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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
田丽丽 罗颉 杨鸣琦 王久涛 史嘉瑜
【目的】研究鹿茸对小鼠脑组织抗氧化指标和凋亡相关蛋白表达的影响,为鹿茸的抗氧化和抗凋亡作用研究提供资料。【方法】选用48只6周龄雌性昆明小鼠,随机分为正常组(灌胃生理盐水,n=12)和高、中、低剂量鹿茸冻干粉组(分别灌胃鹿茸冻干粉1,3和5g/kg,n=12)。各组分别灌胃63d,第64天处死小鼠并取材。用试剂盒检测小鼠脑组织匀浆液中单胺氧化酶(Monoamine oxidase,MAO)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)的活性和丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
齐丽娜 蒋静乐 陶生祥 张婧菲 张莉莉 王恬
[目的]本试验旨在探讨宫内发育迟缓(intrauterine growth retardation, IUGR)对猪胎盘细胞增殖、凋亡及抗氧化基因和蛋白表达的影响。[方法]从刚分娩的母猪中选择正常初生重(normal birth weight, NBW)和IUGR仔猪对应的胎盘各5个,分为对照组和宫内发育迟缓组。采用免疫组化法检测胎盘细胞增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,采用TUNEL法检测胎盘细胞凋亡,采用荧光定量PCR检测胎盘NRF2、HO-1、NQO1、SOD1、SOD2、GCLC和GCLM基因的表达,用Westen blot(WB)检测胎盘抗氧化蛋白NRF2和HO-1的表达。[结果]对照组可以观察到较强的PCNA染色,宫内发育迟缓组PCNA染色较弱。IUGR组和对照组凋亡细胞指数分别为19.63%与12.56%,IUGR组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.05)。WB结果显示,对照组与宫内发育迟缓组NRF2和HO-1蛋白表达量差异不显著(P>0.05)。[结论]IUGR会降低猪胎盘细胞增殖,增加猪胎盘细胞凋亡且降低猪胎盘抗氧化基因的表达。
关键词：
宫内发育迟缓 胎盘 增殖 凋亡 抗氧化
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王凡 牛晓莹 刘飞 袁金翠 李聪歌 马雅雯 孟祥杰
为了探讨三氯生(TCS)对硬骨鱼类性腺损伤作用的分子机制,通过半静态水体暴露法对斑马鱼(Danio rerio)进行染毒,将斑马鱼暴露在2种不同TCS浓度(0.034 mg/L和0.068 mg/L)溶液中,同时设置空白对照组,42 d后,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术,探究TCS对斑马鱼卵巢抗氧化及凋亡相关基因表达的影响。结果发现:与空白对照相比,SOD、CAT和GPx1a基因在0.068 mg/L TCS处理组表达水平显著下调,GPx1和MT-2基因在0.034 mg/L浓度组表达显著上调;Bcl-2基因在0.068 mg/L浓度组表达显著下调,p53基因在0.034 mg/L浓度组表达极显著上调,Bax在TCS处理组中均显著上调。以上研究结果表明:较高浓度TCS显著影响了斑马鱼卵巢抗氧化和凋亡相关基因的表达,从而产生了氧化损伤和加速细胞凋亡的发生。
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵洁 梁爱华 付月君
为了研究Bm K IT提高Ac MNPV抗虫活性的作用机制,将Bm K IT基因插入到Ac MNPV中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ac MNPV-Bm K IT(IE1)、Ac MNPV-Bm K IT(P10)、Ac MNPV-Bm K IT(PH)和一种重组双价病毒Ac MNPV-Bm K IT(P10)-vcath(PH),通过四唑盐比色法(MTT)和蛋白质印迹法(Western Blot)分析了Bm K IT在Ac MNPV的3个启动子调控下对Sf9细胞增殖和细胞凋亡的影响,结果显示,感染病毒36,48 h Bm K IT在不同启动子调控下表达量从高到低依次为PH、P10、IE1。同...
[期刊] 华北农学报
[作者]
赵洁 梁爱华 付月君
为了研究Ｂｍ Ｋ ＩＴ提高Ａｃ ｍＮＰＶ抗虫活性的作用机制，将Ｂｍ Ｋ ＩＴ基因插入到Ａｃ ｍＮＰＶ中形成重组病毒。采用重组单价病毒Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（ＩＥ１）、Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（Ｐ１０）、Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（ＰＨ）和一种重组双价病毒Ａｃ ｍＮＰＶ－Ｂｍ Ｋ ＩＴ（Ｐ１０）－ＶｃＡＴＨ（ＰＨ），通过四唑盐比色法（ｍＴＴ）和蛋白质印迹法（ＷＥｓＴＥｒＮ ＢｌｏＴ）分析了Ｂｍ Ｋ ＩＴ在Ａｃ ｍＮＰＶ的３个启动子调控下对ｓｆ９细胞增殖和细胞凋亡的影响，结果显示，感染病毒３６，４８ Ｈ Ｂｍ Ｋ ＩＴ在不同启动子调控下表达量从高到低依次为ＰＨ、Ｐ１０、ＩＥ１。同．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
杨迪 黄玲巍 杨雅雯 乔自林 王家敏
表皮生长因子受体（EGFR）在许多实体肿瘤中过度表达，建立稳定过表达犬EGFR蛋白的MDCK细胞株，有利于为研究犬或人类肿瘤疾病提供良好的细胞模型和研究基础。首先制备目的片段以构建EGFR基因过表达载体，与慢病毒包装载体共同转染至293T细胞中，48 h后提取上清液经纯化获得EGFR基因过表达慢病毒液。将其转染至MDCK细胞中，经嘌呤霉素筛选和单细胞克隆后观察感染效率，RT-qPCR和Western Blot、间接免疫荧光分别检测基因及蛋白的表达，建立EGFR蛋白过表达MDCK细胞株。使用流式细胞仪分别检测过表达及对照细胞株的细胞凋亡和细胞周期。犬EGFR基因位于18号染色体，由编码跨膜糖蛋白的30个外显子组成。经反应体系，PCR产物交换入线性化表达载体，获得了阳性转化子8个，大小为738 bp。所获EGFR基因过表达慢病毒滴度为3.5×108 TU/mL。转染MDCK细胞后在荧光显微镜下观察荧光效果显著，经检测EGFR基因及其蛋白在细胞中的表达量显著升高。间接免疫荧光试验显示，EGFR在细胞中表达明显增强。过表达细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率显著上升，且在G2/M期发生阻滞。成功建立一株稳定的犬EGFR过表达MDCK细胞株，犬EGFR的过表达催化了细胞分裂，使DNA复制加快，同时刺激了细胞凋亡。
关键词：
犬肾细胞系 表皮生长因子受体 慢病毒载体
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
刘明美 齐斌 占今舜 陈银岳 赵国琦
为研究大豆低丰度蛋白提取物对小鼠免疫功能及抗氧化能力的影响,选用21日龄断奶ICR雄性仔鼠180只,随机分为5组,每组36只,试验期28d,每天灌胃大豆低丰度蛋白提取物200μL(以提取物中蛋白含量计,分别为0、0.5、1.0、2.0、4.0mg)。结果表明:1)试验第7天时,处理组小鼠的白细胞、淋巴细胞和中性粒细胞数目均高于对照,且D_(4.0mg)组极显著高于对照(P<0.01)。2)试验第7和28天时,D_(4.0mg)组小鼠的脾脏指数均高于其他试验组;第7天的处理组小鼠脾脏IL-2、TNF-α基因
[期刊] 水产学报
[作者]
郑金仙 周东生 魏山山 熊云凤 孔有琴 张易祥 赵建华 刘艳 戚常乐 丁志丽
为探讨动植物蛋白对日本沼虾生长、肌肉组成、抗氧化、TOR信号通路及食欲调节相关基因表达的影响，实验配制了3组等氮等能饲料，分别为鱼粉组(FM)、混合植物蛋白组(豆粕，菜粕，玉米蛋白粉)(PPB)和混合植物蛋白添加氨基酸组(PPB/Aa)，投喂饲养日本沼虾8周。结果发现，PPB和PPB/Aa组日本沼虾增重率和摄食率显著低于FM组，而饲料系数显著高于FM组，各组之间成活率和肌肉必需氨基酸组成无显著差异；FM组肝胰腺丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著低于PPB组和PPB/Aa组，各组谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)无显著差异，PPB与PPB/Aa组血清碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)和ALT的活性均显著高于FM组；与FM组相比，PPB与PPB/Aa组显著降低了雷帕霉素靶蛋白(TOR)、核糖体蛋白S6激酶(S6K)及神经肽(NPY)基因的表达，但各组瘦素(leptin)基因的表达无显著差异。研究表明，鱼粉与混合植物蛋白对日本沼虾肌肉中氨基酸组成无显著影响，但混合植物蛋白源降低了虾的生长和抗氧化能力及TOR信号通路与NPY基因表达，且添加氨基酸不能缓解混合植物蛋白所引起的生长抑制、氧化应激及蛋白质合成和食欲相关基因表达的降低。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王宝维 陈苗璐 王秉翰 张名爱 葛文华 程凡升 岳斌
【目的】研究不同水平锌对5—15周龄鹅免疫抗氧化功能与金属硫蛋白-Ⅰ(MT-I)mRNA表达量的影响及相互关系,以科学地确定鹅饲粮中锌的需要量。【方法】试验随机选用29日龄体重相近的青农灰鹅360只(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
王晓晔 石博妹 王英群 李珣 刘徳玉 李铭 李芳芳 胡传活
人工抗凋亡蛋白ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ能保护多种因素引起的细胞异常凋亡，为了获得高纯度Ｂｃｌ－ｘ ｌ与ＰＴＤ（ＰｒｏＴｅｉｎ ＴｒａｎｓＤｕｃＴｉｏｎ Ｄｏｍａｉｎｓ）的融合蛋白，首先采用Ｔｒｉｚｏｌ法提取ｓＤ大鼠肝脏总ｒｎａ，将ｒｎａ反转录为ｃ Ｄｎａ，设计引物以ｃ Ｄｎａ为模板，Ｐｃｒ扩增Ｂｃｌ－ｘ ｌ基因，构建Ｐ ｕｍ１９－Ｔ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ质粒，并对质粒双酶切鉴定和测序鉴定；其次设计包含ＰＴＤ序列的Ｂｃｌ－ｘ ｌ引物，以测序正确的Ｐ ｕｍ１９－Ｔ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ质粒为模板，Ｐｃｒ扩增ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ序列，将扩增序列克隆入Ｐ ｅＴ２８ａ载体，构建ＰＴＤ－Ｂｃｌ－ｘ ｌ蛋白的原核表达质．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陆蓓玲 王兰芳
为研究急性热应激后小鼠抗氧化酶活性的变化及其肝脏热休克蛋白70基因(Hsp70)的表达规律,选取5～6周龄健康昆明雄性小鼠56只,平均分成7组(1个对照组和6个急性高温处理组)。6个急性高温处理组小鼠分别为41℃、急性高温处理2 h后再置于25℃环境中0、2、6、12、24、48 h的小鼠。分别测定各处理小鼠的脏器指数、血清和肝脏中抗氧化酶的活性,用RT-PCR方法检测肝脏中Hsp70-1,Hsp70-3基因的表达。结果表明,急性热应激处理后,小鼠脏器指数在48 h内没有明显变化。血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性显著升高(P<0.05)...
关键词：
小鼠 热应激 热休克蛋白70 抗氧化能力
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
纪红军 胡进 肖成 牛亚茹 徐银学
[目的]本试验旨在研究RNA干扰Dickkopf-2基因(DKK2)表达对小鼠子宫内膜基质细胞增殖和凋亡的影响。[方法]设计并合成3条针对DKK2基因的siRNA,在转染试剂LipofectamineTM2000介导下转染小鼠子宫内膜基质细胞,用RT-q PCR法检测转染前、后DKK2基因的表达量,筛选干扰效率最高的1条siRNA。用该siRNA转染小鼠子宫内膜基质细胞24 h,利用Caspase3活性和Annexin-V FITC/PI双染法检测干扰DKK2基因对细胞凋亡的影响;用CCK8细胞计数法检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
狄和双 杨媛媛 王利刚 崔群维 程凯宁 黄静燕 王根林
应用乳酸脱氢酶(LDH)活力测定、透射电镜、免疫组化和Caspase-3活性分析等技术,检测转化生长因子β1(TGF-β1)对奶牛乳腺组织细胞活性、凋亡和HSP70蛋白表达的影响。用10 ng.mL-1TGF-β1处理乳腺组织48 h,分别在不同时间点收集组织和培养液检测各指标,以0 h不加TGF-β1作为对照组。结果显示,随TGF-β1作用时间的延长组织细胞活率逐渐降低,24 h和48 h组显著低于对照组(P
[期刊] 华北农学报
[作者]
郭秀林 刘子会 赵会嶶 徐婧 李慧聪
小麦经过适当高温锻炼可产生获得耐热性,为揭示其分子生物学机理,选取耐热品种邯6172和热敏感品种石新733,对34℃热锻炼和42℃高温胁迫条件下叶片2个热激蛋白基因和6个抗氧化酶基因转录表达进行了荧光定量分析,并测定了热致死时间。结果显示,34℃热锻炼可不同程度地提高耐热品种和热敏感品种叶片的热致死时间,42℃高温胁迫下耐热品种表现出更强耐热性。34℃热锻炼可诱导耐热品种热激蛋白TaHsp70和TaHsp16.9基因在不同时间点出现不同程度表达高峰,植株遭受高温胁迫时基因表达上调幅度更强于热敏感品种。34℃热锻炼,耐热品种和热敏感品种Ta(Cu/Zn)SOD、TaMnSOD、TaApx1、Ta...
[期刊] 水产学报
[作者]
刘波 明俊超 谢骏 戈贤平 徐跑 何义进 周群兰 潘良坤 周传朋
将罗氏沼虾随机分成5组,每组3个平行,每个平行1000尾,第1组为对照组,投喂基础日粮;另外4组为试验组,在基础日粮中分别添加0.05%、0.1%、0.2%、0.4%大黄蒽醌提取物。饲养10周后,对罗氏沼虾进行连续35℃高温应激48h,测定肝胰腺总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、一氧化氮以及应激蛋白70的mRNA相对含量变化。结果表明:应激前,0.05%组显著提高了肝胰腺过氧化氢酶活性、超氧化物歧化酶活性,显著降低了肝胰腺丙二醛含量;0.2%试验组显著增加了肝胰腺总抗氧化能力、一氧化氮浓度,显著降低了肝胰腺丙二醛含量;0.10%、0.2%试验组显著增加HSP70mRNA的相对含...
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