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[期刊] 西南农业学报
[作者]
段修军 董飚 杨廷桂 孙国波 王健 张玲 李小芬
本文采用克隆、测序技术获得浙东白鹅ＰＲＬＲ基因ｃ ＤＮＡ序列，利用实时荧光定量ＰｃＲ技术检测鹅产蛋期和就巢期ＰＲＬＲ基因在生殖相关组织中的表达规律，为揭示ＰＲＬＲ基因在生殖过程中的功能提供资料。结果表明，在获得的浙东白鹅ＰＲＬＲ基因ｃ ＤＮＡ序列中，其中编码区２４９６ ｂＰ可编码８３１个氨基酸，与其他鹅ＰＲＬＲ序列相比发生了Ｔ６６７ｃ、Ｇ７３８Ａ、ｃ７５７Ｔ、Ｇ１０４７Ａ突变，其中Ｔ６６７ｃ引起氨基酸Ｒ－ｃ的变化，ｃ７５７Ｔ处引起氨基酸Ｗ－Ｒ的变化。在产蛋期和就巢期时，垂体中ＰＲＬＲ基因ｍＲＮＡ表达量均显著性高于下丘脑、卵巢和输卵管，其他组织间表达量没有显著性差异。同一组织在产蛋期和就巢期之间．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
唐舟凯 张飘逸 储张杰 朱新平 李伟 吴栩灵 徐红艳
为探索龟鳖类生殖细胞的发育分化机制,实验通过特异性引物克隆了中华鳖dazl基因的cDNA片段,长1 007 bp,其中包括5′端非编码区197 bp,3′端非编码区33 bp,开放阅读框777 bp,编码258个氨基酸。氨基酸序列比对显示其与西部锦龟Dazl同源性最高,达96%;与小鼠Dazl同源性达75%。荧光定量PCR分析结果显示,中华鳖dazl mRNA主要在精巢和卵巢中表达,在体细胞组织中仅检测到微量表达。冰冻切片原位杂交结果显示,中华鳖dazl mRNA在生殖细胞中特异表达,且在不同时期的生殖细胞中呈动态表达模式。在精巢中,中华鳖dazl mRNA在初级和次级精母细胞中表达最强,在精原干细胞中表达水平次之,在精子细胞中未检测到信号;在卵巢中,中华鳖dazl mRNA信号在初级卵母细胞胞质中均匀分布且在最早期的初级卵母细胞中信号最强,随着卵母细胞的增大,信号逐渐聚集并逐渐减弱。研究表明,dazl基因可能对中华鳖两性生殖细胞的发生具有重要的调控作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨洋 李宗帅 董伟韬 胡俊杰 赵兴绪 张勇
[目的]克隆分析绵羊联会复合中心组分蛋白1 (synaptonemal complex central element protein 1,SYCE1)基因,检测其在雄性生殖轴系中的表达,探索SYCE1对雄性动物生殖发育的调控机制。[方法]以雄性绵羊(小尾寒羊)为研究对象,通过RT-PCR技术克隆SYCE1基因序列,并对该序列及其编码的蛋白进行生物信息学分析;利用qRT-PCR、Western blotting技术分析SYC E1在绵羊下丘脑-垂体-睾丸生殖轴及不同发育阶段(40日龄、3月龄和12月龄)睾丸中的表达情况;采用免疫组织化学染色方法检测SYCE1蛋白在不同发育阶段睾丸组织中的分布情况。[结果]核苷酸序列分析表明,SYCE1基因CDS全长972 bp,编码274个氨基酸。进化树结果表明,绵羊SYCE1氨基酸序列与山羊、欧洲普通牛、野牛、白尾鹿等的氨基酸同源性高;不同物种之间同源性分析发现,SYCE1基因在进化中高度保守;qRT-PCR、Western blotting检测结果表明,SYCE1 mRNA及其蛋白在绵羊的下丘脑、垂体、睾丸及附睾组织中均有表达,其中睾丸组织表达量极显著高于其他组织(P
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李洁 周浩 郁建锋 姚文 顾志良
[目的]Vanin是一种泛酰巯基乙胺酶,在脂类代谢中发挥重要作用。本试验目的是扩增鹅Vanin基因亚型(VNN1)基因的c DNA序列,检测VNN1基因在鹅不同组织中m RNA水平的表达规律。[方法]以太湖鹅(Anser anser)肝脏总RNA为模板,采用RT-PCR和快速扩增c DNA末端(RACE)方法克隆鹅VNN1基因全长c DNA序列,并运用多种生物信息学软件对其进行分析,应用实时荧光定量PCR(q PCR)技术检测VNN1基因在不同组织的表达情况。[结果]序列分析表明:鹅VNN1基因(Gen
关键词：
鹅 VNN1基因 组织表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
柳婷 李敏敏 赖章龙 刘彦斌 刘凯 肖伟 赛清云 田永华 杨立强 阮超岭 杨瑞兰 刘哲 连总强
为了解Dmrta1基因的生物学特性及其在兰州鲇生长发育中的生理作用，以及为加快实现全雄兰州鲇群体生产提供理论依据和技术支撑。采用同源克隆和cDNA末端快速克隆(RACE)技术获得兰州鲇Dmrta1全长cDNA序列，通过qRT-PCR技术检测该基因在兰州鲇胚胎发育、仔稚幼鱼以及3龄雌雄异体和3龄雌雄同体不同组织中的表达特征。结果表明，兰州鲇Dmrta1基因cDNA全长1 415 bp, ORF全长1 158 bp,共编码385个氨基酸，包含20种氨基酸；经SMART预测显示，该基因属于典型的Dmrta亚家族蛋白，具有保守的DM和DMA结构域。同源性比对和系统进化树分析结果表明，兰州鲇与南方鲇的相似性最高(95.47%),且亲缘关系最近。组织表达结果表明，Dmrta1 mRNA在未受精卵粒及胚胎发育各个时期均有表达，而在未受精卵粒中表达最高(P<0.05);在兰州鲇孵化后40 d内不同发育时期中，Dmrta1 mRNA在同期XX个体组织中表达均显著高于XY个体，且在35 d迅速达到峰值(P<0.05);Dmrta1 mRNA在3龄雌雄异体兰州鲇雌性卵巢、鳃和雄性鳃组织中表达显著高于其他组织(P<0.05),且卵巢表达显著高于雌性和雄性鳃，除卵巢表达是精巢的47.07倍外，其他组织中不存在雌雄性别差异；3龄雌雄同体和3龄雌雄异体表达特征一致，都是卵巢表达显著高于鳃和精巢(P<0.05)。以上结果说明，Dmrta1基因属于母源基因，该基因可能在兰州鲇性别分化、卵子形成和鳃弓形成过程中发挥重要作用，在雌雄同体和雌雄异体兰州鲇性腺中的作用一致。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王俊丽 郝光 雒燕婷 刘臻 孔祥会 李学军 聂国兴
为揭示Toll样受体家族基因TLR9在鲫(Carassius auratus L.,缩写为Ca)免疫过程中的作用,本研究利用RT-PCR和RACE技术克隆获得了鲫TLR9(CaTLR9)基因cDNA,并就注射外源性人绒毛膜促性激素(hCG)和不同性腺周期对该基因在鲫肠道表达的影响进行了分析。结果表明,CaTLR9 cDNA全长3 509 bp,包含3 195 bp的开放阅读框(ORF)、72 bp的5′非编码区和242 bp的3′非编码区。ORF编码1 064个氨基酸组成的蛋白质。该蛋白包含19个氨基酸组成的信号肽,15个富含亮氨酸的重复结构域(LRR),1个跨膜区和1个TIR结构域。系统进化...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何翃闳 崔燕 潘阳阳 樊江峰 胡威 张译夫 刘鹏刚 李秦 余四九
【目的】克隆牦牛热休克蛋白27(heat shock proteins27,HSP27)基因,分析其生物学特性,研究正常生理条件下HSP27基因在母牦牛主要生殖器官中的表达差异。【方法】采取卵泡期后期、黄体期后期同侧的卵巢、输卵管和子宫,以及妊娠期早期(胚胎约长2.3cm)妊娠侧的卵巢、输卵管和子宫组织,以其c DNA为模板,利用RT-PCR扩增牦牛HSP27基因,并将纯化的PCR产物克隆到p MDTM18-T Vector载体中进行测序;利用生物信息学软件对HSP27基因的特征进行生物信息学分析,预测功能结构域;采用实时荧光定量RT-q PCR测定繁殖周期母牦牛主要生殖器官中的相对表达量,用...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
邢光东 刘铁铮 刘庆华 傅泽红 王根林
应用RACE-PCR技术,克隆了全长3159 bp鹅催乳素受体基因(gPRLR)cDNA。序列分析表明,cDNA含443 bp5-′UTR、2496 bp编码区(含终止密码子TAA)和220 bp 3-′UTR。比对鸡催乳素受体基因并将前330 bp看作第1外显子,则gPRLR基因可划分为14个外显子。推导的蛋白序列含831个氨基酸,与鸡、鸽及火鸡PRLR的同源性分别为87.7%、85.2%和84.8%,其N末端含24个氨基酸的信号肽,成熟蛋白含807个氨基酸。gPRLR mRNA在成年鹅睾丸、输精管、卵巢、输卵管、肾、大肠、小肠、脾组织中均有表达,其中以肾、睾丸、大肠及小肠中表达最为丰富。
关键词：
鹅 催乳素受体基因 RACE
[期刊] 中国水产科学
[作者]
张金勇 柳学周 史宝 徐永江 李晓妮 常亚青 王滨
运用同源克隆和ＲＡＣＥ方法获得了半滑舌鳎（Ｃｙｎｏｇｌｏｓｓｕｓ ｓＥｍｉｌＡＥｖｉｓ）孕酮受体膜组分１（ＰｇＲｍＣ１）的Ｃ ＤｎＡ全长序列，生物信息学分析显示，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１ Ｃ ＤｎＡ序列全长１３３５ ｂＰ，开放阅读框长５４６ ｂＰ；其编码的蛋白是单次跨膜蛋白，在ｎ端１３～３５位氨基酸残基处有一个跨膜区域。半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１氨基酸序列与青鳉（ｏＲｙｚｉＡｓ ｌＡｔｉＰＥｓ）相似性最高，达到了８２．９％；与青斑河鲀（ｔＥｔＲＡｏＤｏｎ ｎｉｇＲｏｖｉＲｉＤｉｓ）相似度为８１．２％。系统进化分析表明，半滑舌鳎ＰｇＲｍＣ１与鳉形目和鲀形目鱼类ＰｇＲｍＣ１聚为一个分支。采用实时荧光定量Ｒｔ．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
隋娟 张志峰 邵明瑜 胡景杰
vasa基因编码DEAD-box家族成员中一种ATP依赖的RNA解旋酶,在生殖系分化过程中发挥着重要的作用。本研究采用同源克隆和cDNA末端快速扩增技术(RACE),从刺参(Apostichopus japonicus)精巢中克隆得到vasa的全长cDNA序列。该cDNA序列全长2167bp,开放阅读框1593bp,编码530个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白的全部9个保守域。经同源比对和系统进化分析,确定其属于DEAD-box家族的VASA亚家族成员。利用半定量RT-PCR检测,vasa mRNA专一性的在刺参性腺中表达,据此,刺参vasa基因有望用于其生殖系起源和分化的研究。
[期刊] 水产学报
[作者]
刘淼 温海深 何峰 李吉方
为研究黄颡鱼促卵泡激素受体(FSHR)基因的克隆以及该基因在卵巢发育周期中的表达情况,实验首先采用SmartTMRace技术,获得了黄颡鱼促卵泡激素受体基因cDNA全长序列,该基因全长2 340 bp,编码661aa,具有G蛋白偶联受体超家族(G protein-coupled receptor,GPCR)的7个跨膜螺旋区(transmembrane domain)。经分析发现,得到的FSHR基因序列具有9个富含亮氨酸的重复性序列(LRRs);5个潜在的N-端糖基化位点;蛋白激酶C(proteinkinase C,PKC)磷酸化位点(403Y)位于第一个包外环,C-末端(C-terminal ...
[期刊] 水产学报
[作者]
金国雄 温海深 柳学周 何峰 李吉方 陈彩芳 史宝 张葭人 陈晓燕 史丹 杨艳平
细胞色素P450芳香化酶(P450arom)作为P450细胞色素酶超家族中的一员,是性类固醇生成途径中的末端酶,能够将雄激素转化为雌激素。在大多数脊椎动物中,P450arom由CYP19单基因编码。但是在鱼类中存在两种P450芳香化酶,分为性腺型芳香化酶(P450aromA)和脑型芳香化酶(P450aromB),它们由不同的基因(CYP19a和CYP19b)编码,分布在不同的组织。通过简并引物扩增及RACE cDNA扩增克隆,在国内外首次获得全长为2167bp的条斑星鲽CYP19a cDNA序列,并将推测的氨基酸序列与其它物种P450arom氨基酸序列进行多重比较,发现存在跨膜螺旋区、I-螺旋...
[期刊] 水产学报
[作者]
钟晨辉 宦忠艳 唐隆晨 陆振 林琪 严兴洪
为探究坛紫菜雌配子体单性生殖过程的细胞二倍化机制。本研究基于坛紫菜雌性配子体的转录组信息，克隆和分析了坛紫菜的有丝分裂阻滞缺陷蛋白2（PhMAD2）基因(Ph-mad2)，同时对其在坛紫菜单性生殖发生过程中处于不同发育时期的细胞中的表达特征进行了初步研究。结果显示，坛紫菜Ph-mad2基因的cDNA的完整开放阅读框为672 bp，编码223个氨基酸，分子量为23.8 ku。从氨基酸序列比对结果可知，坛紫菜PhMAD2蛋白中所具有的典型的HORMA结构域和保守的丝氨酸和苏氨酸磷酸化位点，均与团藻和莱茵衣藻MAD2蛋白相同。系统发育分析表明，坛紫菜与藻状菌纲的异丝水霉和寄生水霉的亲缘关系最近。实时荧光定量PCR检测显示，与可进行正常有丝分裂的营养细胞相比，在坛紫菜单性生殖过程中发生细胞二倍化的生殖细胞和单性孢子时期，Ph-mad2基因的表达量显著下降；但是，在随后可进行正常有丝分裂的单性孢子萌发体细胞和处于营养生长期的单性孢子体细胞中则表达上调。这一结果暗示Ph-mad2基因的表达下调可能阻碍了坛紫菜单性生殖初期单倍体细胞进行有丝分裂时纺锤体组装检验点的形成，在一定程度上致使它们发生了染色体加倍。本研究结果为进一步阐明坛紫菜单性生殖过程的染色体自然加倍机制提供了一定的基础。
[期刊] 华北农学报
[作者]
欧阳清渊 梁金敏 王郁石 甘翔 胡深强 王继文
旨在根据GenBank公布的人、原鸡、绿头鸭等物种HCRT和HCRTR2基因序列设计特异性引物克隆扩增鹅HCRT和HCRTR2基因编码区序列,并进行生物信息学分析;同时应用RT-qPCR技术检测HCRT和HCRTR2 mRNA在四川白鹅19个组织中的表达情况。成功获得鹅HCRT和HCRTR2基因完整编码区序列,分别为456,1 506 bp,各自编码151,501个氨基酸。其中,HCRT基因编码的前体食欲素蛋白水解后可产生OXA和OXB 2种多肽;序列分析表明,鹅OXA和OXB分别为含34,28个氨基酸的残留肽。序列比对结果显示,鹅OXA、OXB和HCRTR2氨基酸序列在近源物种间呈高度保守,提示OXA、OXB和HCRTR2可能在物种的进化中扮演着重要的角色;但各物种间食欲素蛋白的信号肽保守性较低,暗示其信号肽序列可能对于各物种的功能特性具有重要的意义。进化树分析表明,HCRT和HCRTR2两者进化较为相似,其中,鹅与鸡的亲缘关系最近,而与斑马鱼的亲缘关系最远。RT-qPCR结果显示,鹅HCRT和HCRTR2基因在下丘脑中的表达量均达到最高,且在其他组织中也有不同程度的表达,推测食欲素系统可能通过下丘脑-垂体-性腺轴(HPG)参与动物生殖机能的调节。为进一步研究HCRT和HCRTR2基因在鹅繁殖活动中的作用奠定了基础。
[期刊] 林业科学
[作者]
罗群凤 胥猛 冯源恒 徐嘉娟 李火根
【目的】鹅掌楸属花色种间差异较大,是研究木本植物花色形成与调控机制的较理想材料。查尔酮合成酶基因(CHS)是黄酮类化合物生物合成途径中的关键基因,与植物花色形成密切相关,同时又是研究科以下系统发育的理想基因,种间进化差异较大,因此CHS基因用于研究鹅掌楸属花色差异形成机制有较强的可行性。本研究克隆北美鹅掌楸的查尔酮合成酶基因,并对其进行生物信息学及组织表达分析,以期为鹅掌楸属树种花色的形成和调控机制研究提供参考。【方法】以北美鹅掌楸的花芽为材料,采用同源克隆和RACE技术克隆查尔酮合成酶基因(Lt CHS),并进一步扩增该基因的基因组序列。对该基因进行生物信息学分析。采用半定量RT-PCR方法...
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