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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
刘耘 熊家军 杨利国
Bassam银染法和Sanguinetti银染法是AFLP标记最常用的检测方法。本研究比较这2种方法银染的AFLP条带再扩增效果的差异,发现Bassam法银染的AFLP片段再扩增效率达到100%,而用同样的PCR条件,Sanguinetti法银染的AFLP片段不能被扩增,限制了Sanguinetti法在AFLP标记分析中的应用。为提高Sanguinetti法银染的AFLP片段再扩增效率,对Sanguinetti法银染的AFLP片段回收和再扩增条件进行了改进。通过增加Sanguinetti法显色后的胶板漂洗次数、延长漂洗时间、改变AFLP条带浸泡溶液、增加浸泡液体积和增加PCR循环次数,成功地将...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
卢俊 陆宏达 岳蒙蒙 操艮萍
以患鲤疱疹病毒２型（Ｃｙｐｒｉｎｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ２，Ｃｙ ｈｖ－２）疾病的异育银鲫（Ｃａｒａｓｓｉｕｓ ａｕｒａｔｕｓ ｇｉｂｅｌｉｏ）肾脏为实验材料，采用－２０℃冷冻、１００％乙醇、ｄａｆａｎｏ＇ｓ液、１０％福尔马林、Ｚｅｎｋｅｒ＇ｓ液、Ｍüｌｌｅｒ＇ｓ液、２．５％戊二醛、ｈｅｌｌｙ＇ｓ液、ＭｏｓｓＭａｎ＇ｓ液、ｂｏｕｉｎ＇ｓ液和Ｃａｒｎｏｙ＇ｓ液不同方法进行保存，通过微量分光光度计检测和琼脂糖凝胶电泳探讨不同保存方法对病毒ｄｎａ提取效果、常规ｐＣｒ扩增效果和巢式ｐＣｒ扩增效果的影响。结果表明：从病鱼肾脏中提取ｄｎａ时，除１００％乙醇保存方法与－２０℃冷冻保存组一样可以提取高质．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邢小黑 姜卫红
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓英 吴铁明 彭尽晖 吕长平 张宏志 丁江南
为了快速准确地进行萱草种质鉴定 ,从 6 4对AFLP引物中随机选出了 3对引物组合 (即EcoRⅠAAC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAT ,EcoRⅠACC MseⅠCAG) ,构建了 5个萱草种质的指纹图谱 .3对引物在 5个萱草材料中 2 0 5个位点上扩增出了条带 ,其中多态性条带 12 8个 ,占扩增条带总数的 6 2 .9% ,5个萱草材料具有较高的遗传多样性 ,并初步认为其中野生重瓣萱草可能来自于萱草H .fulva的自然突变
关键词：
萱草 扩增片段长度多态性 DNA指纹
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谢南南 乔勇 赵锦 刘孟军
【目的】建立一种适合枣相关基因侧翼序列延伸的SON-PCR技术。【方法】在原有SON-PCR基础上进行改进,将原有SON-PCR第2轮两段式反应改进为两步式,即第2轮首先加入单引物进行单侧嵌套引物引发5′端进行选择扩增,然后以第1步产物为模板,以少量的第1轮引物和第2轮引物进行特异性扩增,使特异性和效率进一步加强;将原来第2轮扩增模板浓度调整至10 ng·μL-1左右,以适合枣相关基因侧翼序列扩增。【结果】利用该体系对‘骏枣’1条626 bp的片段进行了侧翼序列扩增,获得了1条934 bp的编码富含亮氨酸重复序列的相关片段;同时以其它2条枣基因片段为起始序列进行了侧翼序列扩增,进一步验证了此技...
关键词：
枣 相关基因 SON-PCR 侧翼序列
[期刊] 林业科学
[作者]
邱并生 李横虹 史春霖 金开璇
本研究收集了２０种感染植原体的植物材料，从患病材料和相应健康植物组织中提取总ＤＮＡ用作ＰＣＲ模板，选择两对通用引物进行巢式ＰＣＲ，扩增植原体的１６ＳｒＤＮＡ片段，回收扩增产物，通过限制性酶切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析进行分类。２０种患病植物材料中的植原体有１３种属于翠菊黄化种，２种属于白腊树黄化种，３种属于花生丛枝种，２种属于三叶草丛生种。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
于晓英 张秋明 易干军 霍合强 谭卫萍 李典范
为了建立一个准确、完善、统一的香蕉鉴别分类标准 ,促进香蕉种质资源的合理利用及新品种的选育与推广 ,于 2 0 0 0年 2至 12月在广东省农科院果树研究所对广州国家种质香蕉圃的 35份香蕉种质材料进行了AFLP分子标记 .结果表明 :1)引物EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG对 35个香蕉材料进行选择性扩增后 ,共得到扩增位点 10 7个 ,其中多态性位点 84个 ,多态性位点比例达到 78.5 % ,对 35个材料的区分率达到10 0 % .2 )在引物对EcoRⅠACC +MseⅠCAT和EcoRⅠACC +MseⅠCAG构建的香蕉AFLP指纹图谱中...
关键词：
香蕉 种质资源 鉴别 扩增片段长度多态性
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘志文 韩旭 周索童 王丽 李宪臻 陈温福
对杂草稻的nrDNA ITS片段的PCR扩增条件进行了优化并测定,建立的PCR最优体系为:20μL反应体系含1μL模板DNA,0.125 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L正反向引物,1 UTaq酶,2.0μL 10×TaqPCR Buffer;退火温度为57℃。这样的条件下充分保证了ITS PCR产物的质量和纯度要求,直接测序结果为600 bp左右,与网上结果十分类似,表明结果准确可靠。这些ITS片段的系统学信息将为杂草稻的起源进化提供有力的分子水平证据。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
杨文鹏 王伟 王明春 王秀影
为了比较Ptotein Assay和2-D Quant Kit两种方法测定玉米蛋白质浓度的差异,用Plant Total Protein Extraction试剂盒提取8个玉米高赖氨酸近等基因系的苗期心叶、抽雄期旗叶,授粉后10、20、30和40 d籽粒的总蛋白质,用Ptotein Assay和2-D Quant Kit2种方法测定其浓度。结果表明:籽粒中高于叶片中的总蛋白浓度,且籽粒发育越成熟提取的总蛋白质浓度越高。两种方法测定中,在不同组织提取的总蛋白质间的变化趋势相同,但授粉后10、20、30和40 d籽粒提取的总蛋白浓度间存在极显著差异;苗期心叶提取的总蛋白浓度间存在显著差异;抽雄期旗...
关键词：
总蛋白 浓度测定 方法 玉米
[期刊] 西南农业学报
[作者]
苟本富
采用单酶切和双酶切AFLP技术分别对5种不同蔷薇品种基因组DNA的遗传多态性进行了检测,比较了2种方法的多态性比率。单酶切采用10条人工设计的与接头序列相识别的AFLP选择性引物,用PstⅠ酶切,共获得108个AFLP标记,片段大小在100~2000 bp,得到33个多态位点,多态性位点百分率为30.56%;双酶切采用25对双酶切AFLP引物,在50~600 bp扩增出清晰条带658条,得到182个多态位点,占总扩增带的27.6%。对多态性片段进行统计,计算出不同品种间的相似系数和遗传距离。结果表明:硕苞蔷薇同其它4种蔷薇的遗传距离偏远,且其它四种蔷薇的遗传距离均较近,这与蔷薇品种来源和培育史...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
刘志文 周索童 韩旭 曲佐寅 王占久 孙之音 李宪臻 陈温福
对杂草稻叶绿体psbA-trnH片段的PCR扩增条件进行了优化,建立的最优体系为:20μL反应体积含1μL模板DNA,0.125mM dNTPs,0.5μM正反向引物,1U Taq酶,2.0μL 10×Taq PCR buffer;退火温度为61℃,在此条件下充分保证了psbA-trnH PCR产物的质量和纯度要求。对该片段进行了直接测序,结果为510bp左右,在NCBI中比较分析表明其测序结果准确可靠,经ClustW分析表明含有丰富的系统学信息。
[期刊] 统计研究
[作者]
岑成德
一、比较的方法进行国内地区间的经济比较,可以参考国际经济的比较方法。各种国际比较方法,究其实质,有一点共同之处:各国间的经济指标的比较,直接用汇率折算后相比,不能反映真实情况;应以各国货币的实际购买力为尺度来比较,即以所谓“购买力平价”(PPP)为基础进行比较才较为合理。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
何亚鹏 陈怡静 时晓 张宝莉 温战华 陈春山 李博 杜迎春
实验建立了一套反转录环介导等温扩增方法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),用于实验室及现场检测鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病毒(infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)。针对IHNV的核蛋白基因设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶及Bst DNA聚合酶的作用下进行反转录LAMP,结果阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本仍为红棕色。反应条件优化结果表明最适反应温度为64℃;特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、HRV、VHSV和H_2O均不发生反应;敏感性试验表明该LAMP方法可检出浓度为1.0×10~(-4)μg/μL的IHNV核酸。本研究所建立的IHNV反转录LAMP检测法成本低、操作简单、反应迅速、不依赖专门的仪器,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合IHNV的现场检测和大批量样品的检疫。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史秀杰 于力 王津津 何俊强 郑晓聪 贾鹏 兰文升 杨锦舜 刘荭
根据ISAV的基因保守序列,利用LAMP Designer软件设计了6条引物,采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测,优化了反应条件,分析了所建立方法的特异性和灵敏度,并与RT-PCR和实时荧光RT-PCR进行比较。研究表明,该方法最适反应温度为64℃,反应10 min就可以观察到明显的扩增。该方法灵敏度高,检测限为78.4 fg RNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与实时荧光定量RT-PCR灵敏度相当;特异性好,与传染性胰腺坏死病毒(IPNV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)、出血性败血症病毒(VHSV)、鱼类病毒性神经坏死病病毒(VNNV)、鱼腹水病毒(YAV)等14种主要鱼类病...
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