【目的】了解不同稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）菌株群体中PWL基因家族的分布和变异特征，为研究不同稻瘟病菌群体的遗传多样性及特异性提供依据。【方法】通过参考NCBI中公布的无毒基因序列分别对PWL基因家族的启动子区和CDS区设计特异性引物共8对，对2020年采自黑龙江省和海南省不同地区的397个稻瘟病菌单孢分离菌株提取DNA，进行无毒基因的PCR扩增并通过琼脂糖凝胶电泳检测，从检测结果中分别选取囊括不同地区的代表菌株对扩增片段进行测序分析。测序结果与NCBI中相应无毒基因启动子区和CDS区的碱基与氨基酸序列进行比较分析。【结果】在PCR电泳检测结果中，PWL1在所有菌株中均未检测出；PWL2、PWL3和PWL4在黑龙江省和海南省中均扩增出特异性片段，说明这3种基因在两省中均有分布并分别存在不同的分布频率与变异类型。其中PWL2在黑龙江省和海南省中分布频率最高，分别为98.14%和100%;PWL3和PWL4在两省中的分布频率具有显著差异，这2种基因在黑龙江菌株中频率分别为89.30%和82.79%，而在海南菌株中均为5.49%。通过对无毒基因组合进行分析，结果显示，组合类型可分为6种，分别为PWL(f)、PWL2、PWL3、PWL2+PWL3、PWL2+PWL4、PWL2+PWL3+PWL4。其中黑龙江菌株含有所有组合类型，海南菌株仅含有2种，说明黑龙江菌株与海南菌株相比无毒基因型种类较为丰富。通过对PWL基因家族的PCR产物测序发现，PWL基因家族在启动子区和CDS区变异位点丰富，以点突变和缺失为主要变异类型划分为9种，且不同群体来源菌株的变异类型具有特异性和一致性。其中PWL2检测出5种变异类型PWL2-(1,2,3,4,5)，碱基序列变化导致氨基酸序列发生错义突变；PWL3和PWL4分别检测出2种变异类型，分别为PWL3-(1,2)和PWL4-(1,2)，均发生移码突变使后面氨基酸发生变化。【结论】不同群体来源的稻瘟病菌菌株中PWL基因家族的分布和变异类型具有地域差异性，且变异位点丰富。

【目的】通过检测黑龙江省和海南省不同稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）菌株群体中AVR-Pita家族的分布情况和变异特征，了解其变异类型的致病表型，为区域内抗病种质的筛选与选育提供参考。【方法】通过参考NCBI中公布的AVR-Pita家族序列分别对启动子区和CDS区设计特异性引物共6对，对2020年采自黑龙江省和海南省不同地区的397个稻瘟病菌单孢菌株提取DNA，进行PCR扩增。通过电泳检测结果，分别选取囊括不同地区的代表菌株对扩增片段进行测序。测序结果与NCBI中相应的碱基与氨基酸序列进行比较分析，并利用水稻抗性单基因系，对不同变异类型的稻瘟病菌菌株进行无毒功能验证。【结果】在PCR电泳检测结果中，黑龙江省稻瘟病菌菌株携带所有待测基因，分布广泛且检出频率较高；而海南省稻瘟病菌菌株中仅携带AVR-Pita1和AVR-Pita2，并以低频率集中存在。无毒基因组成分析结果显示，黑龙江稻区的稻瘟病菌菌株复杂多样，携带的基因型种类较海南菌株丰富。PCR产物测序检测结果显示，AVR-Pita家族以点突变、插入和缺失为主要变异类型划分为19种,且不同稻瘟病菌群体来源的菌株，其变异类型具有特异性。AVR-Pita1检测出10种变异类型，其中AVR-Pita1-(1—5）为黑龙江省稻瘟病菌菌株独有的变异类型，AVR-Pita1-(6—10）为海南省稻瘟病菌菌株独有。对这10种变异类型经功能验证后发现，无毒功能均已丧失。AVR-Pita2检测出8种变异类型，其中AVR-Pita2-(1—4）为黑龙江省稻瘟病菌菌株独有，AVR-Pita2-(5—8）为海南省稻瘟病菌菌株独有。经功能验证后发现，无毒功能均已丧失。AVR-Pita3在黑龙江省仅检测出1种变异类型AVR-Pita3-1。【结论】黑龙江和海南稻瘟病菌群体中AVR-Pita家族均为突变后的等位基因型存在，经致病性鉴定后，检测出的所有突变类型均不能被相对应抗性基因Pi-ta和Pi-ta~2所识别，表现为感病。因此，抗性基因Pi-ta和Pi-ta~2在黑龙江省和海南省对稻瘟病的抗病育种与利用过程中可聚合其他抗性基因应用来保证品种抗病性。同时，不同地理来源的稻瘟病菌菌株群体中AVR-Pita家族的分布和变异类型具有特异性。

【目的】检测黑龙江省稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)无毒基因AVR-Pib、AVR-Pik和AvrPiz-t在不同地区、年份间流行菌株的分布情况与变异机制,了解其等位基因的致病表型,为黑龙江省抗瘟品种布局提供参考依据。【方法】利用NCBI中公布的无毒基因序列对3个无毒基因AVR-Pib、AVR-Pik和AvrPiz-t的基因全长和编码序列(coding sequence,CDS)分别设计特异性引物,将2016年和2017年采自黑龙江省不同地区335个稻瘟病菌单孢分离菌株的DNA进行PCR扩增,通过琼脂糖凝胶电泳检测分析,并挑选不同带型和不同地区代表菌株的PCR产物进行测序。测序结果与相应无毒基因序列进行碱基与氨基酸序列的比较分析,并利用水稻抗性单基因系,对不同变异类型的稻瘟病菌菌株进行致病型测定。【结果】在PCR电泳检测中AVR-Pib、AVR-Pik和AvrPiz-t均出现特异性条带,说明这3个无毒基因在黑龙江省均有分布,并以不同分布频率与突变类型出现。3个无毒基因平均扩增频率分别为75.52%、87.16%和85.67%。其中AVR-Pib通过电泳检测与PCR产物测序检测出4种带型(无带、高带、中高带与低带)和5种变异类型AVR-Pib(1-1、1-2、2、3、3-1),基因型AVR-Pib-1-1、AVR-Pib-1-2、AVR-Pib-2和AVR-Pib-3-1为新发现的变异类型,其中基因型AVR-Pib-1-1和AVR-Pib-1-2均为转座子Pot2的插入,但插入位点不同;基因型AVR-Pib-2在阅读框上游存在小片段的插入;基因型AVR-Pib-3-1碱基序列与原序列比对有4处差异,即32(C/G)35(T/A)36(T/A)38(T/A),导致氨基酸翻译提前终止。对检测到的5种等位基因型进行致病型测定,分析发现除正常基因型AVR-Pib-3外,其他变异基因型无毒功能均已丧失。而AVR-Pik经PCR产物测序检测出7种等位基因型,AVR-Pik(D、A、B、C、E、F、F2),碱基序列的变化均导致氨基酸错义突变,7种等位基因型均已见报道。无毒基因AvrPiz-t通过电泳检测和PCR产物测序分析,发现2种带型(高带和正常带型)与4种基因型AvrPiz-t(A、B、C、D),其中AvrPiz-t-A为正常基因型;基因型AvrPiz-t-B在191位处有碱基A的插入,导致氨基酸翻译提前终止;基因型AvrPiz-t-C为新发现的等位基因型,其特点在于与A类型存在17(T/C)和19位处碱基C的插入,发生移码突变翻译提前终止;高带型对应的无毒基因型AvrPiz-t-D经测序验证为Pot3转座子的插入。4种基因型菌株分别接种水稻单基因系发现,AvrPiz-t-A可以被Piz-t识别表现无毒,AvrPiz-t(B、C、D)均不能被Piz-t所识别而表现为有毒性。【结论】黑龙江省稻瘟病菌无毒基因AVR-Pib、AVR-Pik和AvrPiz-t分布较为广泛,且变异类型丰富,研究结果可为选育和推广携带相应抗病基因的水稻品种提供参考。

【目的】稻瘟病严重威胁黑龙江省水稻的生产，选育和利用抗瘟品种是最经济、安全和有效的措施。了解黑龙江省水稻主栽品种的稻瘟病抗性，明确稻瘟病抗性基因的有效性，为黑龙江省稻瘟病抗病种质资源的选育和利用提供依据。【方法】2018年秋季在黑龙江省水稻主产区采集134株水稻单孢菌株，采用病原物接种鉴定方法对黑龙江省50个水稻主栽品种进行抗性分析；针对已报道的35个稻瘟病抗病基因，利用基因特异性引物对参试品种及阳性对照品种进行抗瘟基因检测，对部分无阳性对照品种抗性基因扩增后测序，与NCBI中公布的参考序列比对，分析稻瘟病抗性基因在相应品种中的存在情况；通过基因聚合类型与品种抗性表现相关性分析，明确与黑龙江省水稻品种抗性表现相关的基因型。【结果】根据抗性频率评价，参试的黑龙江省50份水稻品种中，龙粳20表现为抗，龙粳67、龙垦202、龙粳40、龙粳31、龙粳57和龙粳43表现为中抗，其余43个品种均表现感病。通过品种组合抗性分析发现龙粳20与龙粳67等33对品种组合的联合抗性系数（resistance association coefficients,RAC）较高，联合致病性系数（virulence association coefficients,VAC）较低，联合抗病性较好，该类搭配结构具有良好的应用前景。通过特异性引物对品种携带的抗瘟基因鉴定结果显示，抗瘟基因Pish、Pi36、Pi33和Pi-CO39在供试品种中均被检测到，Pi63、Ptr、Pi37、Pi64、pi21、Pi9、Pi54、Pi-kh、Pia、Pikp、Pi35、Pikm和Pik的被检出率为50%—100%，说明这类基因在黑龙江省水稻育种中应用较广泛；Pita、Pib、Pii、Pi5、Piz-t、Pi50和Pi2的被检出率为10%—50%,Pid2仅在2个品种中被检测到，Pigm仅在吉粳88中被检测到，而Pit、Pid3、Bsr-d1、Pi25、Pid3-A4、Pi56、Pi1、Pike和Pb1在供试品种中均未被检测到，说明这类基因在黑龙江省水稻品种中分布较少。通过品种基因型分析发现，供试品种携带抗瘟基因12—19个不等，共58种抗瘟基因型，说明供试品种的抗瘟基因组合类型较丰富。单基因及多基因聚合与抗病相关性分析结果显示，Pi2、Piz-t、Pi50、Pi5和Pii的分布频率与携带该基因且表现抗病的百分率相当；研究发现品种携带抗瘟基因越多，其表现为抗病品种的概率越高，携带Pi2+Piz-t+Pi50+α聚合类型的6份品种均表现为抗病。【结论】参试的黑龙江省水稻种质资源抗性偏低，部分品种组合种植有较高应用价值，抗瘟基因在参试品种中分布不等，Pi2、Piz-t、Pi50、Pi5和Pii在品种抗病方面起主导作用，Pi2+Piz-t+Pi50+α基因聚合类型可以提高水稻抗瘟性。

对黑龙江省水稻稻瘟病的研究进展情况进行综述，着重在稻瘟病优势生理小种的变化动态、抗性基因、无毒基因、抗病品种研究等方面进行了总结，并简要提出了黑龙江省稻瘟病研究及抗病育种的未来发展方向。

为了确定不同地区谷瘟病菌群体中无毒基因PWL家族的分布和变异情况,从全国谷子主产区的不同区域采集分离了252株谷瘟病菌单孢菌株,提取基因组DNA,参考目前已知稻瘟病菌中无毒基因PWL家族的核苷酸序列开发合成了5对引物,通过PCR扩增对252株谷瘟病菌进行PWL家族基因检测,并对扩增片段进行测序分析。结果表明,252个谷瘟病菌菌株都不包含PWL1基因,65个菌株包含出PWL2基因,扩增率25.8%,252个菌株都包含PWL3与PWL4基因,扩增率100%。谷瘟病菌PWL3基因与稻瘟病菌中同源基因相比,在基因编码区存在849 bp的碱基插入,插入片段与non-LTR retrotransposon:MGL的相似度为96.7%,利用此差异可通过PCR技术快速区分谷瘟病菌与稻瘟病菌。谷瘟病菌PWL2基因存在多处单核苷酸变异,通过分析将其划分14个单倍型,分别为P1～P14。单倍型P1占绝对优势包含46个菌株,以此为基础衍生出其他主要单倍型,其次为单倍型P12包含7个菌株,并且多地区都存在特异性单倍型,说明我国谷瘟病菌种群具有较高的遗传多样性。谷瘟病菌中不存在PWL1无毒基因,PWL2无毒基因仅存在部分菌株中,PWL3和PWL4无毒基因存在所有谷瘟菌株中,PWL3和PWL4无毒基因对应的抗病基因在谷子上有重要的应用价值。

为了明确黑龙江省水稻品种资源稻瘟病抗性，挖掘优异种质资源，适时了解黑龙江省生理小种群体变化特征。采用中国生理小种命名方法，通过苗期喷雾接菌鉴定，将２０１３－２０１４年黑龙江省的稻瘟病菌株划分为７个群４２个生理小种，优势小种为ＺＤ５和ＺＤ７，出现频率分别为１９．７７％和１２．２１％，总频率为３１．９８％；通过苗期抗病性表现，筛选出宽抗谱品种１４份，这些品种携带２～７个抗稻瘟病基因，绥粳１２＋合江２３（Ｐｉ９、Ｐｉ２０、Ｐｉ３３、Ｐｉ５４、Ｐｉｋ）、牡丹江２６＋龙粳３１（Ｐｉ９、Ｐｉ２０、Ｐｉ３３、Ｐｉ５４、Ｐｉｔａ、Ｐｉｋ）、牡丹江２６＋合江２３（Ｐｉ９、Ｐｉ２０、Ｐｉ３３、Ｐｉ５４、Ｐｉｋ）等．．．

【目的】明确中国黑龙江、四川和海南省稻作区水稻穗腐病病原种类及优势致病菌，为水稻穗腐病的精准防控提供参考。【方法】在黑龙江、四川和海南省的13个水稻主要生产区采集水稻穗腐病样品，通过组织分离和单孢分离法，共分离纯化到568个菌株，对各菌株进行形态学鉴定，结合rDNA-ITS序列分析及科赫氏法则验证，明确13个水稻主要生产区穗腐病病原菌种类，分析其优势菌株及致病特征。【结果】黑龙江省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、链格孢属和镰孢菌属3类，分别占总病原菌数的1.10%、83.43%和15.47%，链格孢属为该省份的优势菌种。海南省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、镰孢菌属、黑孢霉属、毛色二孢属及蠕孢菌属5类，分别占总病原菌数的1.62%、89.47%、0.81%、1.62%和6.48%，镰孢菌属为该省份的优势菌种。四川省水稻穗腐病病原有弯孢菌属、链格孢属、镰孢菌属、黑孢霉属、蠕孢菌属5类，分别占总病原菌数的23.57%、13.47%、22.86%、16.43%和23.57%，无优势菌种。根据分生孢子及菌落形态差异筛选出具有代表性的23个菌株，结合rDNA-ITS序列分析及科赫氏法则验证，明确了水稻穗腐病的致病菌有弯孢菌属的新月弯孢（Curvularia lunata），链格孢属的细交链格孢（Alternaria tenuissima）、链格孢（A. alternata）、芸薹链格孢（A. brassicae），镰孢菌属的拟轮枝镰孢（Fusarium verticillioides）、新知镰孢（F. andiyazi）、木贼镰孢（F. equiseti）、变红镰孢（F. incarnatum）、厚垣镰孢（F. chlamydosporum），黑孢霉属的稻黑孢（Nigrospora oryzae）、球黑孢霉（N. sphaerica），毛色二孢属的可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）及蠕孢菌属的嘴突凸脐蠕孢（Exserohilum rostratum）。分别于孕穗期和抽穗扬花期接种穗腐病致病菌，发现无论是粳稻还是籼稻品种，海南省致病菌在水稻抽穗扬花期接种后平均病情指数均高于孕穗期接种的平均病情指数；黑龙江和四川省的致病菌在抽穗扬花期接种的平均病情指数略低于孕穗期接种的平均病情指数。【结论】中国黑龙江、四川和海南省稻作区水稻穗腐病致病菌具有多样性，黑龙江省以链格孢属为优势菌种，海南省以镰孢菌属为优势菌种，四川省优势菌种不明显。

根据黑龙江省 1980～ 1999年的林火资料 ,利用地理信息系统等工具 ,对黑龙江省林火时空动态和分布规律进行了研究。结果表明 ,黑龙江省林火可分为 1980～ 1987年的多发段和 1988年以后的低发段。人为火与总林火规律相似 :次数频谱周期为 16、4 5a和 2 3a ,面积频谱周期为 6a。雷击火次数频谱周期为 9 1a和 3 0a左右 ,面积频谱周期为 9 1a。总林火次数和面积显著正相关 ,雷击火的次数与面积不相关。林火主要发生在 4月、5月。人为火面积集中在 3月、4月 ,雷击火面积集中在 5月。林火由西北向东南呈条带状分布 ,西部、西南部和东北部林火较少。有 5个林火多...

利用Pot2 rep PCR技术分析了 2 0 0 0及 2 0 0 1年采自江苏省五大稻区稻瘟病菌的DNA指纹。单元型和系谱分析结果表明 :稻瘟病菌在DNA水平上具有很高的多态性 ;不同的年份及地区间稻瘟病菌的群体结构存在明显差异 ,但也有部分菌株属于相同系谱甚至同一单元型 ,而JSL17是各稻区均有分布的优势系谱 ;来自不同地区、相同寄主品种的菌株有相似的遗传背景 ,说明寄主品种的遗传背景在病菌进化的变异中起着重要的作用。

【目的】调查黑龙江省大豆灰斑病菌(Cercospora sojina)的生理小种类型,分析黑龙江省大豆灰斑病菌各生理小种间的亲缘关系。【方法】2006—2011年,对黑龙江省进行大豆灰斑病样本的采集和病菌的分离。利用11对SSR引物对黑龙江省的24个灰斑病菌菌株进行EST-SSR基因型分析。【结果】共分离获得大豆灰斑病菌2 674株,鉴定出1—15号共15个生理小种。SSR结果共检测出等位变异46个,平均每个位点为4.2个,相似系数范围为0.091—0.956,平均相似性系数达到0.589。聚类分析结果与大豆灰斑病菌小种类型呈现出较高的相关性。【结论】黑龙江省大豆灰斑病菌间具有丰富的遗传多样性...

<正>入选理由把职业教育摆在更加突出的位置高位统筹推进，将发展现代职业教育作为推动区域经济发展的重要引擎和有力支撑，推动部省同向发力，共同深化现代职业教育体系建设改革，启动现代职业教育体系建设新模式“龙江方案”，聚力打造“国字号”职教改革试验区。

【目的】了解糖基水解酶62家族细胞壁降解酶系在稻瘟病菌致病中的作用。【方法】通过生物信息学方法对稻瘟病菌基因组中假定的糖基水解酶62家族成员进行基因结构、蛋白分泌特性及系统发育分析,并对其中一个成员MGG_01403.6进行过量表达、基因敲除分析。【结果】该家族共有8个成员,均具有细胞壁降解酶(糖基水解酶62家族)保守结构域,且均为胞外分泌蛋白;系统发育分析可以将这些成员分别聚类在两个进化分支中;成员间在不同侵染阶段表达模式有差异;MGG_01403.6过量表达和基因敲除均不影响稻瘟病菌的致病性。【结论】糖基水解酶62家族可能存在功能冗余作用,进一步的双突变或多突变可能是明确这类多基因家族基因...

稻瘟病是水稻生产最具毁灭性的病害之一,抗病品种的利用是控制该病最经济、有效和环保的措施。明确稻瘟病抗性基因的抗性水平,可有效指导抗病育种的开展。本研究利用24个以丽江新团黑谷为背景的稻瘟病抗性单基因系,对2007年至2010年采集自云南籼稻和粳稻区共379个稻瘟病菌株进行了致病性测定。结果表明,Pi9和Pi5可在籼稻和粳稻区使用;Pik-h、Pita-2、Piz-5、Pita和Piz基因只能在籼稻区使用;Piz-t和Pi20基因仅能在粳稻区使用。对2个基因的联合致病性系数、联合毒性系数和抗性互补系数分析表明,Pik/Pi7、Piz/Pi9和Pi1/Pikm等3对基因的组合可作为籼稻区的有效抗源...