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[期刊] 华北农学报
[作者]
朱新产 邵艳红 朱峰伟 杨丽金
为探究Ig G/Ig M蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理,对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及Ig G/Ig M蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以GPVYZ感染雏鹅,采用(NH4)2SO4分级分离鹅血清Ig,将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化出鹅血清Ig M/G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示,初级沉淀鹅血清Ig,在非还原条件下,感染组(RD)缺失6个蛋白主带(128,114,69,59,55,48 k Da);而在还原条件下,RD组缺失7个蛋白主带(139,128,119,1...
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱新产 邵艳红 朱峰伟 杨丽金
为探究Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理，对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ｉｇ进行了分级分离、纯化及Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白质结构和功能等生化－分子生物学分析。以ｇＰＶＹＺ感染雏鹅，采用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级分离鹅血清Ｉｇ，将ＳｅＰＨａｄｅｘ ｇ－１００凝胶柱在ＵｔｒＯ－ｇｅｌ ａＣａ２２凝胶柱色谱工作站上串联，分步聚集纯化出鹅血清Ｉｇ Ｍ／ｇ进行ＳｄＳ－Ｐａｇｅ和生化分析。结果显示，初级沉淀鹅血清Ｉｇ，在非还原条件下，感染组（ｒｄ）缺失６个蛋白主带（１２８，１１４，６９，５９，５５，４８ ｋ ｄａ）；而在还原条件下，ｒｄ组缺失７个蛋白主带（１３９，１２８，１１９，１．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
杨晓宇 李娜 杨华 陈锦屏 张富新
研究了酸、碱、胃蛋白酶、胰蛋白酶对羊初乳中免疫球蛋白IgG稳定性的影响。结果表明,IgG在pH 值为5．0～10．0时十分稳定,在pH值低于5．0的条件下,随pH值降低,变性率急剧上升;正交试验结果表明,胃蛋白酶对IgG的影响因素为pH值>作用时间>酶液浓度;最佳条件为pH 4．0,作用时间1 h,胃蛋白酶的质量浓度为0．5 mg／mL;胰蛋白酶对IgG活性的影响相对较小。
关键词：
羊初乳 免疫球蛋白 稳定性
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
邵蓬 战文斌 绳秀珍 邢婧
用患淋巴囊肿病牙鲆体表肿瘤纯化的淋巴囊肿病毒对健康牙鲆进行人工感染,应用抗牙鲆免疫球蛋白单克隆抗体通过间接酶联免疫法(ELISA)检测感染之后的牙鲆血清总抗体水平和抗LCDV特异性抗体水平的变化规律。结果表明,感染7d后,牙鲆血清中特异性抗体和总抗体水平都显著升高。抗LCDV特异性抗体水平在405nm处的OD值从对照的0.129上升至0.238;随着感染时间延长抗体水平持续升高(第14天0.247,第21天0.410),在第28天达到最高值0.436,然后开始缓慢降低(第35天0.385,第98天0.357);总抗体水平在405nm处的OD值从对照的0.135上升至0.250;随着感染时间延长...
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
陈晓月 梁华 刘明春 王建民 于立辉 范宏发 赵玉军
根据GenBank登陆的鹅细小病毒B株全基因组的核苷酸序列,设计合成一对引物,用PCR方法对GPV LN-1/06株的主要结构蛋白基因进行克隆,并对克隆的片段进行序列测定,用生物信息学软件进行序列分析。结果表明:所扩增的GPV LN-1/06株的基因长度为1605bp,包括VP3完整的开放阅读框,共编码534个氨基酸。与登录的20株国内和国外的GPV的VP3基因序列进行同源性分析表明,GPV LN-1/06株与其他20株VP3基因的核苷酸同源性较高,从93%至99%,说明GPV的VP3基因较为保守。系统进化树分析表明GPV-LN01/06病毒株与HG5/82为一组,具有较近的亲缘关系。本试验首...
关键词：
鹅细小病毒 结构蛋白基因 克隆 序列分析
[期刊] 华北农学报
[作者]
于天飞 谢鹏宇 孙婉姝 李静 尹海畅 黎明 于志丹
为了在大肠杆菌中表达抗鹅细小病毒(GPV) NS1蛋白单克隆抗体轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)基因,并测定其与NS1蛋白结合活性。对抗GPV NS1蛋白单克隆抗体VL、VH基因核苷酸序列依据大肠杆菌偏爱密码子进行优化,人工合成获得了含有可变区基因的重组质粒pUC57-VL和pUC57-VH。然后用Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切pUC57-VL、pUC57-VH,回收340 bp的VL基因和370 bp的VH基因。目的基因通过Bam HⅠ/XhoⅠ多克隆位点分别插入至原核表达载体pET-32a,获得重组质粒pET-VL和pET-VH。重组质粒经Bam HⅠ单酶切和Bam HⅠ/XhoⅠ双酶切及测序鉴定。重组质粒分别转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导,获得了重组蛋白TRX-VL和TRX-VH的表达,分子量分别为30.3,31.4 ku。纯化后的重组蛋白能与His标签单克隆抗体发生特异性结合,鉴定结果表明,获得的纯化蛋白为目的蛋白。间接ELISA分析表明,0.4μg的TRX-VH可与25 ng的GST-NS1蛋白特异性结合而0.4μg的TRX-VL不能与各包被量的GST-NS1蛋白特异性结合,TRX-VH与GST-NS1蛋白的特异性结合可被1∶200稀释的GPV感染鹅血清完全阻断。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
刘伟 程晓霞 陈少莺
应用交叉免疫印迹方法,分析比较了番鸭源小鹅瘟病毒(MDGPV)和番鸭细小病毒(MDPV)结构蛋白抗原性的差异.结果表明:MDGPV和MDPV纯化病毒在SDS-PAGE分析中均呈现3种结构蛋白,分子质量分别为81、65和55 ku;在免疫印迹试验中,MDGPV和MDPV的VP1、VP2和VP3三种结构蛋白均可被同源抗血清识别,而异源抗血清均不能识别VP1蛋白;免疫番鸭血清和感染耐过番鸭血清识别的条带无明显区别.可见,MDGPV和MDPV的抗原性差异主要体现在VP1蛋白上.
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李波 郑树城 曾伟伟 王庆 李莹莹 尹纪元 王雅慧 吕月凤 石存斌 赵志英 姜志勇 王英英
罗非鱼湖病毒TiLV是一种新发RNA病毒，对罗非鱼养殖业造成巨大威胁。为明确罗非鱼(Oreochromis niloticus)多聚免疫球蛋白受体基因(OnpIgR)的序列和结构特征及其对TiLV增殖的影响，本研究首先对PCR扩增获得的OnpIgR完整的ORF,进行了结构域预测、三维结构预测以及遗传进化树分析，然后采用荧光定量PCR方法分析了罗非鱼感染TiLV后该基因在各组织的表达模式，最后构建了OnpIgR过表达质粒，初步研究了OnpIgR对TiLV增殖的影响。结果表明，PCR扩增获得了完整的OnpIgR ORF序列，长度为1 023 bp,该ORF序列具有一个信号肽，两个Ig样结构域，同源建模结果显示，pIgR蛋白整体呈扭曲的“L”型，主要由反平行β片层和无规卷曲组成；系统发育树显示OnpIgR与大口黑鲈(Micropterus salmoides)以及斜带石斑鱼(Epinephelu coioides)的pIgR聚为一支；感染TiLV后，罗非鱼皮肤、脾脏以及肾脏中pIgR均呈现先上升后下降的趋势；成功构建了pEGFP-OnpIgR并在TiB细胞中过表达OnpIgR后感染TiLV,发现TiLV的S8和S10节段mRNA相对表达量显著增多，TiLV拷贝数也显著增多，初步表明OnpIgR对TiLV的增殖具有促进作用。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨桂文 安利国 温武军 王长法
以正常生活状态下的非免疫鲤为材料，采用盐析、高速离心、柱层析等方法，从鲤胆汁与血清中分离提取了免疫球蛋白，并对它们的理化性质和免疫原性进行了比较研究。结果表明：鲤胆汁中存在的免疫球蛋白的某些理化性质同血清中免疫球蛋白的相似，并且二者具有相同的免疫原性。由此推断，鲤胆汁中免疫球蛋白的来源可能与血清中免疫球蛋白具有一定的同源性。
关键词：
鲤,免疫球蛋白,血清,胆汁
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨倩 毛卫华 汪爱芬
通过饮水、滴鼻和肌肉注射用鸡新城疫弱毒苗免疫雏鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白－辣根过氧化酶（ＳＰＡ－ＨＲＰ）和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组化染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）和呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）中ＳＩｇＡ细胞的生成和分布。结果表明：滴鼻和饮水免疫组雏鸡ＧＡＬＴ和ＲＡＬＴ中产生ＳＩｇＡ细胞较早、较多，并于首免后２４ｄ和３０ｄ达到最高峰；肌肉注射组雏鸡ＳＩｇＡ细胞在各相应部位仅零星存在，其数量在整个免疫期间变化不显著。作者还对３种免疫途径与粘膜免疫过程中ＳＩｇＡ细胞的产生、分布、数量变化及其增长与消退规律的影响进行了讨论
[期刊] 水产学报
[作者]
肖凡书 许巧情 王欣欣 聂品
在草鱼中新发现的两种免疫球蛋白重链的cDNA和基因组序列,其中的一种IgZ命名为IgZ-2,以区别于已报道的IgZ,另一种只有两个恒定区,一个恒定区与IgM相似而另一个与IgZ相似,这一特征与已报道的鲤的IgM-IgZ相似,故同样称为IgM-IgZ。分泌型IgZ-2的cDNA序列包含1889bp,编码539个氨基酸,其3'编码区包含267bp,但缺乏5'非编码区及部分可变区序列。分泌型IgM-IgZ的cDNA全长为1316bp,编码361个氨基酸,其5'非编码区包含3bp,3'非编码区包含227bp。膜结合型IgM-IgZ由两个膜外显子与CH2中的一个剪切位点剪切而成。氨基酸序列比对结果显示I...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周斌 党占国 刘珂 陈溥言
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的E0、E2和E012基因并进行了克隆与鉴定。构建了真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假型病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假型病毒上清液,将假型病毒上清液超速离心后用抗CSFV的多抗进行Western-blot检测。结果证明E012蛋白能够在假型病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面;用其感染多种宿主细胞,48h后检测发现在猪肾细胞(SK6,PK15)和猪睾丸细胞(ST)上,标记基因...
[期刊] 水产学报
[作者]
肖凡书 聂品
归纳了脊椎动物中报道的所有的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)的种类,重点阐述了鱼类免疫球蛋白重链(heavy chain,H)基因及其基因座的研究进展。硬骨鱼类中目前已发现有IgM、IgD、IgZ/IgT以及一个嵌合体IgM-IgZ,软骨鱼类中目前只报道了3种免疫球蛋白基因,即IgM、IgNAR和IgW。已报道的硬骨鱼类IgH基因座并非都是以传统的"易位子"排列方式进行排列,一般以(VH)n-(D)n-(JH)n-(Cζ)-(D)n-(JH)n-(Cμ)-(Cδ)的形式排列,不同硬骨鱼类的IgH基因座的结构特点、基因座中重链基因的数目以及基因座的拷贝数都存在一定差异。软骨鱼类中...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
罗永康 董翠霞 何刚强 刘伟
为了使猪血免疫球蛋白在各类食品中得到较好的应用 ,对猪血免疫球蛋白 (PIgG)的热稳定性及热变性动力学进行了分析研究。结果表明 ,PIgG在 6 0℃以下很稳定 ,6 0～ 6 5℃比较稳定 ,大于 70℃变性明显加快 ,超高温杀菌 (12 0℃ ,4s)条件下 ,PIgG几乎失活 ;其热动力学反应为 1 2级 ;在 6 0 ,6 5 ,70 ,75 ,80 ,85和 90℃ ,PIgG热变性的D值分别为 33 333× 10 3 ,14 2 86× 10 3 ,3 333× 10 3 ,0 4 76× 10 3 ,0 2 2 2× 10 3 ,0 16 9× 10 3 和 0 0...
关键词：
猪血 免疫球蛋白 热变性 动力学
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈静廷 卜登攀 马露 杨晋辉 李发第
旨在研究不同物种泌乳奶牛牛乳中活性物质免疫球蛋白和乳铁蛋白绝对含量的特性。采用双抗夹心ELISA法对牦牛乳、水牛乳和荷斯坦奶牛乳乳样中主要免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)和乳铁蛋白(Lf)含量进行了定量测定并做出了相关性分析。结果显示,牦牛乳、水牛乳和荷斯坦奶牛乳乳样中免疫球蛋白和乳铁蛋白活性质量浓度与吸光值存在良好的线性关系,各标准曲线方程的R均大于0.99。不同物种牛乳中IgA、IgG、IgM和Lf的绝对含量差异显著(P<0.05)。同一品种牛乳中免疫球蛋白IgA、IgG、IgM和Lf的绝对含量显示出不同的个体性差异。除荷斯坦奶牛乳乳样中IgA与IgM呈现较低程度的负相关外,牛乳中Ig...
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