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[期刊] 西南农业学报
[作者]
刘艳玲 向凤宁
[期刊] 中国农业科学
[作者]
罗明 周建平 肖月华 李先碧 侯磊 肖忠意 裴炎
【目的】研究油菜素类固醇物质(BRs)在棉花纤维生长发育过程中的作用。【方法】通过棉花EST序列的筛选和整合,从陆地棉徐州142纤维中克隆了一个BRs合成酶基因GhDWF1。【结果】其cDNA序列全长1849bp,包含一个1692bp的开放阅读框,推导编码563个氨基酸,与水稻、玉米、豌豆、番茄和拟南芥的BRs合成酶DWARF1/DIMINUTO有较高的同源性,具有该类蛋白的典型结构。GhDWF1基因在开花当天的胚珠和纤维中表达最强,在根、幼茎和纤维发育的各个时期表达较高。与徐州142野生型相比,无绒无絮突变体胚珠中表达量较低。【结论】暗示GhDWF1基因的表达与棉花纤维的生长发育有密切关系。
[期刊] 华北农学报
[作者]
李红丽 詹丽娥 乔忠 王彩先 陆冰洋
将麻花鸡副黏病毒ZH-1株毒种接种于11日龄SPF鸡胚,收集48~96 h死亡的鸡胚尿囊液。参考已发表的鸡源副黏病毒F基因序列,设计并合成了一对特异性引物,用以扩增麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因,预期扩增的F基因片段包含完整的开放阅读框。通过RT-PCR扩增出麻花鸡副黏病毒ZH-1株F基因片段,琼脂糖凝胶电泳回收、纯化,得到F基因片段,经EcoRⅠ和SalⅠ消化,将F基因克隆进入PCI-neo载体,转化大肠杆菌DH5α,挑选菌落,经限制性核酸内切酶SalⅠ和EcoRⅠ双酶切及PCR鉴定,结果证明重组真核表达载体PCI-neo-F构建成功,为下一步在哺乳动物细胞Vero细胞中表达打下良好的基础。...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯飞雪 吕瑞华 李依民 高静 王凯 周嘉迪 颜永刚 张岗
【目的】克隆延胡索去甲乌药碱合成酶(norcoclaurine synthase,NCS)基因,分析其在延胡索异喹啉类生物碱合成中的关键作用。【方法】基于转录组数据库,利用逆转录PCR克隆延胡索Cy NCS1基因及其启动子区域序列,采用生物信息学方法分析其编码蛋白的理化性质、结构特征及其启动子区域顺式作用元件,同时进行多序列比对和系统进化树分析,确定其进化关系;利用实时荧光定量PCR对其根、茎、叶及发育早、中、晚期块茎的组织表达模式进行分析;对茉莉酸甲酯(MeJ A)、脱落酸(ABA)处理0,4,8,12 h的叶片进行表达谱分析,以体积分数75%酒精溶剂处理为对照(CK),确定该基因的表达特征。【结果】Cy NCS1基因开放读码框长873 bp,编码291个氨基酸,编码蛋白分子量为33.09 ku,等电点为6.90,具有去甲乌药碱合成酶保守的催化结构域(GDGGVGTV/IL、YKEKF和MIEGGHLDMG),且不含信号肽,预测定位于细胞核中。多序列比对结果显示,Cy NCS1与石生黄堇、罂粟的NCS蛋白同源性较高,分别为83.6%和82.1%;系统进化树结果显示,Cy NCS1与石生黄堇Cs NCS蛋白聚为一支,说明二者亲缘关系较近。该基因启动子区长2 238 bp,包含多种植物激素及低温、热胁迫等环境因子的顺式作用元件。实时荧光定量PCR结果显示,随着发育推进块茎中Cy NCS1的表达量显著增高,且受到Me JA和ABA的诱导,Me JA处理8 h时表达量为0 h的3.10倍,ABA处理8 h为0 h的3.16倍;而对照Cy NCS1表达量随时间推移无明显变化。【结论】克隆并鉴定了延胡索NCS酶基因Cy NCS1,明确了其在发育进程中的表达模式,并确定该基因表达受Me JA和ABA的诱导。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
朱伟溢 陈建荣 彭彦 张学文 郭清泉 赵燕
采用PCR结合RACE技术克隆苎麻栽培种湘苎3号CAD基因全长cDNA序列;再运用qRT–PCR技术对木质素含量不同的代表性苎麻品种湘苎1号、湘苎3号、湘潭大叶白和城步青麻的CAD基因在其茎秆韧皮部和木质部的表达进行定量分析;使用1%间苯三酚和25%盐酸对4种苎麻茎横切片进行特异染色,观察品种间木质素染色度。结果表明,获得的苎麻CAD基因cDNA序列全长为1 378 bp(GenBank登录号,KF758396),编码359个氨基酸,推导为苎麻肉桂醇脱氢酶(BnCAD)。该推导蛋白质与已报道的几种植物木质素合成酶CAD的同源性均达90%以上,其中与蒺藜苜蓿的同源性达97%。运用qRT–PCR方...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张阳 李锐 杨千叶 赵琦
【目的】MEP途径是合成生物碱、萜类物质前体的重要途径之一,1-deoxy-D-xylulose-5-phosphate synthase (DXS)是MEP途径中的第1个限速酶。为了解卷叶贝母DXS的结构和功能特点,本研究利用分子生物学手段对其进行分析,以期为贝母生物碱合成途径研究打下基础。【方法】采用PCR技术克隆卷叶贝母FcDXS基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,运用生物信息学方法对其进行序列分析,预测其潜在的功能。通过荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测FcDXS基因在野生状态(根、茎、叶、鳞茎)和组培诱导物(愈伤组织)中的表达情况。【结果】获得了2151 bp FcDXS基因ORF片段,编码716个氨基酸,并与NCBI公布的砂仁等植物DXS蛋白相似性达80%以上;在Fc DXS蛋白的二级、三级结构预测中,得出Fc DXS蛋白主要由α螺旋构成; qRTPCR检测结果表明FcDXS基因在野生状态下鳞茎表达量最高,激素诱导状态的愈伤组织表达量则是野生鳞茎的5倍。【结论】Fc DXS蛋白质特征区及同源性等生物信息学分析表明该蛋白的结构域较保守,结合荧光定量分析结果证明,Fc DXS是一个有生物学功能且受激素诱导表达的蛋白质。本研究为后续利用基因工程手段提高卷叶贝母生物碱含量奠定了理论基础。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
晏慧君 张颢 蹇洪英 王其刚 邱显钦 张婷 唐开学
【目的】克隆月季丁香酚合成酶基因RhEGS1的全长cDNA序列,分析其序列及表达特征,并对该基因编码的蛋白进行原核表达分析,为深入探讨丁香酚合成酶的生化特性奠定基础。【方法】根据已发表的其它植物EGS基因序列的保守结构域设计简并引物,结合RACE技术,获得RhEGS1的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;利用半定量RT-PCR对不同组织及不同花发育时期RhEGS1进行表达分析。采用Gateway克隆技术,构建原核表达载体,并进行原核蛋白表达。【结果】月季RhEGS1的cDNA全长为1 207 bp,包含一个927 bp的ORF,编码309个氨基酸。同源序列比对发现RhEGS1与仙女扇的Cb...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王慧飞 孙艳香 冯雪 张一名 杨江涛 马梅芳 陈光
【目的】克隆棉花精氨琥珀酸合成酶基因Ｇｈ ＡＳＳ１的ｃ ＤＮＡ序列，并利用原核表达系统高效表达融合蛋白，检测融合蛋白的精氨琥珀酸合成酶活性及其表达对工程菌生长、耐盐能力及与游离Ｌ－瓜氨酸（Ｌ－ｃｉｔ）和Ｌ－精氨酸（Ｌ－ＡｒＧ）含量的影响，为解析该基因的功能及作用机制奠定基础。【方法】以拟南芥推断的精氨琥珀酸合成酶ｃ ＤＮＡ序列作为探针，利用电子克隆和ｒｔ－Ｐｃｒ技术，从棉花幼叶中获得ｃ ＤＮＡ片段，ｔ／Ａ克隆测序后得其序列信息，利用生物信息学软件分析其ＤＮＡ结构、蛋白质结构、功能域和同源性，并构建系统进化树。利用ｑ ｒｔ－Ｐｃｒ检测其在盐胁迫下的表达模式；将Ｇｈ ＡＳＳ１的开放阅读框连接到原核．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张红生 翟虎渠 陆志强 朱立宏 韩亮
测定了１２个水稻抗白叶枯病基因对中国白叶枯病菌７个致病型的１０个菌株的抗性反应。结果表明：Ｘａ－４、ｘａ－５、Ｘａ－７、ｘａ－１３和Ｘａ－２１等５个抗病基因在苗期、分蘖期和孕穗期对病菌侵染均表现为广谱抗病反应。进一步将３个带显性广谱抗病基因的材料ＩＲＢＢ４（Ｘａ－４）、ＩＲＢＢ７（Ｘａ－７）和ＩＲＢＢ２１（Ｘａ－２１）与６个常规感病品种和５个常用不育系及相应保持系配组，对其Ｆ１代杂种用病菌致病型Ⅱ和Ⅳ的ＫＳ－６６和ＺＪ－１７３菌株进行接种，发现抗病基因Ｘａ－７和Ｘａ－２１在杂种Ｆ１中对病菌表现抗病反应，而抗病基因Ｘａ－４在杂种Ｆ１中仅表现中抗反应。提出了在水稻抗白叶枯病育种中应加快对显性广谱抗...
关键词：
水稻 白叶枯病 抗病性 基因表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
邓晓云 戴洪义 梁美霞
以柱型苹果茎尖为试材,采用同源克隆的方法克隆得到赤霉素合成代谢关键酶内根-贝壳杉烯合成酶的cDNA全长序列,命名为MdKS。MdKS的开放阅读框(ORF)全长2 214 bp,编码737个氨基酸。KS属于萜类合成酶亚家族,具有DDXXD保守结构域。氨基酸聚类分析表明,MdKS与梨同源性最高,为98%,其次是板栗,为73%;实时荧光定量PCR分析表明,在苹果的生长季节,MdKS基因在柱型和普通型苹果中均能表达。在苹果的生长初期,普通型苹果MdKS基因的表达量均明显高于柱型苹果,而在6月初,其表达量却略低于柱型苹果。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
周晓卉 黄丽华 蒋向 李育强 张学文
【目的】揭示棉田杂草薤白(Allium macrostemon Bunge)抗草甘膦的分子机理,开发利用其草甘膦抗性特性。【方法】运用RT-PCR结合RACE技术,分离克隆了薤白中草甘膦作用的靶酶EPSP合成酶(EPSPs)基因cDNA,并将其构建成原核表达载体在大肠杆菌中诱导表达和鉴定其抗性。【结果】薤白EPSP合成酶基因cDNA序列全长1821bp,编码一段522个氨基酸的推导蛋白质。经BLAST及蛋白质结构预测,蛋白具有EPSPs的特征序列,并与已报道的EPSPs序列有高同源性,确认克隆的cDNA序列即是薤白EPSPs基因序列,命名为EPSPsA。将该cDNA与原核表达载体pRSET-A...
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
庞景 童再康 黄华宏 林二培 刘琼瑶
通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)结合c DNA末端快速扩增(RACE)技术,从杉木Cunninghamia lanceolata中克隆到2个全长为3 235 bp和3 876 bp的纤维素合成酶基因c DNA序列,被分别命名为Cl Ces A1和Cl Ces A2,Gen Bank登录号分别为JQ844574和JQ844575。相应编码蛋白分别包含992和1 092个氨基酸残基,推测分子量为111 845.3 D和123 105.7 D,等电点为6.04和6.65。氨基酸序列分析发现,它们具有植物纤维素合成酶基因相应的结构特征——锌指结构,2个易变区CSRI和CSRII,2个保守区CR...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
余志涛 刘晓健 马恩波 郭亚平 张建珍
【目的】研究中华稻蝗(Oxya chinensis(Thunberg))几丁质合成酶1(CHS1)基因的表达特性及其在生长发育过程中的作用,从而为实现基于RNAi的蝗虫有效控制提供理论依据。【方法】根据已知中华稻蝗几丁质合成酶1基因(OcCHS1)保守区域部分cDNA序列(GenBank登录号:HM214491)设计特异性表达引物,运用RT-PCR和qPCR研究时空表达特性;采用RNA干扰技术研究其生物学功能。【结果】OcCHS1在中华稻蝗各龄期都有表达,其体表为高表达,其次是气管,其它组织部位表达量低。RNA干扰试验发现,4龄第4天若虫注射OcCHS1的双链RNA(dsRNA)后,与对照组相...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
许海峰 王楠 姜生辉 王意程 刘静轩 曲常志 王得云 左卫芳 张晶 冀晓昊 张宗营 毛志泉 陈学森
【目的】研究新疆红肉苹果（Ｍａｌｕｓ ｓｉｅｖｅｒｓｉｉ ｆ．ｎｅｉｄｚｗｅｔｚｋｙａｎａ（ｄｉｅｃｋ）ｌａｎｇｅｎｆ．）与‘富士’（Ｍ．ｄｏＭｅｓｔｉｃａ ｃｖ．ｆｕｊｉ）等苹果品种杂交后代株系间果实类黄酮合成差异的分子机理，为进一步完善功能型苹果育种的理论与技术体系提供科学依据。【方法】以紫红２号及红脆１、２、４号等红肉程度存在明显差异的４个苹果株系发育后期的果实为试材，进行ＭｙＢ１０启动子基因型鉴定，并测定类黄酮组分和含量，分析类黄酮合成相关基因的表达。【结果】红脆１、２、４号ＭｙＢ１０启动子基因型均是ｒ６ｒ１型，而紫红２号启动子类型为ｒ６ｒ６型。红脆１号和紫红２号果实成熟期类黄酮含量分．．．
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