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[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ是黑色素生成通路中重要的调节基因，而Ｐａｘ６通过调控ＭＩＴＦ和β－ｃａＴｅｎＩｎ来调控黑色素细胞的黑色素生成，通过对只含有正常Ｐａｘ６ ＰａＩｒｄ ｄｏＭａＩｎ的前１０２个氨基酸的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）的研究，来探究Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）是否还有生物学功能，以及Ｐａｘ６对其下游基因的作用机理。【方法】根据ｎｃＢＩ查找到的Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）基因序列设计Ｐｃｒ引物，克隆Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ），收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Ｐａｘ６～（１０ｎｅｕ）和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点，通过分析选取Ｓａｌ Ｉ和ｘＢａ Ｉ作为酶切位．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂瑞强 杨玉静 谢建山 范瑞文 许冬梅 于秀菊 段志成 董常生
【目的】高度保守的ＰＡＸ转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用，其家族共有的ＰＤ结构域是其与下游基因结合的主要位点，而ＰＤ结构域氨基端的ＰＡＩ亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明ＰＡＸ６在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用，本试验借助研究ＰＡＸ６ ＰＡＩ亚结构域的功能来对ＰＡＸ转录因子家族共有的ＰＤ结构域和ＰＡＩ亚结构域进行研究。【方法】首先通过ＰｓＩＰｒｅＤ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域的结构进行分析，使用ＮＣＢＩ对ＰＡＸ６ ＰＤ结构域与下游基因的结合位点进行分析，使用ＪＡｓＰＡｒ对ＭＩＴＦ、ＴＹｒ、ＴＹｒＰ１和ＴＹｒＰ２启动子中ＰＡＸ６ ＰＤ结．．．
关键词：
PAI亚结构域 Pax6 黑色素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马淑慧 薛霖莉 徐刚 侯亚琴 耿建军 曹靖 赫晓燕 王海东 董常生
【目的】证明miR-137通过调控MITF而间接影响小鼠黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2的表达,从而影响黑色素的生成。【方法】通过细胞转染技术在细胞水平过量表达miR-137,对黑色素细胞中黑色素含量进行了测定,经RT-PCR以及western blot检测转染后细胞TYRP-1和TYRP-2在mRNA和蛋白水平的变化。【结果】黑色素含量明显减少,在mRNA水平,TYRP1显著降低至0.4倍,TYRP-2显著降低至0.6倍。在蛋白水平,TYRP-1显著降低至0.61倍,TYRP-2显著降低至0.73倍。【结论】过量表达miR-137会通过调控MITF而使黑色素细胞TYRP-1和TYRP-2...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵兵令 李亚楠 陈天直 刘颖 常露程 范瑞文 薛霖莉 王海东 董常生
【目的】探究GPNMB是否会通过调控MITF及其下游色素相关基因的表达来影响黑色素细胞中色素的生成,为进一步阐明GPNMB对黑色素细胞中色素生成的具体机制提供理论依据。【方法】首先对小鼠GPNMB核酸序列进行检索,通过对GPNMB和慢病毒表达载体序列分析来筛选出合适的酶切位点,在此选取SalⅠ和XbaⅠ作为酶切位点。并对GPNMB基因序列设计含有SalⅠ和XbaⅠ酶切位点的全长引物,克隆GPNMB基因全长序列,将含有酶切位点的GPNMB基因片段与T载体进行连接,送华大基因测序。将构建成功的T载体提取质粒,
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑嫩珠 辛清武 朱志明 缪中纬 李丽 刘凤辉 黄勤楼
【目的】克隆白绒乌鸡小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associaated transcription factor,MITF)基因序列,研究MITF基因在白绒乌鸡各组织中的表达,探索其对白绒乌鸡体内黑色素沉积的影响,为深入研究乌鸡体内黑色素沉积的内在调控机制奠定理论基础。【方法】以150日龄健康的白绒乌鸡为研究对象,采用简并引物和巢式PCR方法从白绒乌鸡皮肤组织中克隆MITF基因c DNA序列,通过DNAStar、Clustal X、Bio Edit和MEGA4.0等软件对获得的序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR法和紫外分光光度法分别研究白绒乌鸡各组织MITF...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
邱超达 鲍宝龙
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建感紫光短波视蛋白(short-wave-sensitive 1,sws1)基因缺失的斑马鱼突变品系sws1~(-/-)。检测紫光照射后野生型AB品系和sws1~(-/-)突变品系在背腹皮肤中黑色素细胞的数量、黑色素合成相关基因pomc和asip、视黄酸合成相关基因raldh2和raldh3的表达量。结果显示:在紫光照射60和100 d后,sws1~(-/-)斑马鱼背部皮肤黑色素细胞数量显著少于野生型斑马鱼(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
高泽成 梁春年 吴晓云 李明娜 张志飞 阎萍
旨在通过分子水平和组织学水平阐明牦牛不同被毛颜色的机理。采用实时荧光定量PCR技术检测皮肤组织中决定色素形成通路中的主效基因:鼠灰色基因(Agouti signaling protein gene(ASIP),Agouti)、小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associated transcription factor,MITF)、黑色素皮质素受体1基因(Melanocortin 1 receptor,MC1R)和酪氨酸酶基因(Tyrosinasegene,TYR)表达量。结果表明:M
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
邱超达 鲍宝龙
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建感紫光短波视蛋白（short-wave-sensitive 1，sws1）基因缺失的斑马鱼突变品系sws1~(-/-)。通过紫光照射实验，检测野生型AB品系和sws1~(-/-)突变品系在背腹皮肤中黑色素细胞的数量、黑色素合成相关基因pomc，asip、视黄酸合成相关基因raldh2和raldh3的表达量。结果显示：在紫光照射60 d和100 d后，sws1~(-/-)斑马鱼背部皮肤黑色素细胞数量显著少于野生型斑马鱼 （P
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
陈洁 鲍宝龙
在眼睛发育过程中,Paired Box 6(pax6)和T-Box Transcription Factor 3(tbx3)界定了视网膜发生区域,Retinal Homeobox Protein 1(rx1)确定了视杯的形成范围。本研究调查了pax6、tbx3和rx1基因是否在左右眼睛发生区域的表达范围存在差异。荧光定量PCR显示,牙鲆pax6、tbx3和rx1基因从受精后20 h开始表达。RNA整体原位杂交检测发现pax6基因在牙鲆胚胎左右眼睛发生区域表达,左侧表达范围较右侧略大,同时pax6在前脑以及神经管处也有表达;tbx3和rx1基因在牙鲆胚胎左右眼睛发生区域表达,左右侧表达范围无明显...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
徐永江 朱学武 柳学周 史学营 史宝 王滨 李斌
为研究黑色素富集激素基因(MCH)表达调控与半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)无眼侧黑化性状的关系,通过分子克隆获得了半滑舌鳎pMCH2,通过NCBI获得了pMCH1 cDNA序列,分析了pMCH mRNA的组织表达特性,探索了脑垂体和皮肤中的p MCH mRNA表达与无眼侧黑化程度的关系。结果显示,pMCH1 cDNA序列长476 bp,编码134个氨基酸,与鲽形目、鲤形目和鲈形目鱼类的pMCH1氨基酸聚为1个进化分支。pMCH2 cDNA序列全长为626 bp,编码147个氨基酸
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
高思语 王晓娟 齐玮瑜 姜宇辰 张莉
为探究固原乌鸡黑色素分布沉积特征，以及在不同日粮酪氨酸水平下黑色素相关基因表达量的变化，明确酪氨酸对固原乌鸡黑色素形成的影响。选取4周龄健康、体质量差异不显著的固原乌鸡150只，随机分为5组，每组3个重复，每个重复10只。日粮酪氨酸添加水平分别为0、0.2%、0.4%、0.6%、0.8%，饲养至12周龄末，利用电镜技术观察不同组织中黑色素的分布特征，利用免疫组织化学和荧光定量PCR方法检测不同组织中黑色素相关基因表达量的变化。试验结果显示：固原乌鸡皮肤、气管与小肠中存在黑色素细胞且大都已分化成熟。TYR在肺脏组织有阳性反应，TYRP1在肌肉与肝脏组织有阳性反应，MITF、CREB1在肺脏、肝脏、小肠、胸肌组织中均有阳性结果。在不同日粮酪氨酸水平下，MITF、TYR、TYRP1基因的表达量与黑色素含量成一定的线性相关。结果表明，固原乌鸡组织黑色素沉积特征与组织中黑色素颗粒合成多少相关，而黑色素合成过程中TYR、MITF可能是其主要关键调控基因，日粮中添加酪氨酸能够促进其表达。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
罗小春 梅景良 王全溪 邓红玉 温亚萍
应用组织化学与电镜技术对欧鳗脾脏和肾脏中黑色素巨噬细胞中心(MMCs)进行研究。结果表明:脾脏和肾脏中均存在MMCs,它们呈圆形、卵圆形或不规则形状;脾脏MMCs有邻血管分布的特点,而肾脏MMCs的分布无此特点;脾脏和肾脏中的MMCs均含有铁血黄素、黑色素及脂褐质3种色素,但脾脏MMCs以铁血黄素为主,肾脏以黑色素和脂褐质为主;脾脏MMCs中存在色素颗粒和细胞碎片。初步推测,欧鳗脾脏MMCs与肾脏MMCs的功能有可能是不相同的。
[期刊] 水产学报
[作者]
朱杰 张秀梅 高天翔 柳广东 杨原文
对大菱鲆早期变态发育及体表黑色素细胞的形成过程进行了研究。绘制了 1～ 6 0日龄大菱鲆鱼苗形态发育图 ,同时观察拍摄不同发育时期体表黑色素细胞的形态变化。 14～ 17℃水温时 ,大菱鲆早期变态发育约需6 0d。 1～ 14日龄主要为器官发育 ;14～ 40日龄主要为形态变化 ,2 5日龄左右开始变态 ;40～ 6 0日龄变态基本完成。变态前 ,鱼苗体表的幼体黑色素细胞对称分布 ,色素细胞密度先增加后减少。变态开始后 ,鱼体两侧体色出现不对称。有眼侧体表幼体黑色素细胞减少 ,逐渐由成体黑色素细胞替代 ,体色变深 ;无眼侧幼体黑色素细胞逐渐消褪 ,未出现成体黑色素细胞 ,体色逐渐变为白色。若有...
[期刊] 华北农学报
[作者]
迟良 邹明 孙晓凤 刘焕奇
采用RT-PCR方法从乌骨鸡皮肤中克隆出黑色素主效基因黑色素皮质激素受体(Melanocortin1-receptorMC1R)基因,长度为945bp,与普通白鸡比对其同源性为99.6%。以pEGFP-N1为基础,将从测序载体pMD-18T-MC1R上使用EcoR I和Sal I切下的MC1R连接到同样酶切的pEGFP-N1,构建pEGFP-N1-MC1R真核表达载体,为以后转基因动物的制备打下了基础。
关键词：
乌骨鸡 MC1R 真核表达载体
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杨玉静 张丹瑾 聂瑞强 谢建山 范瑞文 高文俊 董常生
【目的】小眼畸形相关转录因子－Ｍ型（ＭｉｃｒｏｐｈｔｈａｌＭｉａ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ Ｍ，Ｍｉｔｆ－Ｍ）在动物皮肤和毛发的黑色素合成途径中发挥重要作用，克隆绵羊小眼畸形相关转录因子－Ｍ型基因序列，研究在绵羊黑素细胞中过表达绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ是否影响ｔＹｒ、ｔＹｒｐ－１和ｔＹｒｐ－２的表达，从而探究对黑色素的生成的影响。【方法】使用试验室冻存的第５代绵羊黑素细胞，通过ｐｃｒ方法用引物以绵羊黑素细胞ｃｄｎａ为模板克隆Ｍｉｔｆ－Ｍ基因ｃｄｎａ序列，构建绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ克隆载体和真核表达载体；通过细胞转染技术在细胞水平过量表达绵羊Ｍｉｔｆ－Ｍ；转染后使用荧光显．．．
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