- 年份
- 2024(106)
- 2023(161)
- 2022(143)
- 2021(138)
- 2020(145)
- 2019(312)
- 2018(259)
- 2017(319)
- 2016(330)
- 2015(399)
- 2014(330)
- 2013(348)
- 2012(342)
- 2011(265)
- 2010(262)
- 2009(208)
- 2008(171)
- 2007(149)
- 2006(98)
- 2005(72)
- 学科
- 学(993)
- 水产(697)
- 动物(661)
- 动物学(648)
- 基因(470)
- 工程(440)
- 基因工程(425)
- 物(302)
- 传(297)
- 植(285)
- 植物(285)
- 遗(275)
- 遗传(275)
- 遗传工程(215)
- 虫(203)
- 害(184)
- 家(144)
- 畜(140)
- 家畜(138)
- 虫害(138)
- 防(137)
- 羊(134)
- 治(129)
- 防治(129)
- 及其(127)
- 生物(109)
- 毒(108)
- 病毒(104)
- 病虫(103)
- 病虫害(103)
- 机构
- 大学(4023)
- 学院(3980)
- 农(3235)
- 农业(2733)
- 科学(2698)
- 室(2276)
- 实验(2264)
- 研究(2261)
- 实验室(2236)
- 重点(2103)
- 业大(1907)
- 农业大学(1706)
- 所(1654)
- 业(1650)
- 研究所(1628)
- 生物(1433)
- 技术(1365)
- 中国(1257)
- 省(1235)
- 部(1212)
- 生命(1025)
- 动物(994)
- 中心(986)
- 科学院(977)
- 家(951)
- 学生(898)
- 大学生(893)
- 国家(887)
- 水产(882)
- 工程(854)
共检索到5066条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西南农业学报
[作者]
余远迪 牟豪 张阳 郑华 李幸 付利芝
【目的】采用Cre/Loxp基因编辑系统，在羊痘病毒135基因位点插入ORFV外源基因F1L，同时引入标记基因，从而构建重组山羊痘病毒，为临床上预防羊口疮疫苗的设计、研制提供参考。【方法】以pDonor载体为基础，135基因编码区两侧500 bp左右的片段作为上下重组同源臂，中间插入羊口疮病毒F1L基因编码区及标记基因gpt、EGFP、痘病毒早晚期启动子p7.5、p11，并且含有loxp位点，构建同源重组供体质粒命名为pGTPV(135)-ORFV-F1L；并对阳性克隆菌液进行PCR鉴定并测序，经测序正确的菌液接种氨苄LB液体培养基培养过夜，提取去内毒素的质粒并进行双酶切鉴定。山羊痘病毒弱毒株感染永生化山羊睾丸细胞2 h后，重组质粒经脂质体法转染永生化山羊睾丸细胞，观察细胞病变及EGFP标记基因的表达情况；48 h后收获病毒液，反复冻融后离心，盲传3代，通过PCR鉴定目标基因的整合情况，以羊口疮病毒阳性血清为一抗，驴抗山羊IgG为二抗，通过蛋白免疫印迹分析目标基因的表达情况来对获得的重组病毒进行鉴定。【结果】经PCR筛选，成功获得表达羊口疮病毒F1L基因的同源重组供体质粒。经过测序并与目标序列进行比对，结果正确，表明重组质粒成功构建。重组质粒经去内毒素提取后测定浓度并进行双酶切鉴定，结果与预期相符，经鉴定的重组质粒转染山羊睾丸细胞，在48 h后观察到细胞病变及绿色荧光，PCR鉴定结果表明F1L基因整合到重组病毒上。蛋白免疫印迹分析显示，检测到目标蛋白条带，说明重组山羊痘病毒插入的外源基因F1L基因成功表达。【结论】本研究成功地构建了一种在135基因位点表达羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒，并在永生化山羊睾丸细胞中，该重组病毒展现出目的基因的稳定表达。以羊痘病毒弱毒株135基因位点插入羊口疮病毒F1L外源基因，该重组病毒在永生化山羊睾丸细胞中获得，目的基因能稳定表达，成功建立构建135基因位点插入羊口疮病毒F1L基因的重组山羊痘病毒方法。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈轶霞 王明明 龙玲 邵忠伟 刘俊林
通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头，串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE，将其克隆到原核表达载体pET-32中，采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒，构建pET32-mE质粒；用IPTG在不同条件下诱导表达，确定最佳表达条件，表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明，重组蛋白是分子质量为41 ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5 mmol/L，温度为37℃、诱导4 h时目的蛋白的表达量最...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈轶霞 王明明 龙玲 邵忠伟 刘俊林
通过计算机软件筛选出绵羊痘病毒基因组中心编码区的ORF90核蛋白、ORF112融合蛋白、ORF117糖蛋白、ORF55膜蛋白和基因组末端的ORF134宿主范围相关基因的6段T、B细胞优势抗原表位,以柔性氨基酸(GPGPG)作为接头,串联合成1条全新的多表位嵌合基因mE,将其克隆到原核表达载体pET-32中,采用酶切分析与序列测定方法筛选鉴定阳性重组质粒,构建pET32-mE质粒;用IPTG在不同条件下诱导表达,确定最佳表达条件,表达产物经SDS-PAGE分析。结果表明,重组蛋白是分子质量为41ku的融合蛋白。在IPTG浓度为0.5mmol/L,温度为37℃、诱导4h时目的蛋白的表达量最大,约占...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯平 李云章 孙丰廷 屈雷 闫海龙
【目的】克隆分析羊口疮病毒（ORFV）榆林株（ORFV-Yulin）的F1L基因序列，通过昆虫杆状病毒表达B2L和F1L串联基因。【方法】采用PCR方法扩增ORFV-Yulin株F1L全长基因，测序后对其进行序列分析和遗传进化分析。扩增ORFV-Yulin株B2L融合基因（rB2L）和 F1L融合基因（cF1L），利用碱基linker连接，通过重叠PCR方法扩增获得ORFV rB2L-linker-cF1L重组基因(rB2Lc-F1L)，将其与昆虫杆状病毒表达载体pBac5连接构建表达载体pBac-r
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
丁巧玲 陈溥言
将马立克氏病病毒 (MDV)gB基因插入鸡痘病毒 (FPV)中 ,构建了含有MDVgB基因的重组鸡痘病毒 (rFPV)。用rFPV、HVT冻干苗、rFPV +HVT疫苗分别免疫 1日龄AA肉用雏鸡 ,于 8日龄攻毒后观察疫苗免疫效果。实验结果表明 ,HVT、rFPV、HVT +rFPV疫苗免疫组比攻毒对照组病毒血症持续时间短 ;上述 3种疫苗免疫后用京 1株MDV(vMDV)攻毒 ,脾脏T淋巴细胞增殖反应处于较高水平 ,而攻毒对照组脾脏T淋巴细胞增殖反应减弱 ,两者差异显著(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨明凡 崔保安 陈红英 张素梅 魏战勇 李祥瑞
将鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)河南长葛株gD基因重组到鸡痘病毒基因组中,获得了能高效表达糖蛋白D的重组鸡痘病毒(rFPV-gD)。将rFPV-gD经皮下刺种途径接种30日龄的固始鸡,用ILTV商品弱毒疫苗经滴鼻、点眼途径免疫试验鸡,同时设非免疫对照鸡群。分别于免疫后7、14、21、28、35和42 d采血分离血清,用微量血清中和试验测定ILTV抗体效价,并于免疫后42 d用ILTV强毒攻击所有试验鸡只。血清中和抗体检测结果表明:疫苗对照组与重组病毒组差异不显著(P>0.05),而重组病毒组和疫苗对照组与空白对照组相比差异均显著(P
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄凯 林亚秋 朱江江 马洁琼 王永
【目的】为利用超表达手段进一步研究成纤维细胞生长因子1(FGF1)基因对山羊肌内前体脂肪细胞分化过程的影响。【方法】本试验通过构建p Ad Track-CMV-FGF1穿梭质粒,转入含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态细胞中进行同源重组,获得腺病毒超表达载体pAdEasy-FGF1,经Pac I酶切鉴定后转染293A细胞进行病毒的包装与扩繁,最后用包装的pAdEasy-FGF1感染山羊肌内前体脂肪细胞,检测感染前后FGF1的表达变化。【结果】成功构建了腺病毒超表达载体p AdEasyFGF1,并在293A细胞中成功包装,其感染山羊肌内前体脂肪细胞能显著上调FGF1 mRNA的表达水平。【结论】说明FGF1基因可以通过感染重组腺病毒表达载体pAdEasy-FGF1在山羊肌内前体脂肪细胞中实现超表达。
关键词：
山羊 成纤维细胞生长因子1 腺病毒
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯平 李云章 孙丰廷 屈雷 闫海龙
【目的】从榆林市具有典型羊口疮症状的陕北白绒山羊唇结痂病料中分离羊口疮病毒(Orf virus,ORFV),克隆分析其B2L基因序列,并通过昆虫杆状病毒表达B2L基因。【方法】利用牛肾传代细胞进行ORFV的分离培养,通过PCR的方法从分离到的病毒中扩增出B2L全长基因,测序后进行序列及遗传进化分析。利用扩增所得的B2L基因构建昆虫杆状病毒表达载体,包装出杆状病毒后侵染sf9细胞,并通过SDS-PAGE、Western-blot以及质谱鉴定等方法验证目的基因的表达情况。【结果】成功分离出1株羊口疮病毒,命名
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 陈萍 杜念兴
基因重组痘苗病毒在鸡胚中的增殖与表达徐文忠，陈萍，杜念兴（南京农业大学动物医学系，南京２１００９５）ＡＭＰＬＩＦＩＣＡＴＩＯＮＡＮＤＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＲＥＣＯＭＢＩＮＡＮＴＶＡＣＣＩＮＩＡＶＩＲＵＳＩＮＣＨＩＣＫＥＮＥＭＢＲＹＯ￥ＸｕＷｅｎｚｈ...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈红英 黄青云 崔保安 李新生 管倩 刘金朋
为构建表达鸡IL-18的重组禽痘病毒,将含痘病毒启动子LP2EP2驱动的鸡IL-18基因插入到禽痘病毒转移载体pSY681中,获得重组转移载体pSY681/ChIL-18。将pSY681/ChIL-18转染已感染亲本禽痘病毒S-FPV-017株的鸡胚成纤维细胞,使其在鸡胚成纤维细胞内与禽痘病毒基因组发生同源重组,产生表达鸡IL-18的重组禽痘病毒rFPV-ChIL-18。在含有X-gal的营养琼脂培养基上进行蓝斑筛选后,对重组病毒rFPV-ChIL-18又进行了多次蚀斑克隆。以重组禽痘病毒DNA为模板,利用鸡IL-18基因特异引物进行PCR,扩增出1条约0.6 kb的带。收集含鸡IL-18蛋白...
[期刊] 华北农学报
[作者]
庞峰 龙琴琴 梁绍波
旨在对羊口疮病毒(ORFV)ORFV113蛋白进行转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位研究。使用DNAStar软件对ORFV-JS株ORFV113基因进行序列比对分析；在阿糖胞苷(Arac)存在(Arac+)或不存在(Arac-)的情况下，于ORFV感染Hela细胞后多个时间点(2,4,6,12,24 h)收获细胞，提取细胞总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增ORFV113基因，确定ORFV113的动态转录水平；以ORFV-JS株基因组为模板，PCR扩增ORFV113基因，将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，构建pEGFP-ORFV113重组质粒，经酶切、测序鉴定正确后，使用脂质体Lipofectamine 3000瞬时转染pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒至HEK293细胞，通过Western Blotting鉴定ORFV113-EGFP融合蛋白的表达；将pEGFP-N1质粒和pEGFP-ORFV113重组质粒瞬时转染Hela细胞，24 h后使用Hoechst 33342对细胞核染色，倒置荧光显微镜下观察ORFV113蛋白的亚细胞定位。结果表明，ORFV-JS株ORFV113基因全长627 bp,在ORFV毒株中高度保守，属于ORFV早期基因；成功构建了pEGFP-ORFV113重组质粒，ORFV113-EGFP融合蛋白在HEK293细胞中成功表达，大小为60～70 ku,比预测分子量大10～20 ku,预示ORFV113蛋白发生了翻译后修饰；亚细胞定位研究表明，ORFV113蛋白主要定位在Hela细胞的胞质中。综上，本研究成功地对ORFV113蛋白进行了转录动力学分析、真核表达及亚细胞定位。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
文征宇 侯文韬 杨龙雨 陈鹏
【目的】建立牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ(Vaccinia topoisomeraseⅠ)的原核表达体系及纯化方法,以获得高活性、高纯度的牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ。【方法】优化并人工合成牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的全基因序列,构建牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ的原核表达载体(pET28a/TOPO)并转化E.coliBL21 Star(DE3)菌株,优化其诱导表达条件,表达蛋白经Talon his-tag purification resin螯合层析柱纯化,用SDS-PAGE鉴定纯化效果,借助酶切质粒pLLP-OmpA检测纯化蛋白的活性。【结果】转化pET28a/TOPO的E.coliBL21 Star(DE3)特异地表...
关键词：
牛痘病毒拓扑异构酶Ⅰ 原核表达 蛋白纯化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张娟丽 张文秀 彭瑾 张龚炜 杨宇 王杰 赖松家
基于病例对照研究的试验设计,本试验对β-防御素135基因(β-defensin 135,DEFB135)非编码区和编码区进行单核酸多态性(SNPs)检测,在5’非编码区(5’-UTR)检测到2个SNPs(c.-47 T>A,c.-40 C>A),3’-UTR区检测到1个SNP(c.*42 C>G),它们处于完全连锁状态。选取c.-40 C>A位点进行基因分型,研究DEFB135基因多态性与家兔非特异性消化道疾病易感性间的相关性。结果发现健康组和肠炎组中等位基因A的频率分别为30%和33%,差异不显著(P>0.05);OR(odds ratio)值为1.11(95%的置信区间:0.849~1.4...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
徐文忠 杜念兴 李光地 汪垣
将生长抑素(ss)与乙肝表面抗原(HBsAg)融合基因(ss/HBs)克隆到痘苗病毒表达质粒pGJP-5中,通过与痘苗病毒天坛株体内重组和蚀斑挑选技术获得融合基因的重组病毒,它保持痘苗病毒原有的感染性,并能表达出 ss 和 HBsAg 产物.表达产物呈表面带 ss 决定簇的 HBsAg 杂合颗粒,并分泌到感染细胞之培养液中.杂合颗粒的大小和密度与报道的 HBsAg 颗粒相似。本文还对该重组痘苗病毒可能作为 ss 活载体苗的前景进行了讨论。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
白霞 李润成 余兴龙 丁建 黎满香
利用重组PCR技术将猪瘟病毒兔化弱毒株(Hog cholera virus lapinized Chinese strain,HCLV)Erns编码区30位His残基密码子CAT突变为Pro残基密码子CCC,将突变后的基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建成重组质粒pETmErns,并将此重组子转入宿主菌BL21(DE3)plysS中,在IPTG的诱导下表达重组转化菌.结果:突变的mErns基因能在pET表达系统成功表达.用Western blotting检测表明,所表达的蛋白是猪瘟病毒特异性的,但克隆于pET-28a(+)中未突变的Erns基因却不能表达,说明Erns基因的RNA...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
推荐搜索
