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[期刊] 华北农学报
[作者]
杨大光 王新卫 王泽霖 周欣
利用RT-PCR技术克隆了10株涵盖不同分离年代和不同毒力的H9N2亚型AIV的NA基因,序列分析表明,10株AIV的NA基因的核苷酸和推导的氨基酸同源性高,进化稳定。系统进化树分析表明,其NA基因都属欧亚大陆禽分支,H9N2流感病毒的分布与地域有相关性。其NA蛋白氨基酸序列潜在的糖基化位点以及氨基酸红细胞吸附位点出现的变化尚不能解释这些毒株生物学特性上的差别。但这些研究结果从理论上丰富了H9N2亚型禽流感的分子流行病学,也为进一步研究该类毒株的进化提供了依据。
关键词：
H9N2AIV NA基因 克隆 序列分析
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
黄建龙 谭丹 王昌建 张朝阳 何世成 朱春霞 汪洪冰 邓国华 刘道新
【目的】从分子生物学角度了解Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒在湖南省洞庭湖区的变异特点和进化规律。【方法】对近年来洞庭湖区分离的１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感毒株的全基因进行分段克隆测序，应用Ｍｅｇａ ５软件包对病毒基因进行多序列比对和进化树的绘制与分析。【结果】１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感毒株Ｈａ裂解位点均没有多个连续的碱性氨基酸插入，属于低致病性病毒。１２株Ｈ９Ｎ２亚型禽流感病毒Ｈａ、Ｎａ基因进化比较同步，均处于ＤＫ／ＨＫ／Ｙ２８０／９７分支，而６个内部基因（Ｍ、ＰＢ２、ＰＢ１、Ｐａ、Ｎａ、ＮＳ）与高致病性禽流感Ｈ５亚型毒株呈现不同程度重组现象，且与Ｈ７Ｎ９亚型毒株基因的核苷酸同源性很高，很有可能为其提供内部．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
丁洁 高玉伟 桑晓宇 程凯慧 于志君 张坤 柴洪亮 王铁成 夏咸柱 华育平
【目的】将H9N2亚型禽流感病毒在豚鼠体内连续性传播9代后,能够稳定的在豚鼠间传播,可见H9N2亚型禽流感病毒对哺乳动物的感染能力以及在哺乳动物间传播的能力还是很强的。因此,使用此株病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)简称JN,应用小鼠动物模型,研究H9N2亚型流感病毒在小鼠肺内适应性传代后对小鼠的致病力,以及传代过程中流感病毒的变异。检测和筛选流感病毒致病性变异的关键氨基酸位点,探索H9N2亚型流感病毒变异的分子机制。【方法】将一株H9N2亚型禽流感病毒A/Chicken/Jinan/Li-2/2010(H9N2)在小鼠的肺脏进行传代,将小鼠解剖、摘除肺部、研磨...
关键词：
禽流感 H9N2 小鼠 致病力
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李丽 蒋作仪 李茵婧 常丽凤 辛震东 平继辉 苏娟
[目的]本试验旨在探究H9N2亚型禽流感病毒攻击对H9灭活疫苗免疫SPF鸡呼吸系统的影响。[方法]选用36只3周龄SPF鸡，随机分为对照组(Con)、攻毒组(Flu)、免疫后攻毒组(Vac+Flu)。以每只0.4 mL剂量免疫接种H9灭活疫苗，3周后以10~6 EID_(50)的病毒量进行攻毒，采集拭子、血清、气管、肺组织等样品，通过血凝抑制(HI)试验、RT-PCR、荧光定量PCR(qPCR)等方法检测血清中HI抗体滴度、肺脏流感病毒M基因拷贝数以及免疫相关基因CD4、CD8、GATA3、T-bet、IL-4、IL-13、TNF-α、IFN-γ、Perforin、Granzyme、FasL、Fas等的表达量；并利用HE染色、免疫组织化学的方法观察气管、肺脏的病理变化及病毒特异性抗原NP蛋白的分布特征。[结果]HI试验结果显示，SPF鸡疫苗免疫后可产生较高的H9N2 AIV抗体效价。免疫保护试验和RT-PCR结果显示，SPF鸡疫苗免疫后攻毒仍能检测到机体排毒和流感病毒M基因在肺脏组织中的表达。HE染色和免疫组化结果显示，接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够明显减轻SPF鸡气管和肺脏的病理损伤，降低气管、肺脏中的病毒载量。荧光定量PCR结果显示，接种H9N2 AIV灭活疫苗后能够提高SPF鸡肺脏中Th1、Th2细胞因子分泌水平，促进穿孔素/颗粒酶途径相关基因表达进而增强肺脏中细胞毒性反应。[结论]H9N2疫苗免疫鸡感染H9病毒后虽然仍存在排毒现象，但其抗病毒免疫系统活跃、其主要器官病毒载量降低，建议按照流感疫苗免疫程序进行免疫接种，提高对流感的防控水平。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
孔娜 田夫林 兰邹然 杨林 冯涛 梁成珠 赵宏坤
参考GenBank上发表的H5亚型禽流感(AIV)血凝素(HA)基因序列及鸡白细胞介素18成熟蛋白(mChIL-18)的cDNA基因序列,分别设计了HA1和mChIL-18的cDNA的2对引物。然后以pMD18-T-HA质粒和pGEX-mChIL-18质粒为模板,扩增出了H5亚型AIV的HA1基因和mChIL-18的cDNA片段。再以杆状病毒pFastBacTM dual为载体,将H5亚型AIV HA中的HA1基因和mChIL-18基因分别插入到双表达载体pFastBacTM dual的p10启动子(PP10)和多角体蛋白启动子(PPH)的下游,构建携带HA1基因和mChIL-18基因的重组p...
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