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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张震 张岩 杨朋坤 任双慧 高雅欣 孙玉娇 王永芬
【目的】对1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定并对其产脂肪酶特性进行研究,为后期规模化发酵生产脂肪酶及其在畜牧业中的实际应用奠定基础。【方法】采用形态学观察、生理生化鉴定、16S rDNA测序分析,对实验室分离保存的1株产脂肪酶细菌MY016进行鉴定;通过菌落和芽胞计数、生长曲线测定,对MY016的生长特性进行分析;通过产脂肪酶量和酶活检测、脂肪酶基因扩增和系统进化分析,对MY016菌株的产脂肪酶特性进行探讨。【结果 】产脂肪酶细菌MY016经形态观察、生理生化鉴定和16S rDNA分析,被鉴定为枯草芽胞杆菌。MY016在培养2h后进入对数生长期,生长迅速;培养10 h其菌液600 nm吸光度最高达到4.7,随后进入稳定期;12 h时活菌数约为5.3×10~9 CFU/mL;培养22 h后开始二次生长,吸光度最高达5.2;培养46 h后进入衰退期。芽胞观察和计数结果显示,MY016菌株在接种16 h后开始形成芽胞,随着培养时间延长,芽胞形成率逐渐升高,直至72 h完全形成芽胞,芽胞数最高为1.9×10~9 CFU/mL。产脂肪酶能力检测结果显示,MY016菌株在培养36 h时产酶量达到最大,为246.918 mg/L,然后总酶量逐步降低;48 h时总酶活达到最高,约为281.883 U/L。成功扩增了MY016菌株的脂肪酶基因,并构建系统进化树,结果显示MY016脂肪酶基因与其他芽胞杆菌的脂肪酶基因亲缘关系最近,表明其脂肪酶基因进化保守。【结论】产脂肪酶枯草芽胞杆菌MY016生长迅速、产酶量稳定,总酶活较高,适合后期规模化生产和在畜牧业中推广应用。
关键词：
枯草芽胞杆菌 菌株鉴定 脂肪酶
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
张飞燕 何敏 王振华 潘康成 冯杰 唐慧琴
对铜绿假单胞菌脂肪酶基因(Lip A)进行克隆,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,并在枯草芽孢杆菌pab02中整合表达。根据铜绿假单胞菌Lip A基因设计引物,扩增Lip A基因,并进行测序,构建整合表达质粒pHSG398–16S–lip A,转化枯草芽孢杆菌pab02,并对转化后的阳性菌株进行诱导表达。结果显示,成功从铜绿假单胞菌A05菌株中扩增到长1 092 bp的Lip A基因,该基因与铜绿假单胞菌Lip A基因(登录号为AB290342)的同源性高达98%;该基因共编码311个氨
关键词：
铜绿假单胞菌 枯草芽孢杆菌 脂肪酶基因
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李宝庆 鹿秀云 郭庆港 钱常娣 李社增 马平
【目的】对枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis菌株BAB-1产生的脂肽类物质和挥发性物质进行分离鉴定和抑菌活性研究。【方法】采用HPLC和MALDI-TOF-MS对脂肽类物质进行分离纯化和鉴定;采用GC-MS对挥发性物质进行鉴定。【结果】HPLC分析表明,菌株BAB-1产生的脂肽类物质由LP-1、LP-2、LP-3三类组分组成,其中LP-2起主要抑菌作用。MALDI-TOF-MS质谱分析表明,LP-1为surfactin(C13—C15),LP-2为fengycin A(C14—C15)和fengycin B(C14—C18),LP-3成分未能确定。GC-MS结果表明,菌株BAB-1...
关键词：
枯草芽孢杆菌 脂肽 挥发性物质 抑菌活性
[期刊] 华北农学报
[作者]
谢凤行 赵玉洁 周可 张峰峰 李亚玲
为提高枯草芽孢杆菌产生淀粉酶能力,从养虾池、混养池及污染河流的底质活性污泥中分离到12株枯草芽孢杆菌,通过淀粉降解试验筛选到产酶能力较高的菌株H4和H5,菌株淀粉酶活性分别为38.66,37.10 U/mL。以筛选到H4和H5为原始菌株,采用紫外诱变的方法对H4和H5进行连续诱变筛选产淀粉酶高的突变株。结果发现,第一次诱变后突变株的酶活分别为原始菌株的107%和111%;经过第二次诱变后,H4的突变株H4Ⅱa,H5的突变株H5Ⅱa和H5Ⅱb的产酶能力有很大程度的提高,分别为原始菌株的147%,136%和135%,酶活达56.95,50.47和50.02 U/mL,说明紫外连续诱变有利于突变株产...
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
张蕾 黎继烈 蒋丽娟
通过单因素试验、Plackett-Burrman设计及响应面法对芽孢杆菌T3—4的产脂肪酶条件进行优化。确定最适C、N源分别为麦芽糖、蛋白胨+硫酸铵,碳氮比为1∶3。其最适产酶条件为:七水硫酸镁0.05%,蓖麻油1.5%,蛋白胨0.75%,磷酸氢二钾0.1%,麦芽糖0.5%,硫酸铵0.3%,pH值6.5,接种量10%。在此条件下,发酵脂肪酶活力可达805.836 U/mL。
关键词：
芽孢杆菌 脂肪酶 响应面法
[期刊] 西南农业学报
[作者]
万莉 何月秋 谢鑫欣 刘迎龙 何鹏搏 MUNIR Shahzad 吴毅歆 何鹏飞
【目的】拟通过构建高效杀虫枯草芽孢杆菌YZ-1的转座突变体库，从中筛选出高产表面活性素的突变体菌株，为后续YZ-1的表面活性素合成调控机制解析和开发利用提供前期材料。【方法】利用携带转座子TnYLB-1和温敏型复制蛋白的穿梭载体pMarA转化YZ-1，通过50 ℃温度诱导转座子转座、抗性培养复筛以及特异性PCR扩增验证，构建YZ-1菌株的转座突变体库。组合使用血平板法初筛、溴百里香酚蓝比色法复筛及HPLC定量检测，从突变体库中筛选表面活性素合成显著增强的突变体。【结果】通过自然转化成功地将pMarA质粒导入枯草芽孢杆菌YZ-1中，获得含有3000株转座突变子的YZ-1突变体库，从中筛选出11株表面活性素合成增强的候选菌株。HPLC检测显示与YZ-1野生型相比，表面活性素合成增强和相似的突变体有5株（M1、M6、M7、M8及M9），显著下降有6株（M2、M3、M4、M5、M10及M11），其中表面活性素产量最高的M8突变体为282.4 mg/L较野生型增加了13.7%，而最低的M2菌株为47.53 mg/L，较野生型下降了80.9%。【结论】增设抗性复筛培养可提高YZ-1突变体库的正确率。基于血平板培养和溴百里香酚蓝比色的高通量筛选与HPLC定量检测的YZ-1表面活性素增强型突变体筛选结果不理想，还需进一步改进。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
武爱民 江正强 韦赟 苏春元
采用弱阴离子树脂DEAE-52和蓝色琼脂糖凝胶FF层析对枯草芽孢杆菌产生的胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶的粗酶液进行2步纯化,得到电泳纯的二氢硫辛酰胺脱氢酶,纯化倍数为59.7,收率为46.9%。通过SDS-PAGE法测得其亚基分子质量为64.6 ku,Superdex 75法测得其分子质量为67.5 ku,表明枯草芽孢杆菌WY34产胞外二氢硫辛酰胺脱氢酶为单亚基蛋白质。本研究采用的二氢硫辛酰胺脱氢酶的纯化方法,简便且收率较高。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
宫安东 孔宪巍 翟新可 路亚南 文淑婷 张静柏
[目的]本文旨在筛选兼有溶磷和抑菌作用的微生物菌株,分析其在水体和土壤中的溶磷效果以及对植物生长的作用,同时分析其抑菌活性,鉴定其抑菌物质。[方法]采用稀释涂平板法,从茶园土壤中分离具有溶磷和抑菌作用的菌株WY8-7,通过形态学、生理生化和分子生物学分析,确定菌株WY8-7的分类地位;检测菌株WY8-7在土壤和培养液中对难溶性无机磷的降解作用;检测其对苗期玉米植株生长的影响;对峙培养法分析菌株WY8-7对不同病原真菌的抑菌作用;超高效液相色谱四级杆飞行时间质谱鉴定抑菌功能物质。[结果]经鉴定,菌株WY8-7为枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis),在固体培养基、液体培养基和土壤中均可转化难溶性无机磷,提升可溶性磷含量;液体振荡培养20 d后,可溶性磷含量达512.77 mg·L~(-1),为对照的174倍;菌株WY8-7可提升土壤中可溶性磷含量,并促进苗期玉米的生长,与对照组相比,在叶长、叶宽、单叶叶面积、株高和鲜质量等指标均有显著增长(P<0.05),增长率分别达17.68%、22.08%、42.62%、20.34%和20.59%;质谱分析表明,菌株WY8-7可产生伊枯草菌素A和丰原素A两类抑菌物质,对3种真菌具有高效广谱抑菌作用,对禾谷炭疽菌的抑菌率最高,达87.34%。[结论]分离自茶园的枯草芽胞杆菌WY8-7,在土壤和液体振荡培养中可高效转化难溶性无机磷为可溶性磷,促进苗期玉米植株生长,同时WY8-7还可产生伊枯草菌素A和丰原素A两种脂肽类物质,抑制多种病原真菌生长。WY8-7具有高效溶磷和抑菌作用,为新型微生物菌肥的研发提供重要材料。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乔俊卿 刘邮洲 张荣胜 刘永锋
[目的]枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌,通过优化其摇瓶发酵工艺,从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量,为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法]以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)为指示菌,利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素,并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析,筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分;随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计和响应曲面法,优化T-500菌株高产脂肽类抗生素的发酵培养基成分和发酵条件。[结果]T-500菌株高产脂肽类抗生素的最佳培养基为:黄豆饼粉7.00 g·L~(-1),蛋白胨4.92 g·L~(-1),酵母粉1.90 g·L~(-1),小麦粉5.00 g·L~(-1),玉米糊5.00 g·L~(-1),NaCl 1.00 g·L~(-1),MgSO_40.20 g·L~(-1),MnSO_45.0 mg·L~(-1),FeSO_40.5 mg·L~(-1)。最佳发酵培养条件为:装液量500 mL三角瓶装105 mL,接种量0.87%,发酵时间41.35 h,温度28℃,转速180 r·min~(-1)。利用最佳摇瓶发酵工艺,T-500菌株所产生的脂肽类抗生素对纹枯病菌的抑菌带最宽,达(11.23±0.15)mm,菌含量达(7.41±1.18)×109CFU·mL~(-1)。经摇瓶发酵试验和抑菌活性验证,理论预测值与实际值无显著差异。质谱和色谱检测表明:优化发酵工艺后产生的Surfactin含量较基础培养基提高了48.2%,Iturin含量较基础培养基提高了180.9%;优化发酵工艺后检测到了Fengycin的产生,但优化前未发现Fengycin的产生。[结论]利用响应曲面法成功优化了枯草芽胞杆菌T-500产脂肽类抗生素的摇瓶发酵工艺;优化后,T-500产脂肽类抗生素产量增加,抑菌活性增强。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
乔俊卿 刘邮洲 张荣胜 刘永锋
[目的] 枯草芽胞杆菌 (Bacillus subtilis) T-500是1株对水稻纹枯病和稻瘟病均有良好防治效果的生防菌，本研究通过优化其摇瓶发酵工艺，从而提高发酵液中脂肽类抗生素的含量，为T-500菌株生防制剂的开发提供技术支撑。[方法] 本研究以水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）为指示菌，利用酸沉淀法提取T-500菌株发酵液中的脂肽类抗生素，并进行脂肽抗生素粗提液的抑菌效果分析，筛选影响抑菌效果的发酵培养基主成分；随后通过Plackett-Burman试验设计、中心组合试验设计（
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张盼望 晏涛 王喜亮 况世昌 周祖涛 肖运才
选取８６８只２８０日龄产蛋率相近海兰褐蛋鸡，随机分为高温组（３３℃）、益生菌组（枯草芽胞杆菌＋３３℃）、室温组（２６℃），试验期为２０ ｄ，研究益生枯草芽胞杆菌ＨｄＲａ ＢＳ１缓解动物热应激的可行性及其机制。结果发现，与高温组相比，益生菌组在全期产蛋率、平均日采食量、平均蛋质量方面分别提高了２．６０％（Ｐ０．０５）和０．９６％（Ｐ＞０．０５），但没有达到室温组水平，且在腹泻率、蛋破损率方面均有降低；血清内毒素、ＩＬ－１水平分别降低了３７．４１％（Ｐ＞０．０５）和２０．９８％（Ｐ０．０５）；益生菌显著上调盲肠紧密连．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
雷晶晶 康业斌 苗圃 马君红 石秋环
采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率；同时，采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期，在培养11 h后同时进入稳定生长期；B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后，在荧光显微镜下，菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数，且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天，烟株根际土壤活菌数达1.61×10~7 CFU·g~(-1);在自然土壤中接种该菌第42天，烟株根际土壤活菌数达1.46×10~7 CFU·g~(-1);接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王晓宇 罗楚平 陈志谊 刘永锋 刘邮洲 聂亚锋 于俊杰 尹小乐
【目的】对枯草芽胞杆菌Bs-916进行全基因组测序,为今后更好挖掘和利用该菌生防潜力提供较多的分子生物学信息。【方法】通过应用比较基因组学软件与另一测序菌株Bs168进行全基因组序列分析。【结果】Bs-916菌株全基因组大小为3 925 958 bp,GC含量为46.4%,与其它已测序全基因组芽孢杆菌相比,其GC含量最高;预测所得CDS数为4 056个,152个串联重复区域,转座子103个,IS(插入序列)序列数量37个,tRNA 46个,rRNA 39个;比较基因组学分析其含有8个NRPS/PKS基因簇,其中bacillomycin L,macrolactin,difficidin这3个基因...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘芳 梁运祥
以质粒pAD123为模板扩增出绿色荧光蛋白基因(gfp)序列,扩增产物连接到经酶切的枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis)整合载体pAXc,构建重组质粒pAXc-gfp.pAXc-gfp线性化后转入野生型枯草芽胞杆菌B411,gfp编码序列通过同源重组整合到B.subtilis B411染色体上,获得在无抗性选择压力下稳定表达绿色荧光蛋白的重组子B412.
关键词：
绿色荧光蛋白 枯草芽胞杆菌 基因标记
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