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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王显生 高文瑞 石庆华 张桦 张巨松 李建贵 何小玲 麻浩
以鹰嘴豆为材料,通过对样品制备、电泳条件的优化,建立其籽粒贮藏蛋白的双向电泳技术,并通过电泳图谱的分析,了解贮藏蛋白等电点和相对分子质量的分布情况.结果表明,经考马斯亮蓝染色获得贮藏蛋白斑点约380个,等电点范围在pH4.0～8.0,其中大部分集中在pH6.0～7.0;鹰嘴豆籽粒贮藏蛋白质的相对分子质量为11000～120000,表现出2个分布峰,一个在30000～40000,另一个在50000～60000;鹰嘴豆与大豆籽粒贮藏蛋白的分子质量和等电点分布基本相似.
关键词：
鹰嘴豆 贮藏蛋白 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
石海波 王云生 冯勇 高聚林 白海 苏二虎 张来厚 赵瑞霞 刘志雄 黄灵忠 姜丽丽
为了获得玉米籽粒双向电泳中蛋白质提取的最佳方法,建立最佳的玉米籽粒蛋白双向电泳技术体系,对酚抽提法、三氯乙酸/丙酮沉淀法(TCA/丙酮沉淀法)和可溶性蛋白提取法3种不同提取方法得到的蛋白质进行了分析,并在相同条件下进行双向电泳比对分析,结果表明:可溶性蛋白提取法获得的蛋白纯度高、浓度适中、双向电泳蛋白质点最丰富,最适合双向电泳研究;利用可溶性蛋白提取法获得的蛋白,对第一向等电聚焦参数等条件,以及不同p H值范围的IPG预制凝胶条进行了比较分析,结果表明:采用p H值3~10的IPG预制凝胶条时,采取电压梯度上升的方式,总聚焦70 000 Vhs、上样量800μg效果最佳,采用p H值4~7的I...
关键词：
玉米 籽粒 蛋白组学 双向电泳
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
尹泽超 王玉婷 王耀杰 桑利群 罗秋香 孟凡娟
为了获取高质量的西藏巨柏叶片蛋白质,分别采用酚抽提法、TCA/丙酮法和改良的TCA丙酮法3种方法对西藏巨柏叶片进行总蛋白的提取,同时利用蛋白试剂盒(The 2-D Quant Kit)对蛋白质的浓度和纯度进行了分析测定,并通过蛋白质斑点数量及分布特征,最后确定了最佳蛋白提取方法。结果表明:对样品研磨的精细程度、丙酮清洗沉淀次数等操作细节均能影响提取结果,同时采用改良的TCA丙酮法提纯后的结果最佳。说明改良的TCA丙酮法可应用于西藏巨柏叶片后续的蛋白质组学研究。
关键词：
巨柏 叶片 蛋白 双向电泳
[期刊] 中国农业科学
[作者]
卢为国 王树峰 李卫东 梁慧珍 耿臻 范彦英 刘亚非 王庭峰 张辉 李金英
2001～2002年在河南省夏大豆主产区的5个试点,以豫豆25号为材料分13期播种,将109个大豆样本的11S/7S比值与气象、土壤养分和海拔、纬度等29个生态因子进行了逐步回归统计分析。结果表明,6个生态因子与大豆11S/7S比值密切相关。并明确了在夏大豆鼓粒成熟期较低的昼夜温差有利于提高11S/7S比值,鼓粒成熟期日照时数与11S/7S比值呈二次曲线关系,当日照时数在110.8h时,11S/7S比值最小,当日照时数在459.2h时,11S/7S比值最大;在幼苗期较高的均温和较小的昼夜温差有利于提高11S/7S比值;分枝期较大的昼夜温差利于提高11S/7S比值;土壤中钾含量与11S/7S比值...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张志芬 高小丽 冯佰利 柴岩 党根友 谢惠民
【目的】研究糜子籽粒贮藏蛋白组分,为糜子种质资源研究和品种改良提供理论依据。【方法】分步提取13个糜子品种籽粒的清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白,利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术,对各蛋白组分的亚基组成进行分析。【结果】参试样品籽粒清蛋白平均含量为13.67 mg/g,球蛋白为8.12 mg/g,谷蛋白为9.73 mg/g,醇溶蛋白为2.70 mg/g;在4种组分中,品种之间醇溶蛋白含量差异最大。SDS-PAGE图谱显示,染色后清蛋白、球蛋白、谷蛋白和剩余蛋白条带清晰可见;在14.4~94.0 ku,清蛋白有10~12亚基,谷蛋白有10或11亚基,球蛋白有9~11亚...
关键词：
糜子 贮藏蛋白 SDS-PAGE 多态性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张晓林 陆秀君 马蓓蓓 徐凯
【目的】探索一套适用于天女木兰种子蛋白的双向电泳体系,为研究其种子萌发过程中的蛋白表达差异奠定基础。【方法】比较蛋白的不同提取方法(酚提取法、三氯乙酸-丙酮-酚提取法、三氯乙酸-丙酮法和Tris-HCl法)、IPG胶条pH梯度(pH3～11NL、pH3～10和pH4～7)、裂解液中的尿素浓度(6,7,8,9mol/L)和分离胶浓度(10%和12.5%)等条件,对天女木兰种子蛋白双向电泳结果的影响,筛选适宜的双向电泳条件。【结果】以Tris-HCl法提取种子蛋白,在IPG胶条pH为4～7、裂解液中尿素浓度为9mol/L、分离胶浓度为12.5%的条件下,可以获得分辨率高、背景清晰、重复性好的天女木...
关键词：
天女木兰 种子 双向电泳 蛋白质
[期刊] 淡水渔业
[作者]
徐湛宁 李福贵 陈杰 蒋霞云 邹曙明
为建立并优化草鱼鳃蛋白质组双向电泳的技术体系,实验将草鱼鳃经裂解处理后,通过固相p H梯度胶条进行一向等电聚焦和SDS聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白分离,对不同的裂解液配方、蛋白纯化方法、IPG胶条的分离范围、上样量和染色方法等进行了探索和优化,并应用lmage Master 2D Platinum 7.0软件对电泳图谱进行了分析。结果表明:采用裂解液中添加DTT来取代Tris和TBP、选择分离范围为pH4-7的IPG胶条和150μg的主动水化上样,电泳结束后对凝胶进行硝酸银染色,获得了覆盖范围广、低背景
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
郭红彦 吴青霞 彭方仁
采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和电子显微技术,对银杏不同部位的营养贮藏蛋白质组分及其动态变化规律进行了研究.结果表明,银杏营养贮藏蛋白质主要存在于枝条的皮层和木质部中;当年生枝条含量高于二年生枝条,皮层的含量高于木质部;枝条中营养贮藏蛋白质组分主要为36、32、28、23、18和15kD的蛋白质;银杏营养贮藏蛋白质的动态变化分为积累和降解两个阶段,5月中旬新叶形成后即开始积累,12月份达到最高,翌年春季降解满足芽的萌发,至4月上旬逐渐消失.
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王小利 张改生 陈新宏 赵继新 刘宏伟 王军卫
利用小麦种子贮藏蛋白凝胶电泳技术,对簇毛麦(Haynaldiavillosa)、滨麦(Leymusmollis)、华山新麦草(Psathyrostachyshuashanica)、大麦(Hordeumdistichom)以及黑麦(Secalecereale)的高分子量谷蛋白亚基和醇溶蛋白进行了分析。结果表明,簇毛麦、滨麦、华山新麦草、大麦的高分子量谷蛋白亚基和醇溶蛋白与普通小麦相比均有各自的特征带;利用簇毛麦和大麦的高分子量谷蛋白亚基特征带鉴定出了普通小麦中与小麦第一同源群染色体有部分同源的V1和H5附加系;利用黑麦1RS醇溶蛋白标记位点Gld1B3鉴定了1BL/1RS易位系,同时利用染色体...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
胡敏 徐凌飞 张军科 仇宗浩 丁勤 张静
【目的】探索建立有效的梨叶片蛋白质组双向电泳体系,为梨蛋白质组的后续研究提供参考。【方法】以早酥梨叶片为材料,比较蛋白质提取方法、蛋白质裂解时间、IPG胶条的pH梯度和长度、等电聚焦程序及SDS-PAGE电泳参数对梨叶片蛋白双向电泳结果的影响。【结果】采用第2种改良的三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取梨叶片总蛋白,蛋白质裂解1h,选用长17cm、pH 4～7的IPG胶条及聚焦程序Ⅱ进行等电聚焦,于100V30min、180V 6h条件下进行SDS-PAGE垂直电泳,可以获得背景清晰、重复性好的双向电泳图谱。【结论】建立并优化了适用于梨叶片蛋白质组分析的双向电泳体系。
关键词：
梨 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 水产学报
[作者]
吕爱军 胡秀彩 孙敬锋 YEONG Yiksung 石洪玥 李莉 孔祥会
为建立鱼源嗜水气单胞菌全菌蛋白图谱并进行质谱分析，利用双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术对嗜水气单胞菌的蛋白质组学进行鉴定研究。结果显示，嗜水气单胞菌２８°Ｃ培养１２ ｈ、三氯醋酸（ＴＣＡ）／丙酮沉淀法提取全菌蛋白、等电聚焦２０ ０００ Ｖｈ的２－ＤＥ图谱匹配率达８１％；采用１８ ＣＭ、ｐ ｈ ３－１０ ＩｐＧ胶条进行２－ＤＥ分析获得１４６个蛋白点，随机选取部分蛋白点进行肽质量指纹图谱（ｐＭＦ）分析，共鉴定２３个蛋白点包括膜脂蛋白、分子伴侣、３０Ｓ核糖体蛋白Ｓ１、延伸因子、细胞色素Ｃ等，其中发现烯醇化酶、甘油醛－３－磷酸脱氢酶、二氢．．．
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
易克 田云 徐向利 卢向阳 萧浪涛
为探讨水稻灌浆期间与籽粒充实相关蛋白表达的变化,建立了一套适于水稻种子胚乳蛋白双向电泳分析技术,探讨了胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术.结果表明,通过乙醇铵沉淀、高压等电聚焦和两步平衡等方法可以获得较好的分析结果,获得胚乳蛋白斑点数约 350 个,等电点范围在 3.0~9.0,其中大部分集中在 4.0~7.0.
关键词：
水稻 胚乳蛋白 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
孙一丁 章成 黄兴奇 王玲仙 程在全
为揭示野生稻与栽培稻之间种子贮存的差异,建立了一套适合于水稻胚乳蛋白双向电泳分析的技术。探讨了种子胚乳蛋白的提取、纯化以及双向电泳的一些关键技术。结果表明,直接使用提取液(7M尿素,2M硫脲,4%3-[3-(胆酰氨丙基)二甲铵基]丙磺酸内盐,0.5%等电聚焦缓冲液3-10,40mM二硫苏糖醇)对单位米粉进行抽提后,直接离心上样,可以防止样品蛋白的丢失,保证样品蛋白的完整性,而在等电聚焦时,延长除盐时间,可以有效地减少凝胶中的横纹和竖纹,通过二向电泳分析结果,我们从合系41种子胚乳中得到蛋白斑点数约为310个,从滇超9号种子胚乳中得到蛋白点数约为327个,普通野生稻中得到蛋白点数约为331个,药...
关键词：
野生稻 胚乳蛋白 二向电泳
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
林梓浩 李玉红 董从娟 陈鹏
【目的】建立一套适合黄瓜叶片细胞壁蛋白质组学研究的双向电泳体系,为黄瓜细胞壁蛋白质组学的后续研究奠定基础。【方法】以黄瓜品种"长春密刺"幼苗叶片为材料,比较2种不同提取介质(CaCl2和LiCl溶液)对细胞壁蛋白的提取效果,对比IPG胶条梯度、裂解液、上样量及等电聚焦程序对黄瓜叶片细胞壁蛋白双向电泳结果的影响。【结果】以0.2mol/L CaCl2和3mol/L LiCl溶液依次提取黄瓜叶片细胞壁蛋白,选用17cm pH 3~10NL IPG胶条和裂解液Ⅱ(7mol/L尿素、2mol/L硫脲、40g/L CHAPS、10g/L DTT和1mmol/L PMSF),上样量800μg,按聚焦程序Ⅰ...
[期刊] 林业科学研究
[作者]
李佳 陆秀君 梅梅 孙晓梅 张晓林
［目的］探索一套适用于银杏种胚蛋白的双向电泳体系，为研究银杏种胚在不同发育阶段的表达差异蛋白提供基础。［方法］分别从蛋白的不同提取方法（直接提取法、酚提取法、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ法、Ｔｒｉｚｏｌ提取法和ＴＣＡ－丙酮－酚法）、裂解液中的尿素浓度（６ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、７ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、８ ｍｏｌ·ｌ～（－１）、９ ｍｏｌ·ｌ～（－１））蛋白上样量（１ ５００μｇ、１ ６５０μｇ、１ ８００μｇ）和分离胶浓度（１０％、１２．５％、１５％）四个方面对银杏种胚的蛋白图谱进行分析，筛选出适宜双向电泳的条件。［结果］采用ＴＣＡ－丙酮－酚法提取银杏种胚蛋白，在裂解液中尿素浓度为８ ｍｏｌ·ｌ～（－１．．．
关键词：
银杏 种胚 蛋白质 双向电泳
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