- 年份
- 2024(4548)
- 2023(6561)
- 2022(5996)
- 2021(5478)
- 2020(5042)
- 2019(12207)
- 2018(12054)
- 2017(23136)
- 2016(13301)
- 2015(15191)
- 2014(15565)
- 2013(15589)
- 2012(14892)
- 2011(13533)
- 2010(13873)
- 2009(13017)
- 2008(13030)
- 2007(11903)
- 2006(10103)
- 2005(8922)
- 学科
- 济(62147)
- 经济(62105)
- 管理(33590)
- 业(33426)
- 方法(32974)
- 数学(30326)
- 数学方法(29900)
- 企(25724)
- 企业(25724)
- 农(16218)
- 地方(16036)
- 学(14237)
- 中国(13005)
- 财(12893)
- 农业(11011)
- 贸(10410)
- 贸易(10407)
- 业经(10230)
- 易(10009)
- 制(8737)
- 环境(8688)
- 地方经济(8580)
- 和(8509)
- 理论(7966)
- 务(7745)
- 财务(7717)
- 财务管理(7695)
- 融(7528)
- 金融(7525)
- 企业财务(7230)
- 机构
- 大学(198038)
- 学院(197731)
- 济(78109)
- 经济(76491)
- 管理(73607)
- 研究(69078)
- 理学(64160)
- 理学院(63298)
- 管理学(61729)
- 管理学院(61371)
- 中国(49941)
- 科学(47582)
- 农(42839)
- 京(42567)
- 所(37864)
- 江(35654)
- 业大(35318)
- 研究所(34966)
- 农业(34385)
- 财(33421)
- 中心(32383)
- 财经(27071)
- 范(26318)
- 师范(25948)
- 北京(25427)
- 州(24440)
- 经(24302)
- 院(23976)
- 经济学(23825)
- 省(23347)
- 基金
- 项目(135689)
- 科学(105288)
- 基金(97631)
- 研究(92561)
- 家(86905)
- 国家(86250)
- 科学基金(72412)
- 社会(56446)
- 省(55627)
- 社会科(53374)
- 社会科学(53352)
- 基金项目(51927)
- 自然(49855)
- 自然科(48683)
- 自然科学(48668)
- 自然科学基金(47750)
- 划(46671)
- 教育(43565)
- 资助(41596)
- 编号(37309)
- 重点(31350)
- 成果(30086)
- 部(29827)
- 发(29705)
- 计划(27646)
- 创(27539)
- 科研(26997)
- 课题(26465)
- 创新(25837)
- 大学(24581)
共检索到282263条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 中国水产科学
[作者]
纪锋 赵景壮 刘淼 贺文斌 尹家胜 卢彤岩 任广明 徐黎明
对2015—2016年黑龙江不同地区的40个养殖场送检的鲤(Cyprinus carpio)进行鲤春病毒血症病毒(spring viremia of carp virus,SVCV)的细胞培养分离、PCR鉴定、病毒滴度测定、病毒表面糖蛋白(glycoprotein,G)氨基酸序列聚类分析及基因分型研究。细胞培养结果显示,来自4个不同养殖场的鲤组织样本能够感染鲤上皮细胞(epithelioma papulosum cyprini,EPC)产生典型细胞病变(cytopathic effect,CPE),收集病
[期刊] 中国水产科学
[作者]
付峰 刘荭 黄倢 蔡生力
鲤春病毒血症病毒(SVCV)是一种能够引起鲤科鱼类急性传染性病毒病-鲤春病毒血症(SVC)的病原,一旦暴发会造成巨大的经济损失。该病主要在欧洲的鲤鱼养殖中广泛传播,主要症状为体内出血,腹膜炎及腹水。SVCV具有囊膜,暂时列为弹状病毒科水泡性病毒属。病毒基因组为线性单股不分段的负链RNA,长11 019个核苷酸,主要包含5个基因,分别编码核蛋白N、磷蛋白P、基质蛋白M、糖蛋白G和RNA聚合酶L。目前,中国出入境检验检疫检测SVCV的行业标准是逆转录PCR法。本研究从病毒的生物学特征,感染的临床症状及流行特点,病毒基因组及其多肽特征,病毒的分类地位以及检测技术等方面对国内外研究的现状作一综述,以期...
关键词：
鲤春病毒血症病毒 基因组 多肽
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郑李平 耿毅 余泽辉 雷雪平 曹师琪 欧阳萍 黄小丽 陈德芳 邓龙君 甘维熊 夏文萍
2016年4月,四川某鲈鲤(Percocypris pingi)养殖场流行一种以鳃、鱼鳔和内脏器官出血为临床特征的传染病。组织病理学观察发现,患病鲈鲤全身多组织器官均发生明显的病理损伤,尤其是肝、脾、肾、鳃和肠表现为明显的出血、变性、坏死以及炎症细胞浸润。取病鱼组织匀浆滤液接种鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprini, EPC),盲传3代出现典型的细胞病变(cytopathic effects, CPE)。将自然发病鱼组织匀浆滤液和细胞培养病毒液分别接种健康鲈鲤,实验鱼出现与自然发病鱼相同的症状,死亡率分别为60%和50%,而对照组未见异常。对经分离毒株ZLP160415感染出现CPE的EPC细胞制备超薄切片进行电镜观察,发现病毒呈弹状,长90～150 nm,宽40～60 nm;对自然发病鱼、人工感染发病鱼内脏组织和细胞培养病毒液进行鲤春病毒血症病毒(springviremiaofcarpvirus,SVCV)的RT-PCR检测,均扩增出目的条带。基于SVCV糖蛋白基因进行系统发育分析,结果显示分离毒株(ZLP160415)属于Ia型。结合本次疾病的流行病学与病理损伤特点、病毒分离鉴定、人工感染试验结果和透射电镜检查,确定此次流行病的病原为SVCV。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王树云 李江宇 高志强 谷强 蒲静 任彤 张伟 张旻 江育林 武勇 张利峰
根据Gen Bank中鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白全基因序列设计特异性引物,以SVCV欧洲株病毒核酸为模板,通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因,克隆至p PICZαA,构建p PICZαASVCV1540表达质粒。以限制性内切酶Sac I线性化p PICZαASVCV1540后通过化学法转化毕赤酵母感受态细胞X33和GS115,添加1%甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物显示其分子质量为70 ku。Western Blot分析显示该蛋白可以被SVCV山羊多抗识别,表明目的蛋白具有反应原性。
关键词：
鲤春病毒血症病毒 糖蛋白 毕赤酵母
[期刊] 中国水产科学
[作者]
徐进 周勇 陈倩 曾令兵
为了揭示鲤春病毒血症病毒（ｓｐｒｉｎｇ ｖｉｒｅｍｉａ ｏｆ ｃａｒｐ ｖｉｒｕｓ，ｓｖｃｖ）糖蛋白编码基因的主要免疫原性决定区域，本研究对ｓｖｃｖ的糖蛋白基因进行截短表达，并用纯化的重组蛋白作为免疫原制备了兔抗血清以分析其免疫原性。通过ｓｏｓｕｉ以及Ｄｎａｓｔａｒ ６．０软件对ｓｖｃｖ糖蛋白基因的跨膜区、亲水性以及抗原表位进行分析后，采用ｒｔ－ｐｃｒ对该基因主要抗原决定区域编码片段进行扩增，并构建重组表达质粒ｐ ｇｅＸ－ｇｔｒ，对其进行诱导表达后获得截短的ｓｖｃｖ糖蛋白的重组蛋白。将表达的重组蛋白进行纯化复性后，作为免疫原制备兔抗血清，采用ｅＬｉｓａ法检测其效价，采用免疫印迹以及间接免疫荧光．．．
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
付峰 刘荭 范万红 江育林 黄倢
根据SVCV糖蛋白基因序列设计引物,在5’引物和3’引物中分别引入酶切位点。以病毒核酸为模板用RT-PCR方法扩增该段糖蛋白基因,将所得的基因片段(517和521)克隆至穿梭载体pGAPZαA/B之GAP启动子下游位点,构建含α信号肽的重组表达载体。获得的重组质粒pGAPZαA-517和pGAPZαB-521经线性化后,电击法转化毕赤酵母SMD1168菌株,构建分泌型表达SVCV糖蛋白的重组酵母菌株。酵母菌落PCR法检测表明,已成功构建分泌表达SVCV糖蛋白的酵母基因工程菌株,斑点印迹法进一步分析表明有目的蛋白的成功表达。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
杨振慧 葛均青 刘荭 杨金先 郑晓聪 林天龙
根据鲤春病毒血症病毒(SVCV)基因组序列(GenBank:NC_002803),人工合成M基因开放阅读框序列,克隆至原核表达载体pET-32a(+),转化工程菌株BL21(DE3),在0.1 mmol.L-1 IPTG、37℃下诱导5 h,获得高效表达的M蛋白,但其主要以包涵体的形式存在,经超声破碎、包涵体纯化后,再经Ni亲和层析柱纯化,获得高纯度的M蛋白.以纯化的M蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备了M蛋白的多克隆抗血清.ELISA检测显示抗血清的效价达1∶128000;western blot分析显示抗血清能够识别SVCV的M蛋白,表明其具有较好的灵敏性和特异性.
[期刊] 水产学报
[作者]
张海强 邵玲
鲤春病毒血症病毒(SVCV)能够引起鲤科鱼类大量死亡,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须申报的重要疫病,也是我国唯一被列为一类疫病的鱼类传染病。为建立SVCV的快速免疫学诊断方法,研究其主要结构蛋白间的免疫原性差异,实验首先采用原核表达系统克隆并诱导表达,纯化SVCV的核蛋白(N)、磷蛋白(P)和基质蛋白(M),并进一步免疫新西兰白兔制备抗血清,抗血清经Protein A柱进一步纯化获得3种蛋白的多克隆抗体。利用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹实验(Western blot)对抗体效价和特异
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林婧楠 赵景壮 徐黎明 刘淼 任广明 卢彤岩
以鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)shlj1分离株基因组RNA为模板,利用RT-PCR扩增获得SVCV糖蛋白(Glycoprotein,G)部分基因序列(420 bp),克隆至pET-32a原核表达载体,构建重组质粒pET-32a-G;将重组质粒转入大肠杆菌Rosetta表达菌株,利用SDS-聚丙烯酰氨凝胶电泳(SDS-PAGE)对截短G蛋白的表达及纯化情况进行检测;将纯化的G蛋白免疫小鼠制备鼠抗血清,采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和细胞间接免疫荧光抗体试验(Indirect fluorescent antibody test,IFAT)对抗血清进行鉴定。SDS-PAGE结果显示该重组截短G蛋白与预期大小相符(约为35 kDa),以包涵体的形式表达;ELISA结果显示,制备的鼠抗截短G蛋白血清效价为1∶80 000;IFAT结果显示,抗血清能够识别不同地区的SVCV分离株(黑龙江省3株,辽宁省2株),在FITC标记的羊抗鼠IgG作用下,呈特异性绿色荧光。结果表明,制备的截短SVCV G蛋白具有良好的免疫原性,利用其所制备的抗体能够识别我国不同SVCV分离株病毒表面天然结构的糖蛋白。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李月红 付云红 Julia Pridgeon 宋琳 张东鸣
【目的】克隆鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)的磷蛋白(P蛋白)基因,并对其进行原核表达,为进一步制备SVCV P蛋白单克隆抗体及建立新的SVCV诊断方法奠定基础。【方法】采用RT-PCR方法扩增SVCV P蛋白基因,将其克隆入pET-28a(+)载体中,获得原核重组表达质粒pET28-P,进行原核表达。将该重组原核表达质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中,用0.4mmol/L IPTG进行诱导表达,用镍亲和层析试剂盒对表达产物进行纯化,分别用SDS-PAGE和Western Blotting方法对表达产物进行鉴定。【结果】成功克隆了SVCV P蛋白基因,该基因长度为933bp。成功构建...
关键词：
鲤春病毒血症病毒 P蛋白 原核表达
[期刊] 中国农业科学
[作者]
谢佳 韩春华 林健 段会娟 杨志远 赵际成 潘洁 刘月焕
【目的】阐明鸭出血性卵巢炎病毒(DHOV-HB株)感染鸭后的病毒血症,为深入了解鸭出血性卵巢炎的发病机理、诊断和疫苗研究提供依据。【方法】24只250日龄北京鸭芯片标记后分别经口感染100倍稀释的DHOV-HB株(3×104ELD50),并设空白对照组15只,同等条件下分别在隔离器内饲养,逐日观察10日,各组每日经翅静脉采集10只鸭血液(尽可能采集同一只鸭血液),用于病毒分离和抗体测定。将攻毒后1—10 d的血清样本经卵黄囊途径接种6日龄SPF鸡胚,每份血清以0.1 m L/胚的剂量接种5枚SPF鸡胚,鸡胚接种后置于37℃条件下继续孵化,每日定时照胚2次,及时收获并统计24—168 h之内死亡...
关键词：
鸭 鸭出血性卵巢炎 坦布苏病毒 病毒血症
[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙贝贝 崔治中 张青婵 娄本红
【目的】了解J亚群白血病病毒(ALV-J)感染鸡后抗体反应和带毒排毒的规律,以便为制定鸡群中ALV-J感染的预防控制和净化措施提供可靠的流行病学依据。【方法】1日龄和49日龄SPF鸡分别通过注射、口服和接触感染ALV-J,对各感染组的病毒血症、泄殖腔排毒及抗体反应进行动态检测。【结果】不同日龄感染ALV-J后的病毒血症和抗体的动态有很大差异。1日龄SPF鸡注射感染ALV-J后,自2周起开始可检出泄殖腔p27抗原和病毒血症。注射感染组有71%(5/7)鸡在26周内持续带毒排毒,其中有3只鸡在感染后45周仍带毒排毒。其中一只鸡在16周时产生一过性抗体,另两只鸡完全没有抗体。口服感染组仅11%(1/...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李渊 徐黎明 赵景壮 刘淼 任广明 尹家胜 纪锋 卢彤岩
2015-2016年对来自黑龙江地区46个养殖场送检的鲤鱼进行锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus,KHV)的分离鉴定,并应用DNAStar等软件对检出的阳性样本的主要囊膜蛋白(Major envelop protein,MEP)基因进行生物信息学分析。结果显示,KHV的检出率约为6.5%,3株阳性样本具有相同的MEP基因序列,称之为KHV-HLJ1516。MEP基因开放阅读框为771 bp,编码256个氨基酸,相对分子质量为28 280.58,等电点为8.40。对KHV-HLJ1516的MEP
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
徐启江 丁国华 陈典
黑龙江省分蘖洋葱病毒病发生普遍 ,阿城、宾县、五常的发病率均为 10 0 % ,病情指数分别为6 2 .13% ,71.0 7%和 4 9.87%。典型症状为黄化条纹花叶 ,叶片扭曲畸形、叶尖干枯 ,植株矮缩 ,鳞茎退化变小 ,产量和品质大幅度下降。被分蘖洋葱病毒系统感染的有洋葱、大葱、大蒜和蚕豆 ,局部感染的有千日红、苋色藜。电镜观察表明 ,病体细胞中含有大量线状病毒粒体 ,长度在 30 0～ 14 5 0 nm。通过叶片超薄切片 ,在叶肉细胞质中观察到大量的风轮状、束状、涡轮状和环状内含体 ,叶绿体被破坏。体外抗性测定结果表明 ,致死温度为 5 5～ 6 5℃ ,稀释限点为 10 - 4,...
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
