当于4倍体积BMGY,pH为6.0的BMMY培养基中培养72h,每24h加入甲醇至终浓度为总体积的0.5%～1.0%。在此优化条件下,重组蛋白的表达量可达275.38μg/mL,比较温度对重组蛋白降解率的影响后发现,培养物上清液应保存于-20℃。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
成建红 白松龄 韩振海 许雪峰 李天忠
目的克隆李属甜樱桃自交不亲和性花粉S-决定子基因,为今后果树配子体自交不亲和性机理研究奠定理论基础。方法根据GenBank登录的16个S-locusF-box同源基因保守区设计兼并引物,利用RT-PCR、RACE等手段,从甜樱桃品种红灯花粉cDNA中克隆到两个编码376-氨基酸多肽的全长基因。结果GenBankBlast分析显示,克隆的两个基因中一个基因编码的蛋白产物与数据库甜樱桃自交不亲和性S3-单元型特异的PaSFB3(AB096857)编码的氨基酸序列完全一致。另一个基因编码一新的PaSFB同源序列,其推测的氨基酸序列N-端同SFB3一样具有明显的F-box基序,与PaSFB1～6的一致...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
呼荣媚 孟冬 白松龄 胡建芳 李天忠
通过酵母双杂交的方法寻找苹果‘国光’花柱中与S-RNase互作的非S因子。以苹果‘国光’花柱为试材,构建了酵母cDNA文库,检测插入片段大小在300～2 000bp之间,符合库容要求。将S1-RNase成熟区cDNA序列S1-mat构建到pGBKT7载体上作为诱饵,筛选‘国光’花柱酵母cDNA文库。经文库筛选,获得一个大小为371bp的片段,与苹果全基因组序列比对后发现,该片段位于第9号染色体,其全长序列为552bp。NCBI BLAST比对及蛋白结构域分析显示其与拟南芥钙调素结合蛋白的同源性最高,且具有钙调素结合蛋白特有的磷酸二酯酶结构域。同时,酵母互作实验显示其与‘国光’花柱钙调素(CaM...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
祝朋芳 张利欣 王亚斌 刘莉
为提高大花萱草品种间的杂交亲和性,以大花萱草(Hemerocallis hybridus Hort)品种金娃娃、东方不败、红宝、奶油卷为亲本进行正反交,对杂交亲和性差的组合进行不同花柱处理。结果表明:大花萱草4品种间存在不同程度杂交障碍,常规授粉后5d,膨大蒴果普遍出现脱落现象,且品种间正反交亲和性差异较大,金娃娃与东方不败、红宝与金娃娃、红宝与东方不败正交亲和性均高于反交。花柱处理中,切割花柱处理的膨大率、坐果率和结籽率较对照低;2g·L-1氯化钠、5g·L-1硼酸和50g·L-1蔗糖处理的坐果率和结籽率较对照高,50g·L-1蔗糖涂抹柱头处理效果最佳。
关键词：
大花萱草 品种 杂交 亲和性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈俊毅 柴友荣 姚永宏
查尔酮合酶(CHS)是类黄酮途径的首步关键酶,参与合成所有类黄酮和异黄酮物质,参与决定多种植物重要性状。NCBI已有2917条CHS序列登录和释放。单个物种基因组中的CHS普遍由基因家族编码,通过基因加倍而产生。CHS蛋白的表达技术目前均是基于大肠杆菌的原核表达,多采用Novagen公司的pET载体系统,最通行参数为37℃条件下1 mmol/L IPTG诱导3h,表达蛋白普遍采用His-Tag进行亲和纯化,采用质谱或免疫分析技术进行身份检测,通过对生化反应底物和产物的HPLC检测可以精确分析酶活。苜蓿等植物的CHS蛋白已完成X射线晶体衍射研究,获得了三维结构和活性位点构象的初步解析,并与植物Ⅲ...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵盼 唐顺明 刘挺 覃光星 郭锡杰
【目的】对家蚕浓核病毒镇江株非结构蛋白2(NS2)基因进行克隆、表达,并测定表达产物的生物活性。【方法】利用PCR技术从家蚕浓核病毒镇江株(BmDNV-Z)基因组中扩增得到非结构蛋白2(NS2)基因片段,将其克隆到表达载体pET28a得到重组表达质粒pET28a-NS2,在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,SDS-PAGE和Westernblot检测,表达产物经Ni柱纯化,经过复性检测其Helicase和ATPase活性。【结果】克隆获得了BmDNV-ZNS2基因,并在大肠杆菌中得到了成功表达,表达产物经Ni柱纯化获得了目的蛋白NS2。纯化的NS2蛋白具有Helicase活性,能将双链DN...
关键词：
家蚕 浓核病毒 非结构蛋白 表达 活性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘安芳 朱庆 刘益平 张增荣
【目的】了解鸡钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因的组织特异性表达情况和在不同鸡品种间的表达差异。【方法】利用半定量RT-PCR方法研究CAST基因在鸡不同组织和品种中的表达差异。【结果】CAST基因表达于鸡的各个不同组织中,在胸肌中的表达量最多并显著高于其它组织(P<0.05);不同鸡品种胸肌组织中CAST基因表达量差异显著(P<0.05),艾维茵肉鸡胸肌组织中CAST基因的表达量显著高于其它几个品种(P0.05),但显著高于蛋鸡(P<0.05)。【结论】结果表明钙蛋白酶抑制蛋白是一种在鸡体内普遍存在的蛋白,CAST基因在鸡不同...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王改玲 骆彦萍 孙宝剑 徐镇 许巧情 聂品
用RACE-PCR和RT-PCR方法获得鳜(Siniperca chuatsi)膜结合型免疫球蛋白D(Membrane-bounded IgD,mIgD)重链基因的全长cDNA序列。鳜mIgD的cDNA全长为3358bp,其5l非编码区包含30bp,3l非编码区包含337bp;开放阅读框包含2991bp,编码996个氨基酸,基因结构为VDJ-μ1-δ1-δ2-δ3-δ4-δ5-δ6-δ7-TM。鱼类IgD恒定区氨基酸序列比对结果显示,鳜mIgD存在半胱氨酸和色氨酸保守位点,与其他鱼类IgD的相似性在37%～72%之间。用邻接法(Neighbor Joining)构建的鱼类免疫球蛋白基因的系统发...
[期刊] 华中师范大学学报(自然科学版)
[作者]
盖中朝 王兵
mTOR信号通路在真核细胞代谢调控中发挥着关键的调控作用,该通路核心元件mTORC1复合物的活性受其上游TSC复合物负调控,TSC复合物包括TSC1、TSC2、TBC1D7三种蛋白.以TBC1D7蛋白为研究对象,通过氨基酸序列比对显示多物种来源的TBC1D7蛋白具有较高的保守性,且蛋白三维结构分析证实其分子表面存在高度保守区域.随后,构建了人类TBC1D7蛋白原核表达载体并在大肠杆菌中表达得到全长TBC1D7蛋白,经过酶切去除标签和凝胶排阻层析得到了高纯度TBC1D7蛋白.另一方面,通过在HCM细胞中对TBC1D7进行敲降和过表达,证实了TBC1D7的表达会直接升高mTORC1的活性;反之,升高TBC1D7的表达则会抑制mTORC1的活性.本研究表达和纯化了人类TBC1D7蛋白,并探讨了在人类心肌细胞中TBC1D7的表达与其下游mTOR信号通路之间的联系,为人类TBC1D7蛋白和mTOR信号通路的进一步研究打下了良好基础.
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