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[期刊] 中国水产科学
[作者]
余泽辉 张佳 耿毅 邓梦玲 汪开毓 黄小丽 陈德芳 王均
2012–2013年四川齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)养殖场流行一种临床特征为突眼、体表出血和神经症状的传染病,在肝、肾涂片检查中发现链状G+球菌。从自然发病齐口裂腹鱼分离到2株形态与涂片检查一致的G+球菌(DML120817,YZH130830),其在脑心浸液培养基(BHI)平板上28℃培养48 h,形成白色圆形、表面光滑、边缘整齐的针尖大小菌落。经人工感染实验证实分离菌株为该病的病原菌。根据分离菌株的形态学和生理生化检测结果初步判定其为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae);16S r RNA基因序列分析表明,2分离株(Gen Bank登录...
[期刊] 水产学报
[作者]
陈德芳 芦路 蒲云丹 瞿炼石 刘博 黄小丽 欧阳萍 李志琼 耿毅
为探究齐口裂腹鱼热休克蛋白60（Schizothorax prenanti Heat shock protein 60， SpHsp60）cDNA基因序列的分子特征和在细菌感染中的响应情况，实验利用RACE技术克隆获得了2 277 bp的SpHsp60 cDNA序列，预测编码575个氨基酸，其与脊椎动物具有较高的保守性；齐口裂腹鱼的组织表达模式分析显示，SpHsp60在肝胰脏表达量最高，血液次之，而在皮肤、肌肉和肠道中表达量低；无乳链球菌感染过程中，血液、肝胰脏、中肾和脾脏的SpHsp60 mRNA表达量在感染后6 h发生显著性变化，提示组织中SpHsp60能快速响应感染；且肝胰脏和中肾在感染后6 h～72 h表达量变化均显著高于对照组，而脾脏则显著低于对照组。研究表明SpHsp60可能通过快速响应参与齐口裂腹鱼对抗细菌感染的过程，研究为肝胰脏和中肾组织中Hsp60 mRNA表达量作为齐口裂腹鱼感染无乳链球菌的危险信号分子提供基础数据。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张德锋 刘礼辉 任燕 李宁求 林强 潘厚军 石存斌 吴淑勤
2014年海南省文昌市多个养殖场的罗非鱼出现暴发性疾病,患病罗非鱼表现出体色发黑、打转游动、眼球突出或混浊等典型的链球菌病症状。从患病罗非鱼的肝、肾、脾、眼球和脑等组织中分离到19株病原菌,即TC-1、TC-2、BL1441~BL1448和WT1451~WT1459。通过形态观察、生理生化特征和16S r RNA基因序列分析等方法对病原菌进行鉴定,结果表明,这些病原菌均为无乳链球菌。溶血试验结果表明,TC-1、TC-2和BL1441~BL1448菌株为β-溶血性无乳链球菌,而WT1451~WT1459菌株为不溶血无乳链球菌。进一步通过MLST、分子血清型和毒力相关基因检测等技术对这些分离菌株进...
关键词：
罗非鱼 无乳链球菌 分子分型 致病性
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张雨薇 耿毅 余泽辉 汪开毓 李亚军 牟维豪 曾毅仁 叶梦婷
２０１５年１０月四川省雅安市某养殖场的黄河裸裂尻鱼（ＳｃｈｉｚｏｐｙｇｏｐＳｉＳ ｐｙｌｚｏｖｉ ＫｅＳＳｌｅｒ）暴发传染病，临床表现为神经症状，眼球、下颌和鳃盖等出血或无明显临床表现而突然死亡，内脏涂片见革兰氏阳性球菌。从病鱼的肝、脾和肾组织中分离到２株病原菌（ｚｙＷ１５１０１１，ｚｙＷ１５１０１２），通过人工感染、无乳链球菌种属特异性ｃｆｂ基因（ｇｂＳ－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｅｎｅ ｃｆｂ，ｃＡＭｐ ｆＡｃｔｏｒ）的ｐｃｒ检测和１６Ｓ ｒ ｒｎＡ基因序列分析等方法对病原菌进行鉴定，发现２株病原菌均为无乳链球菌（ＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕＳ ＡｇＡｌＡｃｔｉＡｅ）。２株病原菌１６Ｓ ｒ ｒｎＡ序．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 季桓涛 肖炜 李大宇 邹芝英 杨弘 李庆勇 朱德兴
为探讨池塘种植鱼腥草对无乳链球菌引起吉富罗非鱼肝脏损伤修复作用研究，在养殖池塘中分别种植0%（对照组）、5%、10%、15%比例池塘面积的鱼腥草，养殖90 d后进行无乳链球菌人工感染，分别在感染后0、24、48和72 h采集肝脏，进行肝脏生化、抗氧化性能、组织病理和HSP 70表达研究。结果显示，感染后48和72 h对照组肝脏ALT和AST活力最高，种植鱼腥草各组ALT活力在感染前后均无显著性变化，感染后72 h，10%组AST活力已恢复到感染前水平。抗氧化指标显示，种植鱼腥草能减缓链球菌感染引起吉富罗非鱼肝脏T-AOC下降，显著提高肝脏中SOD、GSH-PX、CAT和 NOS等抗氧化酶的活性，增加自由基清除能力，减少脂质过氧化MDA的产生。组织病理学观察显示，对照组罗非鱼感染后48 h 肝窦明显淤血，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，而各种植鱼腥草组罗非鱼在感染后仅表现为肝细胞明显嗜酸，肝窦轻度扩张。定量PCR结果显示，每组罗非鱼肝脏HSP 70表达量在感染后都显著性升高，感染后各时间点对照组的HSP 70表达量均显著高于鱼腥草种植组。研究表明，种植鱼腥草能显著改善链球菌感染所造成的吉富罗非鱼肝脏AST和ALT上升，提高抗氧化应激能力，减轻链球菌感染引起病理损伤；吉富罗非鱼通过肝脏HSP 70高表达促进受损蛋白质的早期修复与降解，种植鱼腥草具有抗炎作用和提高鱼体抵御病原菌的能力。
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 李大宇 邹芝英 肖炜 韩珏 杨弘
为探究高水温对尼罗罗非鱼无乳链球菌病暴发的影响，以体质量为（６２．０±３．３３）ｇ的尼罗罗非鱼为研究对象，设置生长最适宜组（２９°Ｃ）和高温应激组（３３°Ｃ）２个处理水平，暂养７ ｄ后分别进行人工感染实验统计累计死亡率，并于攻毒后０、１２、２４、４８、９６和１２０ ｈ采集血液和组织样本，开展高温应激下无乳链球菌感染对尼罗罗非鱼血清生化指标和组织病理影响的研究。结果显示，水温３３°Ｃ高温应激组尼罗罗非鱼累计死亡率显著高于２９°Ｃ组；谷丙转氨酶（ＡＬＴ）活性在感染９６ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；谷草转氨酶（ＡＳＴ）活性在感染４８ ｈ之后３３°Ｃ组的值显著高于２９°Ｃ组；钾（Ｋ＋）和钠．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
张新艳 樊海平 钟全福 卓玉琛 林煜 曾占壮
从患暴发性流行病罗非鱼的肝脏中分离获得一株细菌TL60829NA,将TL60829NA对罗非鱼进行人工感染致病性试验,试验感染罗非鱼表现出自然发病症状,确认分离菌株为罗非鱼暴发性流行病的致病菌。分离株菌经形态学观察、Bio Merieux Vitek全自动微生物分析系统GPI测定卡分析和16S rRNA特异性基因序列与NCBI中收录的其它引起罗非鱼病害的链球菌的16S rDNA序列构建的系统发育进化树显示,分离细菌与其它无乳链球菌的16S rDNA序列构成一个进化分支,而海豚链球菌则构成另一分支,确定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalaciate)。分离菌株对氨苄西林、...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
黎娅 罗福广 左跃 易弋 伍时华 杨军
2012年9月5日广西柳州市某罗非鱼养殖场出现暴发性疾病,从患病罗非鱼的脑组织中分离到1株γ溶血性革兰氏阳性链球菌。通过生理生化试验、基于cfb基因的PCR鉴定及16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为无乳链球菌。该菌株为γ溶血性,CAMP试验阴性,与常见无乳链球菌有较大差别。人工感染试验结果显示分离菌株对罗非鱼具有很强的致病性。药物敏感试验结果显示分离菌株对诺氟沙星、多黏菌素B、复方新诺明耐药,对青霉素G等17种药物均敏感。
[期刊] 水产学报
[作者]
崔静雯 汪开毓 贺扬 陈德芳 黄小丽 王均 龙波 张丽杰 蒋洁
针对尼罗罗非鱼无乳链球菌病的致病机制，本实验建立了无乳链球菌感染尼罗罗非鱼致脑膜炎的模型，并制定相应的临床症状及组织病理学评分系统对其进行了研究。将４３尾健康尼罗罗非鱼随机分为４组：对照组（ｎ＝１０）和３个实验组（ｎ＝３３）。３个实验组根据不同感染剂量分为１．０×１０～６ｃｆｕ组（ｎ＝１１）、１．０×１０～７ｃｆｕ组（ｎ＝１１）和１．０×１０～８ｃｆｕ组（ｎ＝１１）。实验组分别将１．０×１０～６、１．０×１０～７和１．０×１０～８ｃｆｕ的无乳链球菌菌液腹腔注射尼罗罗非鱼复制脑膜炎模型。对感染尼罗罗非鱼的临床症状、剖检病变、脑组织（端脑、中脑、小脑、延脑）病理学进行判定，并结合细菌学检测，按照拟．．．
关键词：
尼罗罗非鱼 无乳链球菌 脑膜炎 模型
[期刊] 淡水渔业
[作者]
赵长臣 江小燕 刘春花 张德峰 罗霞 曾伟伟 陈总会 黄志斌
为查明梭鲈(Lucioperca lucioperca)凸眼病病原,从患病梭鲈病灶眼、肝、脾和肾分离纯化病原菌,进行了生理生化特性测定及16S rRNA基因序列分析,并开展人工感染试验,测定其血清型及MLST分型,并利用纸片扩散法进行药敏特性分析。结果显示:分离菌株(命名为SL1701株)为本次引发梭鲈病害的致病菌,Ib-ST261型。回归感染实验证实,分离得到的细菌SL1701对健康梭鲈具有非常强的致病性,4.5×105CFU/m L时可使80%受感染梭鲈死亡,并可复制出自然发病鱼的症状。菌株SL1701革兰氏染色为阳性链球菌,γ溶血,生理生化特性与普通无乳链球菌基本一致,16S rRNA基因序列与无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)同源性最高,综合判定分离菌株为无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)。药敏试验结果显示:分离菌株SL1701对氟苯尼考、氟罗沙星等17种抗生素高度敏感,对青霉素、磷霉素等8种抗生素耐药。结果表明,分离菌株SL1701为Ib-ST261型无乳链球菌,养殖时可选用氟苯尼考及氟罗沙星等药物进行防控。
[期刊] 水产学报
[作者]
祝璟琳 邹芝英 李大宇 肖炜 韩珏 杨弘
为了解尼罗罗非鱼感染无乳链球菌后各组织的病理变化,运用革兰氏染色和电镜负染技术对一株从自然发病的尼罗罗非鱼上分离的无乳链球菌进行形态观察,采用组织切片和超薄切片电镜技术对患病尼罗罗非鱼的肝脏、脾脏、肾脏、脑、心肌、骨骼肌、肠、鳃等8种组织进行病理学研究,探讨该病的致病机理。结果显示,革兰氏染色呈阳性,负染后透射电镜观察多数细菌呈链状排列;组织病理学变化主要是各内脏器官的广泛充血、水肿、变性和炎性细胞浸润,严重的细胞坏死;超微病理显示,大量球菌侵染脾脏等内脏组织,破坏细胞结构和各种细胞器;细胞界限模糊,细胞核畸形,线粒体肿大,嵴断裂,溶解;粗面内质网肿大、核糖体脱落;细胞质空泡化严重;心肌和骨骼...
关键词：
尼罗罗非鱼 无乳链球菌 病理学 超微结构
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚学良 徐晓丽 李贺密 钟文慧 臧莉 李灏 杨超敬
为查明天津地区养殖红尾皇冠鱼（Ａｅｑｕｉｄｅｎｓ ｒｉｖｕｌＡｔｕｓ）大量死亡的原因，取患病红尾皇冠鱼进行细菌分离，从病鱼肾脏中分离到优势菌株０７１９０１，人工感染试验证实其对红尾皇冠鱼有较强的致病性；采用形态学观察、生理生化特性、１６ｓ ｒ ｒｎＡ基因序列系统发育树分析及ｃｆｂ（Ｇｂｓ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｇｅｎｅ ｃｆｂ，ｃＡＭｐ ｆＡｃｔｏｒ）基因检测对菌株０７１９０１进行鉴定。结果显示，菌株０７１９０１为革兰氏阳性球菌，生化特性与链球菌属的无乳链球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ＡＧＡｌＡｃｔｉＡｅ）相近，基于１６ｓ ｒ ｒｎＡ基因序列的系统发育分析将菌株０７１９０１与无乳链球菌聚为一支．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
姚学良 徐晓丽 李贺密 钟文慧 臧莉 李灏 杨超敬
为查明天津地区养殖红尾皇冠鱼(Aequidens rivulatus)大量死亡的原因,取患病红尾皇冠鱼进行细菌分离,从病鱼肾脏中分离到优势菌株071901,人工感染试验证实其对红尾皇冠鱼有较强的致病性;采用形态学观察、生理生化特性、16S r RNA基因序列系统发育树分析及cfb(GBS-specific gene cfb,CAMP factor)基因检测对菌株071901进行鉴定。结果显示,菌株071901为革兰氏阳性球菌,生化特性与链球菌属的无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)相近,基于16S r RNA基因序列的系统发育分析将菌株071901与无乳链球菌聚为一支...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
罗辉 杨月静 向梦斌 叶华 郑曙明 王晓清
为了研究嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)对齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)血液生理生化指标的影响,将180尾齐口裂腹鱼平均分成6组(4、24和48 h对照组;4、24和48 h感染组)。对照组腹腔注射0.2 mL0.65%的无菌生理盐水,感染组腹腔注射0.2 mL 2.5×107CFU/mL的嗜水气单胞菌液。分别测定4、24和48 h对照组和感染组齐口裂腹鱼各项血液生理生化指标,并对肾脏、肝脏和肌肉组织进行病理学观察。结果显示:谷丙转氨酶、白蛋白、总胆固醇、
[期刊] 淡水渔业
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 罗伟 敖秋桅 谭芸 罗永巨 蒋和生 甘西
为探讨无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)感染罗非鱼(Oreochromis spp)的致病途径。采用腹腔注射、灌胃和浸泡三种方式对吉富罗非鱼进行无乳链球菌(HN016菌株)胁迫感染,利用平板活菌计数法统计三种方式感染后病原菌在体内组织的分布。注射和灌胃两种方式感染后均出现典型的链球菌感染发病症状,其中注射组在感染24 h后出现死亡高峰,死亡率为92.5%;灌胃组感染48 h后出现死亡高峰,死亡率为90%;而浸泡组,感染后均没有出现明显的发病症状,也没有出现死鱼。注射组和灌胃组在感染后2 h,其脾脏、肝脏、前肾、胃、腮、皮肤和肌肉组织中均可分离出病原菌,5 h后在脑组织中均可分离出病原菌,8 h后各组织分离出的病原菌数达到峰值;而浸泡组在感染8 h后才从各组织中分离出病原菌,且它们的数量均低于同时期的注射组和灌胃组。注射和灌胃两种方式可使吉富罗非鱼快速感染无乳链球菌而发病,而浸泡方式感染后病原菌虽可以侵入机体,但不表现出症状。由此,我们推测在自然条件下养殖的罗非鱼是通过口腔采食携带无乳,链球菌的食物而被感染。
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