选择同处于泌乳初期的6头睢宁白山羊为试验动物,于左、右乳区分别灌注黄芪多糖和生理盐水5 mL,连续灌注5 d,第6天注入大肠杆菌内毒素诱导产生山羊实验性乳腺炎。于注入内毒素前1 h及灌注后3、6、9、24 h取颈静脉血和采集乳样,测定乳液及血清中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)、碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛含量(MDA)等指标。结果表明:与灌注内毒素前相比,灌注生理盐水的对照乳区乳中的NAGase活力在注入内毒素后9 h时达到峰值(23.95 U/mg),而灌注黄芪多糖的试验乳区乳中的NAGase活力6 h时达到峰值(28.29 U/mg),24 ...

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头,产后第5、8天分别向左、右乳区灌注等体积的灭菌PBS和10μg.kg-1CpG-ODN(cytosine-phosphate-guanosine dinucleotides),第9天于左、右乳区经乳导管灌注大肠杆菌(2×109CFU.mL-1)和金黄色葡萄球菌(2×109CFU.mL-1)混合菌液3 mL。分别于灌注细菌前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h采集乳样,动态监测乳中N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)和髓过氧化物酶(MPO)的活力及乳铁蛋白含量变化。灌注72 h后处死动物,取乳腺组织进行组织学观察。结果显示:灌注细菌后72 ...

目的本试验通过卡介菌多糖核酸对内毒素诱发的实验性山羊乳腺炎乳腺组织的保护研究,探讨灌注免疫增强剂BCG-PSN对乳腺组织的影响,研究调动乳腺自身的防御功能,以防治乳腺炎的发生。方法选取泌乳初期健康睢宁白山羊6只,左乳区经过乳头管灌注卡介菌多糖核酸5 ml,右乳区灌入5 ml注射用生理盐水作为对照,连灌6 d。第7天按50μg.kg-1体重分别向左、右乳区灌注大肠杆菌内毒素。灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化。灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分Bouin氏液固定、部分液氮保存。结果临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎...

[目的]本试验旨在研究不同剂量的重组牛脂多糖结合蛋白(rb LBP)作用于脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺炎模型,探讨rb LBP对奶牛乳腺炎症反应的影响及其作用机制。[方法]选4头泌乳中后期、体质量为(500±25)kg的健康经产荷斯坦奶牛,采用4×4拉丁方设计,试验分为对照组、LPS(0.2μg·kg-1)模型组、低剂量rb LBP(1μg)处理组、高剂量rb LBP(20μg)处理组,分4期进行,每期15 d。[结果]灌注LPS后,奶牛发生乳腺炎症反应;与LPS模型组相比,低剂量rb LBP加剧LPS诱导的炎症反应,表现为组织髓过氧化物酶(MPO)活性明显升高(P<0.05),炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的基因及蛋白表达量显著升高(P<0.05),TLR4和NF-κB的表达明显上调(P<0.05),炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达量显著降低(P<0.05),TLR4和NF-κB的表达显著下调(P

8只泌乳期的健康睢宁白山羊,产后72 h分别用内毒素和灭菌生理盐水经乳头管灌注左右侧乳房.灌注前及灌注后0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、24 h观察山羊整体及乳房局部变化.灌注24 h后,处死动物,取乳腺组织,部分用Bou in氏液固定,部分用液氮保存.临床症状及病理切片观察均显示,山羊表现典型的急性乳腺炎症状.检测两侧乳腺组织中部分与乳腺炎症相关因子的含量及其基因表达水平的结果表明:与灌注生理盐水对照相比,灌注内毒素侧乳腺组织中N-乙酰-β-D氨-基葡萄糖苷酶(NAGase)、髓过氧化物酶(MPO)、诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)的活性及IL-1β、IL-6的含量极显著升高(P<0...

以健康泌乳奶山羊为实验动物模型,进行了白色念珠菌性乳腺炎的治疗试验。将30头奶山羊分为发病用药组,发病未用药组和健康对照组。给发病用药组和发病未用药组同时乳导管注射1mL的白色念珠菌的菌液,结果在48h后均出现不同程度的炎症反应。并从患羊乳汁中分离到白色念珠菌。给发病用药组用水煎的自拟中药方剂灌胃,5d后发病用药组症状明显减轻或消失,精神状况明显好转。分别于用药前后对30只奶山羊进行颈静脉采血用于血流变学分析和淋巴细胞转化试验,并分别于用药前后对30只奶山羊采集奶样进行乳成分分析,结果发病用药组的各项健康指标均接近或达到正常。但产奶量比健康对照组稍低。而未用药组的各项健康指标仍显著低于正常水平...

为深入研究奶牛乳腺炎提供一个更方便、经济的实验平台,试验建立了由金黄色葡萄球菌和大肠杆菌联合诱导的大鼠乳腺炎模型。分别用低浓度(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌浓度均为1×105mL-1,L组)和高浓度(金黄色葡萄球菌和大肠杆菌浓度均为1×1012mL-1,H组)细菌混合液,经乳头管灌注到大鼠第4对乳腺内,诱导大鼠的乳腺炎试验。结果表明,低浓度组(L组)乳腺的病变主要以腺泡上皮发生轻度脂肪变性,腺泡腔的分泌物中有透明滴状物为主要特征,高浓度组(H组)的乳腺腺泡结构破坏严重,腺泡中有较多的嗜中性粒白细胞浸润。L组乳腺组织IL-6水平较对照组有所升高,H组则有显著(P<0.05)下降,试验组血清IL-6水...

72只泌乳期SD雌性大鼠随机均分成对照组和试验组(n=36),于产后0 h试验组每只肌注CpG-DNA 200μg,对照组肌注0.01 mol.L-1PBS(pH 7.2)100μL。两组于产后72 h均经乳头管灌注2×1012CFU.mL-1金黄色葡萄球菌,每侧各100μL到第4对乳腺内(两侧);分别于灌注前0 h,灌注后8、16、24、48和72 h(n=6)颈静脉放血处死。组织学观察显示,试验组乳腺腺泡内嗜中性粒细胞(PMN)在感染初期较对照组浸润迅速,试验组在72 h时已无PMN浸润,而对照组仍有浸润。与对照组相比,CpG-DNA能显著降低8、16和72 h的乳腺组织细菌数。IL-2水...

【背景】奶牛乳腺炎是一种常见、多发的奶牛疾病,不仅危害奶牛健康,同时也造成重大经济损失。传统治疗奶牛乳腺炎的药物主要是抗生素,极易造成抗生素耐药与滥用。开发替代抗生素的方法用于奶牛乳腺炎的防治具有现实意义。蜂胶是西方蜜蜂采集植物树脂,混合自身上颚腺、蜡腺的分泌物形成的具有良好抗炎、抗菌活性的天然产物,对防治奶牛乳腺炎具有潜在开发利用价值。尽管近年来国内外有一些有关蜂胶防治乳腺炎方面的报道,但蜂胶如何影响乳血屏障功能,目前国内外尚无相关研究报道。【目的】利用细菌脂多糖(lipopolysaccharides, LPS)诱导的小鼠急性乳腺炎模型,评估中国蜂胶乙醇提取物对小鼠急性乳腺炎的保护作用及其对乳腺细胞紧密连接蛋白表达的影响,为后续利用蜂胶防治奶牛乳腺炎的深入研究奠定理论基础。【方法】采用超高效液相色谱串联三重四级杆质谱(UHPLC-QqQ-MS/MS)对中国蜂胶乙醇提取物中主要的多酚类化合物进行种类和含量测定。试验分为空白对照组、LPS模型组、中国蜂胶提取物试验组以及地塞米松阳性对照组。ICR雌性小鼠连续灌胃中国蜂胶提取物或阳性对照药物7d后,模型组、试验组和阳性对照组经第四、五对乳头管注射1 mg·kg~(-1)体重LPS,建立小鼠急性乳腺炎模型,24 h后处死,收集乳腺组织样本。以苏木精-伊红(H.E)染色法、天狼星红染色法评估小鼠乳腺组织病理变化;利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定炎症因子释放量;利用荧光定量PCR测定小鼠乳腺组织中紧密连接蛋白(Occludin、Cluadin-1、ZO-1) mRNA的表达情况;最后利用免疫组化技术研究小鼠乳腺紧密连接蛋白(Occludin和ZO-1)表达和分布情况,利用以上指标综合评判中国蜂胶乙醇提取物的抗乳腺炎活性及其对乳腺紧密连接蛋白的影响。【结果】基于UHPLC-QqQ-MS/MS,建立了中国蜂胶乙醇提取物中主要的17种多酚类化合物的精确定量方法,检测结果表明含量最高的5种化合物及其含量分别为:高良姜素(12.88±0.57μg·mg~(-1))、短叶松素3-乙酸酯(12.93±0.59μg·mg~(-1))、松属素(8.56±0.27μg·mg~(-1))和短叶松素(8.52±0.25μg·mg~(-1))。动物试验结果表明,灌胃中国蜂胶提取物能够显著缓解LPS注射导致的乳腺组织中炎性细胞浸润、缓解乳腺腺泡结构损伤;同LPS组相比,中国蜂胶提取物灌胃处理可有效抑制LPS导致的小鼠乳腺组织中炎症因子(IL-1β,IL-6和IL-10)的释放,并可提高小鼠乳腺中紧密连接蛋白的mRNA表达,缓解LPS注射所导致的乳腺上皮细胞紧密连接的破坏。【结论】中国蜂胶提取物对脂多糖诱导小鼠乳腺炎具有良好的预防效果,并可有效促进乳腺紧密连接蛋白的表达,维持乳腺中紧密连接结构完整性,保护血乳屏障,但蜂胶对紧密连接影响调控的分子机理还需进一步深入研究。

【目的】研究日粮中添加枸杞多糖对泌乳母兔生产性能及血清生化指标的影响,为枸杞多糖在家兔日粮中的应用提供理论依据。【方法】选择同期分娩的48只泌乳獭兔,按照胎次、产仔数、体重相近的原则,随机分成4组,每组12只,每组仔兔总数相等(72只)。Ⅰ组为对照组,饲喂基础日粮,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在饲喂基础日粮的基础上分别添加0.5%、0.75%、1%的枸杞多糖,试验期共30 d。【结果】添加0.5%、0.75%和1%枸杞多糖组的仔兔35日龄断奶窝增重分别比对照组提高了5.95%、4.60%和6.47%,但差异均不显著(P>0.05);各试验组仔兔的断奶成活率与对照组相比均差异极显著(P<0.01);各试验组母兔...

【目的】为探讨卡介菌多糖核酸(polysaccharide nucleic acid fraction of Bacillus Calmette Guerin,BCG-PSN)对内毒素(endotoxin or lipopolysaccharide,LPS)诱发实验性动物乳腺炎的保护机制,【方法】72只清洁级SD大鼠被随机分成实验组和对照组(n=36)。确定怀孕14d起,隔日左后腿胫骨前肌肌内注射BCG-PSN(实验组)或灭菌生理盐水(对照组)0.33mL/只,连续5次;产后72h经乳头管灌注LPS10μg/侧到第4对乳腺(两侧)内。分别于灌注前(定义为0h)及灌注后3、6、9、12和24h(...

[目的]本试验旨在探究乳腺炎奶牛乳腺组织中是否存在细胞程序性坏死。[方法]采集健康和乳腺炎奶牛乳腺组织,HE染色后进行形态学观察,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测炎性相关因子基因(IL-1β、IL-6、TNF-α)和程序性坏死相关因子受体相互作用蛋白基因(RIPK3、RIPK1)、混合谱系激酶结构域样蛋白基因(MLKL)和Caspase8基因表达,Western blot检测MLKL和磷酸化MLKL蛋白(p-MLKL)表达。[结果]程序性坏死标记蛋白MLKL在乳腺炎乳腺组织中表达;IL-1β、IL-6、TNF-α和RIPK1 mRNA的表达量极显著升高(P0.05),但p-MLKL蛋白表达量显著增加(P<0.05)。[结论]根据程序性坏死相关因子的表达变化,可以推断出在乳腺炎乳腺组织中存在细胞程序性坏死。

为探讨蒙药成份复方对乳腺炎模型小鼠免疫功能的影响,96只产后35d泌乳期母鼠被随机分为4组(n=24),灌药3d后,于第4d的末次灌药后1h复制小鼠乳腺炎病理模型,继续用药治疗3d。并于复制模型前0、48和72h用碳廓血清法测巨噬细胞吞噬活力;MTT法测自然杀伤细胞(Natural killer cell,NK cell)活性;脱臼处死小鼠称胸腺和脾脏湿重并计算小鼠免疫脏器指数;ELISA法测小鼠血清中白介素-4(IL-4)、干扰素(IFN-γ)含量。结果表明蒙药成份复方可以显著提高小鼠免疫脏器指数、促进

[目的]本试验旨在研究黄芪多糖(APS)对H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞凋亡、氧化损伤及相关基因、蛋白表达的影响。[方法]体外培养奶牛乳腺上皮细胞并用H_2O_2(600μmol·L~(-1),2 h)诱导建立乳腺上皮细胞氧化应激模型;试验分组:空白对照组、H_2O_2组、H_2O_2+APS组(8 mg·mL~(-1)APS)。[结果]与空白对照组相比,H_2O_2组细胞活力显著下降(P<0.05);与H_2O_2组相比,H_2O_2+APS组的细胞凋亡率和细胞中的活性氧(ROS)含量均显著降低(P<0.05),而超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著升高(P<0.01),Bax蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且APS降低了H_2O_2诱导细胞凋亡率。[结论]APS能够提高H_2O_2诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化酶活性,并减缓氧化损伤引起的奶牛乳腺上皮细胞凋亡。

为分析苜蓿素对脂多糖诱导下体外培养奶牛乳腺上皮细胞抗炎和乳蛋白合成相关基因表达的影响,本研究将体外培养的奶牛乳腺上皮细胞分成4组,即基础培养基(对照)和基础培养基中分别加入1μg·m L-1LPS(L)、1μg·m L-1LPS+10μg·m L-1苜蓿素(L+T)和10μg·m L-1苜蓿素(T)。结果显示,1)与对照组相比,L组奶牛乳腺上皮细胞的活性显著下降(P<0.05),而T组则显著升高(P<0.01)。2)L+T组细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性显著高于L组(P<0.01),而一氧化氮(NO)