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[期刊] 实验技术与管理
[作者]
郭传文 徐越 杜淑媛
I型胶原蛋白是细胞生物学中广泛应用的细胞外基质蛋白之一,也是组织工程等领域常用的生物活性材料,是生物学、细胞力学实验室大量使用且必需的蛋白试剂,一般从大鼠鼠尾中提取获得,称为鼠尾胶原。通过抽取鼠尾肌腱、醋酸溶解、蛋白透析纯化等操作,建立了一种鼠尾胶原的高效提取与纯化技术,能简便、快速地分离得到高纯度的鼠尾胶原。经检测,利用该方法得到的鼠尾胶原具有与商用鼠尾胶原极其相似的实际使用效果。该方法可节约大量实验经费,具备推广价值,同时涉及多种基础实验操作,亦可作为实验教学内容。
关键词：
鼠尾胶原 提取与纯化 实验教学
[期刊] 水产学报
[作者]
麻金花 翁凌 颜龙杰 张凌晶 刘光明 曹敏杰
针对海参自溶现象,研究海参内脏中与胶原降解相关蛋白酶的存在情况,以期了解内源性蛋白酶在海参自溶过程中发挥的作用,为解明自溶的内在机理提供理论依据。通过硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析、Sephacryl S-200凝胶过滤柱层析、Phenyl Sepharose FF疏水柱层析及M ini Q离子交换柱层析等方法,从海参内脏中分离纯化出降解明胶的蛋白酶。利用荧光底物研究其酶学性质及其对海参体壁胶原蛋白的降解情况。结果表明,该酶最适温度为30℃,最适p H为7.5,可被金属蛋白酶抑制剂EDTA、EGTA完全抑制,亦可被PM SF、Pefabloc SC等丝氨酸蛋白酶抑制剂...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
黄雯 袁春红 徐萌 王金梅 包建强
选取淡水鱼斑点叉尾鮰（Ｉｃｔａｌｕｒｕｓ ｐｕｎｃｔａｕｓ，以下简称鮰鱼）和海水鱼蓝点马鲛（ｓｃｏｍｂｅｒｏｍｏｒｕｓ ｎＩｐｈｏｎＩｕｓ，以下简称鲅鱼）鱼皮作为原料，进行胶原蛋白的提取研究。提取方法改良如下：在预处理阶段，鱼皮样品被尽可能切碎且调节溶液更换频率；在提取阶段，在盐析步骤前，添加三羟甲基氨基甲烷粉末将醋酸溶液的酸碱值调节至中性。结果表明，应用改良后的方法提取胶原蛋白，提取周期缩短为７ ｄ。鮰鱼鱼皮胶原蛋白的变性温度是３６．５℃，鲅鱼鱼皮胶原蛋白是３０．５℃。水解电泳图谱显示，鲅鱼鱼皮胶原蛋白比鮰鱼鱼皮胶原蛋白更易被完全水解，鮰鱼鱼皮胶原蛋白比鲅鱼鱼皮胶原蛋白更稳定。
关键词：
斑点叉尾鮰 蓝点马鲛 胶原蛋白 提取方法
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘战民 陆兆新 吕凤霞 别小妹 赵海珍
采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 ...
关键词：
毕赤酵母 原果胶酶 分离纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
陆剑锋 万全 殷章敏 林琳 翁世兵 叶应旺 姜绍通
胶原蛋白是生物体内一种重要的蛋白质,也是结缔组织的主要蛋白成分。与陆生动物(如猪、牛等)比较,水生动物胶原蛋白具有优良的理化性质和生理活性功能,已引起人们的广泛关注。中华鳖是我国传统的名贵水产品,其裙边胶原蛋白含量丰富,具有极高的药用价值和营养价值。采用胃蛋白酶酶解法在酸性条件下提取中华鳖裙边胶原蛋白,研究酶添加量、底物浓度、提取时间对提取效果的影响,确定了制备裙边胶原蛋白的最适条件为:酶添加量4mg/mL,底物浓度4%,提取时间14h。粗提胶原蛋白通过盐析、透析等纯化步骤,再经SDS-PAGE电泳、热变性温度测定、紫外及傅立叶变换红外扫描等技术方法分析了胶原蛋白的生化特征,结果显示提取到的裙...
关键词：
中华鳖 裙边 胶原蛋白 提取 纯化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李华
为了开发和利用大鲵皮胶原蛋白,在低温4℃条件下使用酶解工艺提取养殖大鲵皮中的胶原蛋白,并研究了其组成和部分生化性质。结果表明:大鲵皮羟脯氨酸含量为22.3 mg/g,胶原蛋白提取率为26.7%(湿重),其中水分、粗灰分、粗脂肪和粗蛋白含量分别为6.75%、0.62%、0.38%和92.10%,含有成人六种必需氨基酸和儿童必需氨基酸两种,亚氨基酸含量为171残基/1 000残基数,脯氨酸羟基化比例为51.5%。紫外吸收显示大鲵皮胶原蛋白的强吸收峰在230 nm附近,根据SDS-PAGE分析,含有两种不同的α链(α1和α2),初步确认提取得到的大鲵皮胶原蛋白是Ⅰ型胶原蛋白。
[期刊] 水产学报
[作者]
崔凤霞 薛长湖 李兆杰 董平 薛冬梅
对仿刺参(Stichopus japonicus)胶原蛋白的提取及理化性质进行了研究。结果表明,低温提取可得到胃蛋白酶促溶且去除端肽(telopeptide)的酸溶性胶原蛋白(PSC)。紫外-可见扫描测得PSC的最大吸收峰位于220nm;氨基酸分析发现,在1 000个总氨基酸残基中,甘氨酸为329个,羟脯氨酸为66个,羟脯氨酸与脯氨酸之比为0.69,酪氨酸、苯丙氨酸及组氨酸的含量较低,可能不含胱氨酸,这些特性均符合Ⅰ型胶原的特征。差示量热扫描法(DSC)测定仿刺参PSC的热稳定性温度(Ts)为57℃,低于牛皮Ⅰ型胶原5℃;苯酚-硫酸及次甲基蓝法测得PSC的总糖及粘多糖含量分别为0.61%及0....
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
傅燕凤 沈月新 杨承刚 张渊
研究了用有机酸(醋酸、柠檬酸、乳酸)对几种主要的淡水鱼,鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobdis)、草鱼(Glenopharyngodon idellus)鱼皮胶原蛋白进行提取。研究发现,鲢、鳙、草鱼鱼皮的蛋白质含量分别约为25.9％、23.6％、29.8％,羟脯氨酸含量分别为1.8％、1.9％、2.3％。结果表明,鲢、鳙鱼皮经2.5％NaCI溶液(1:10),草鱼鱼皮经5％NaCl溶液(1:10),温度5℃左右,12h磁力搅拌处理两次,除去的可溶性杂蛋白分别占原总蛋白的5.9％、6.7％、9.1％。鱼皮再经加酸(1:30)溶胀、...
关键词：
鱼皮 胶原蛋白 提取
[期刊] 水产学报
[作者]
周瑞 李若男 周丽莎 邱婷婷 王静玉 谭啸 陈舜胜
为增加暗纹东方鲀附加值，考察不同处理方法对提取暗纹东方鲀鱼皮胶原蛋白的影响，本研究以暗纹东方鲀鱼皮为研究对象，通过热水法、酸法和胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、无花果蛋白酶处理鱼皮提取 胶原蛋白。通过对不同胶原蛋白的提取率、氨基酸组成、傅里叶红外光谱（FTIR）、紫外光谱(UV)、扫描电镜、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的研究，对暗纹东方鲀鱼皮胶原蛋白特性进行表征和比较。结果显示，用胃蛋白酶得到的胶原蛋白提取率最高；氨基酸组成相似但含量不同；3种酶制备的胶原蛋白中脯氨酸含量显著低于酸和热水制备的胶原蛋白；FTIR扫描结果表明，5种处理方法得到的胶原蛋白都存在Amide A、Amide B、Amide Ⅰ、Amide Ⅱ和Ⅲ，均保持了胶原蛋白三螺旋结构；紫外光谱显示在235 nm左右有强吸收峰，结合FTIR确定其为典型的胶原蛋白，经过SDS-PAGE分析确定暗纹东方鲀皮中的胶原蛋白为Ⅰ型胶原蛋白，酸法和胃蛋白酶较好的保留了蛋白结构，木瓜蛋白酶作用化学键广泛，得到小分子量的胶原蛋白分子；扫描电镜结果显示，酸法提取的胶原蛋白最适合应用在生物医学材料上运载药物。由此可见，不同处理方法提取的胶原蛋白理化特性存在一定差异，不同的酶制备胶原蛋白分子量分布会产生明显差别，可根据研究需要选用不同处理方法开发胶原蛋白产品。
[期刊] 林业科学研究
[作者]
杨正伟 秦利军 赵德刚
[目的]建立快速、简便、重复性好、得率高的杜仲胶颗粒提取技术,为进一步分析胶颗粒膜蛋白、脂肪酸、糖脂等组成及杜仲橡胶分子量奠定基础。[方法]以杜仲叶片和翅果为材料,利用不同离心条件及研磨次数探究杜仲胶颗粒得率,并结合光镜与电镜观察结果,探讨适合从不同杜仲组织器官中提取胶颗粒的最优条件。[结果]杜仲组织(叶片或翅果)液氮经速冻、反复研磨捣碎6次过滤10次,在4℃条件下以5 000 g离心力,45度定角离心10 min,并反复漂洗8次得到的杜仲胶颗粒含量最高。在此条件下,以10月采摘的杜仲叶和翅果为材料,提取的杜仲胶颗粒含量可分别达3.70 g·kg~(-1)叶片、5.37 g·kg~(-1)翅果。进一步观察发现,不论是杜仲叶片或翅果随着其发育的成熟,组织中胶颗粒粒径大小和积累量均呈现先增加后稳定的变化趋势。杜仲胶颗粒在光镜和电镜下呈球形,胶颗粒间粒径大小差异较大。以10月杜仲叶、翅果及树皮为例,小胶颗粒(1■4μm)分别占39%,53%,98.38%,中等胶颗粒(4■7μm)分别占38%,34%,0.12%,大胶颗粒(7■11μm)分别占23%,13%,0.05%。[结论]本研究建立的杜仲胶颗粒提取技术较为快捷,得率高,可快速对不同时期不同组织器官的杜仲胶颗粒进行提取。
关键词：
杜仲 杜仲胶颗粒 提取纯化 显微观察
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余欣 欧阳五庆 张黎 王莉
分离培养小鼠皮肤成纤维细胞,用2种富含腺嘌呤类衍生物的玉米幼芽提取物(20 mg/L)提前保护细胞后,体外构建H2O2急性氧化损伤细胞模型,应用RT-PCR对小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达进行半定量检测。结果表明,损伤对照组(Ⅱ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA的表达量分别为空白对照组(I组)的24%(P<0.01)和20%(P<0.01),而药物保护组(Ⅲ组、Ⅳ组)小鼠皮肤成纤维细胞Ⅰ型前胶原mRNA的表达量均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的3.5倍(P<0.01)和1.8倍,Ⅲ型前胶原mRNA的表达量也均高于损伤对照组,分别是损伤对照组的4.6倍(P<0.01)...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
叶开玉 卢美英 于萍 陈殿余
针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明,两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S 3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260/A280均介于1.8~2.0之间,A260/A230均大于2.0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度,可以满足后续分子生物学研究的要求。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
阎巧娟 韩鲁佳 江正强
为了提高金银花中绿原酸提取物的得率和含量 ,进一步优化了乙醇回流法的提取工艺 ,并探讨了 p H值的影响 ,杂质的去除方法和绿原酸的纯化方法。结果显示 :乙醇体积分数约为 70时综合效果比较理想 ,绿原酸得率 32 .88 ,质量分数达 4 0 .15。溶媒的 p H值约为 4时 ,绿原酸的纯度和得率都最高 ,分别达 4 5 .2和 36 .5 9。絮凝法优于醇沉法能够有效地初步纯化绿原酸 ,以添加质量分数为 1.5絮凝剂较好。 4种常见的纯化方法中 ,乙酸乙酯法所得绿原酸的质量分数最高 ,可达 91.1。
关键词：
金银花 绿原酸 提取 纯化
[期刊] 中国水产科学
[作者]
李莉 顾赛麒 王锡昌 刘源 高榕
为了优化人工养殖大鲵(Andrias davidianus Blanchard)皮中胶原蛋白的提取工艺,以加酶量、液料比和酶解时间为试验因素,胶原蛋白提取率为响应值,采用Box-Behnken设计进行试验。通过响应面法考察了3个因素对胶原蛋白提取率的影响,建立了胶原蛋白提取率的二次多项式回归模型,并对提取工艺进行了优化。试验结果表明,3个因素对鲵皮中胶原蛋白提取率的影响大小次序为:液料比>酶解时间>加酶量;交互项中"液料比-酶解时间"项对提取率影响显著,其他交互项对提取率影响不显著。为满足实际需要,对模型预测得到的大鲵皮胶原蛋白最优提取工艺稍做调整,具体参数为:加酶量16.5%、液料比15 m...
关键词：
大鲵皮 胶原蛋白 提取工艺 响应面
[期刊] 水产学报
[作者]
汪海波 梁艳萍 汪海婴 周坚 张寒俊
以草鱼鱼鳞为原料,分别提取鱼鳞中的酸溶性胶原蛋白(ASC)和酶溶性胶原蛋白(PSC),着重开展了其包括热稳定性、体外酶降解性以及胶原海绵材料特性在内的相关研究,并与哺乳动物来源的猪皮胶原(PC)相比较。实验结果表明,制备所得的3种胶原蛋白均为典型的Ⅰ型胶原并具有完整的三螺旋结构;PC的热变性温度(41.6℃)明显高于ASC(34.8℃)和PSC(35.2℃);3种胶原蛋白的体外酶降解性能受水解酶的种类、胶原蛋白提取方法、胶原蛋白来源、胶原蛋白受热历史以及蛋白的自组装程度影响。胶原蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对淡水鱼胶原均具有不同程度的降解能力,但胶原蛋白酶的降解能力最强;相同条件下,3种胶原蛋...
关键词：
草鱼 鱼鳞 胶原蛋白 生物学性能
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