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[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘振兴 张殿昌 苏天凤 姜巨峰 龚世园 江世贵
分别采用Sepharose-6B凝胶过滤层析、Phenyl Sepharose FF疏水作用层析和rProtein A Sepharose亲和层析技术纯化黄鳍棘鲷(Acanthopagrus latus)血清IgM,并将这3种层析纯化方法进行了比较。纯化产物进行SDS-PAGE,电泳结果扫描后经Band Scan5.0软件分析显示,单独使用Sepharose-6B凝胶过滤层析或Phenyl Sepharose FF疏水作用层析得到的IgM纯度只有56%左右;二者联合使用纯度可以达到69%,而rProtein A Sepharose亲和层析一步就可以达到89%的纯度;纯化得到的黄鳍棘鲷血清IgM...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
鄢庆枇 韩一凡 高天翔 庄峙厦 王小如
分别用饱和硫酸铵二次盐析法和蛋白A亲和层析法对健康大黄鱼(Pseudosciaena crocea)血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化,所得产物用SDS-PAGE进行检测。结果表明,蛋白A亲和层析法可以较好地分离到高纯度的大黄鱼血清IgM,产物的电泳胶中只有重链和轻链2个条带;饱和硫酸铵二次盐析法除了有这2个条带,还有很多杂带,而且蛋白A亲和层析法更为简便、快速,因此用蛋白A亲和层析法分离纯化IgM优于饱和硫酸铵二次盐析法;大黄鱼免疫球蛋白重链的分子量在76 kD左右;轻链分子量在28 kD左右。用纯化的大黄鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶40 960的兔抗鱼IgM血清。本实验所建立...
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
郑磊 马振宁 吴斌 樊海平 唐凤翔 郭养浩
采用蛋白A亲和层析法对健康美洲黑石斑鱼血清中的免疫球蛋白(IgM)进行分离纯化。实验结果表明,蛋白A亲和层析法一步纯化即可得到电泳纯IgM,其重链和轻链的分子量约74.1 ku和26.0 ku。用纯化的黑石斑鱼IgM免疫实验兔,获得效价高达1∶128 000的兔抗黑石斑鱼IgM血清。Western-blot和间接ELISA检测证明,本工作制备的兔抗美洲黑石斑鱼IgM血清具有较高的特异性,为后续的黑石斑鱼免疫学研究奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
赵景壮 徐黎明 刘淼 曹永生 尹家胜 刘红柏 卢彤岩
为了能够成功表达虹鳟IgM,本研究利用生物信息学软件对虹鳟IgM的亲水性及抗原性进行了分析,根据GenBank收录的虹鳟IgM重链恒定区,参照生物信息学分析结果,设计用于扩增截短的IgM基因的引物,以虹鳟头肾RNA提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增虹鳟截短的IgM重链恒定区部分基因片段,连接原核表达载体pET-27b,利用大肠杆菌Rosetta进行表达。SDS-PAGE及HPLC结果显示,纯化后截短的IgM大小约为47.7 ku,且纯度达到90%。利用其制备兔抗血清后ELISA分析结果显示,所制备的兔抗血清与本研究所表达的截短IgM蛋白的反应效价为1∶40 000,与虹鳟血清提取的全长Ig...
关键词：
虹鳟 IgM 基因克隆 抗血清
[期刊] 水产学报
[作者]
叶星 白俊杰 劳海华 简清 李英华 罗建仁
采用PCR方法改造已克隆到的草鱼胰岛素样生长因子 Ⅰ (IGF Ⅰ )cDNA ,使其成为成熟肽cDNA并亚克隆到pGEX 4T 1载体中 ,构建草鱼IGF I融合蛋白表达质粒pGEX IGF。质粒转化大肠杆菌BL2 1菌株。该菌株经IPTG诱导可表达分子量约 34kD的特异蛋白。在不同的温度条件下分别产生以可溶性的和包涵体形式为主的特异蛋白。经 30℃诱导的菌体经溶菌酶消化、超声破碎及高速离心后 ,裂解液上清经glutathionesepharose亲和层析纯化获得高纯度的GST IGF。以此纯化的融合蛋白为抗原制备兔抗草鱼IGF I的抗血清。凝胶双扩散试验显示抗血清效价为 1∶6 4 ,...
[期刊] 水产学报
[作者]
杜雪莉 周利亘 王锡昌 熊何健 苏文金 曹敏杰
采用Sephacryl S-400凝胶过滤柱层析和电洗脱等纯化方法,首次从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化到伴肌动蛋白,并制备了特异性多克隆抗体。多克隆抗体经Protein A-Sepharose亲和层析柱纯化得到高纯度免疫球蛋白G(IgG)。采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、免疫斑点印迹(Dot-Blot)和免疫印迹(Western-Blot)等方法对纯化的伴肌动蛋白及其多克隆抗体进行分析鉴定,并研究了不同贮藏条件下伴肌动蛋白的变化情况。SDS-PAGE结果显示本研究从黄鳍鲷骨骼肌中分离纯化了高纯度伴肌动蛋白;Dot-Blot检测结果显示兔抗黄鳍鲷伴肌动蛋白多克隆抗体效价为5×104;Wes...
关键词：
黄鳍鲷 伴肌动蛋白 纯化 抗体
[期刊] 水产学报
[作者]
李育培 刁晓明 盛晓洒 权恒 翟旭亮 李云
采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从瓦氏黄颡鱼Ⅳ期卵巢粗提液中分离、纯化出卵黄脂磷蛋白(Lv),采用糖、磷、脂蛋白染色技术验证分离、纯化的蛋白为Lv,该Lv在非变性条件下分子量约为230ku,在SDS变性条件下分子量约为106ku。纯化的瓦氏黄颡鱼Lv经检测显示含有类胡萝卜素,但没有二硫键,对热相对稳定。利用纯化的瓦氏黄颡鱼Lv,制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Lv多克隆抗血清。通过双向免疫扩散法测得Lv抗血清的效价为1∶32,还发现瓦氏黄颡鱼卵黄蛋白原(Vtg)和Lv之间有明显的免疫交叉反应性,说明两者具有相同的免疫原性;Western-blotting检测显示抗血清的特异性较好,并能特异性地识别Vt...
关键词：
瓦氏黄颡鱼 卵黄脂磷蛋白 纯化 免疫分析
[期刊] 中国水产科学
[作者]
霍堂斌 张颖 孙大江 曲秋芝
采用凝胶柱层析法,对小体鲟(Acipenser ruthenusLinnaeus)卵黄蛋白粗提液进行分离纯化。小体鲟卵黄蛋白粗提液的质量浓度为25.04 mg/mL,经Sephadex G-200层析后出现3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫印迹(Western-blotting)和免疫扩散等方法研究表明,小体鲟卵黄蛋白由分子量分别为132.1 kD、97.4 kD、85.9 kD、67.0 kD、59.2 kD、47.6 kD、30 kD、14.3 kD和12.8 kD的9个亚基组成;层析后峰B蛋白为卵黄雌性特异蛋白(yolk female specific protein,YFSP),是一种...
关键词：
小体鲟 卵 卵黄蛋白 卵黄雌性特异蛋白
[期刊] 华北农学报
[作者]
索力 曲秋芝 孙大江 张颖 王雪 赵吉伟
采用SephadexG-200凝胶过滤层析法,对黑龙江茴鱼卵黄蛋白粗提液进行分离纯化,层析洗脱共得到3个蛋白峰。用聚丙烯凝胶电泳、免疫扩散等方法研究表明:黑龙江茴鱼卵黄蛋白(Yolk protein)含有分子量分别为567.2,486.3,157.5 kDa的3种蛋白,由分子量分别为80.7,68.7,46.8,39,30,20.9,16.7,14.9,14.1 kDa的9个蛋白亚基组成;峰2蛋白为卵黄脂磷蛋白(Lipovitellin,Lv),分子量为486.3 kDa,由分子量为80.7,30,14.9,14.1 kDa的4个蛋白亚基组成;纯化的黑龙江茴鱼Lv免疫新西兰大白兔获得兔源多克隆...
关键词：
黑龙江茴鱼 卵黄蛋白 卵黄脂磷蛋白 纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
沈锦玉 Thompson K D Adams A Galina Jeney 钱冬 沈智华
Aeromonas hydrophila septicemia was a serious infectious disease occurred in China.The majority harmed fish was crucian carp(Carassius auratus gibelio).It was reported that immune prevention was the effect measure to prevent this disease using A.hydrophila bacterin.So it is necessary to develop mono...
关键词：
银鲫 免疫球蛋白 单克隆抗体
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈继明 龚晓明 陆承平 韩正康
将β２激动剂克伦特罗（ＣＬ）偶氮化后分别连接牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、兔血清白蛋白（ＲＳＡ）和兔ＩｇＧ（ＲＧＧ），分别用上述连接物免疫３组新西兰兔。经琼脂扩散试验、间接ＥＬＩＳＡ和间接抑制ＥＬＩＳＡ检测表明，ＢＳＡ、ＲＳＡ和ＲＧＧ均能作为载体制备ＣＬ抗血清。ＢＳＡ作为载体制备的抗血清含有大量针对载体的抗体，而ＲＳＡ和ＲＧＧ作为载体制备的抗血清不含有针对载体的抗体，显示自身蛋白可作为载体，且优于异源蛋白。
关键词：
克伦特罗 载体 兔 抗体
[期刊] 华北农学报
[作者]
岳东霞 曹为玉 郑燕棠
葡萄卷叶病毒抗血清的制备ＡｎｔｉｓｅｒｕｍＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆＧｒａｐｅｖｉｎｅＬｅａｆｒｏｌＶｉｒｕｓ葡萄卷叶病毒病的诊断手段主要是通过嫁接传染和血清学方法，但由于病株的病毒含量低，且没有草本寄主，使得该病毒的研究及其抗血清的制备非常困难。本...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡骁飞 魏凤仙 邢广旭 职爱民 柴书军 孙亚宁 王磊 邓瑞广 张改平
【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50μg蛋白/只.次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng.mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59、163.80和166.51 ng.mL-1,交叉反应率分别为89.85%...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李婷婷 方琦 丁铭 苏晓霞 张丽珍 张仲凯
对引起云南鲜切花麝香石竹植株叶斑驳、花朵变小的病毒分离物应用酶联免疫吸附测定(ELISA)和电子显微镜技术(IEM)检测,直径大约28nm,经TAS-ELISA测定仅与CarMV标准抗体反应为阳性。鉴定为麝香石竹斑驳病毒(Carnation mottle vi-rus,CarMV)的分离株。对病株检测筛选后进行分离纯化,将提纯后的CarMV制备兔抗血清获得高效价的抗体,间接ELISA测定为1∶10240。
关键词：
麝香石竹斑驳病毒 鉴定 抗血清制备
[期刊] 华北农学报
[作者]
吴洪波 刘刚 张路路 王冬梅
提取小麦品种L10的总RNA,进行反转录,其产物用于探究自噬基因ATG8的生物学功能。用PCR方法克隆ATG8,将克隆的ATG8亚克隆至表达载体PMD19-T,酶切后切胶回收,然后把产物测序鉴定,转化宿主菌E.coliRosetta-gami B(DE3),构建原核表达系统,将融合蛋白纯化后制备其兔抗血清,然后利用Western Blotting技术对兔抗血清进行检测,鉴定了该抗血清的结合特异性。ATG8抗体的成功制备,为小麦中ATG8基因和自噬功能的研究奠定了基础。
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