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[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
袁橙 郭长明 张步彩 左伟勇 唐晨晨 蔺辉星
从江苏省某水禽场的疑似感染致病性大肠埃希菌的病鸭中分离获得鸭致病性大肠埃希菌野毒株;通过玻板凝集和试管凝集试验确定其血清型,采用PCR进行分群分析和毒力基因检测;扩增φX_(174)噬菌体裂解蛋白E的基因序列,构建温控型表达质粒pBV221–E,并将其电击转化入分离毒株,升温诱导E蛋白表达制备菌蜕;通过测量菌液A600 nm值和在透射电镜下观察细菌形态,评估菌蜕构建效果;用该菌蜕进行灭活处理和无菌检测后,对雏鸭进行免疫,用间接ELISA法检测血清IgG水平。结果表明:该大肠埃希菌的血清型为O24,属于B1群,具有毒力基因fimC、csgA和iroN;获得的鸭致病性大肠埃希菌菌蜕裂解率为99.96%;经透射电镜观察发现,制备获得的菌蜕表面有明显孔道,细胞质从孔道溢出,细胞膜皱缩变形;抗体水平检测结果显示,二免后菌蜕免疫组雏鸭血清IgG水平显著提高。可见,通过将pBV221–E重组质粒转化至鸭致病性大肠埃希菌分离株,调节细菌培养温度诱导E蛋白表达,能制备鸭致病性大肠埃希菌B1群O24型野毒株菌蜕。该菌蜕可诱发机体产生体液免疫。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
邓小红 梁静真 黎姗梅 吕小丽 韦慕兰 韩书煜 蒙兰丽 黄钧 蒋经运
【目的】对广西全州县飞机坪鱼种场患病禾花鲤进行病原菌的分离鉴定,并对其致病性、耐药特性及6种毒力基因进行检测,为细菌引起的禾花鲤疾病及防控技术研究提供理论参考。【方法】从患病禾花鲤的肝脏、心脏和肾脏等部位取样分离细菌,人工感染确定菌株的致病性,API生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合进行细菌鉴定,细菌的耐药特性试验为K-B纸片扩散法,毒力基因以PCR扩增法检测。【结果】从患病禾花鲤中分离到2株致病力很强的病原菌株TH1和TH3,对健康禾花鲤的致死率均为100.00%;经生化和分子鉴定,2株分离菌株均
关键词：
禾花鲤 嗜水气单胞菌 耐药性 毒力基因
[期刊] 西南农业学报
[作者]
元振杰 王燕 夏晨阳 陈晓英 刘建枝 马勋
为了解HPI和LEE毒力岛在新疆致犊牛腹泻大肠杆菌中的流行情况,自2010年4月至8月,对新疆塔城市某集约化奶牛场10日龄内5头腹泻病死犊牛及7头严重腹泻犊牛进行病原分离鉴定,12头犊牛病料样品均分离到大肠杆菌。分离菌株进行小鼠腹腔注射均能造成小鼠发病,LD50从1.191×108~1.888×107。采用多重PCR检测LEE毒力岛的ler和eaeA基因和HPI毒力岛的irp2和fyuA基因。结果在分离的12株牛源大肠杆菌中,11株扩增出irp2+fyuA基因片段,1株扩增出fyuA+eaeA基因片段,而ler基因片段扩增均为阴性。结论:引起犊牛腹泻的致病性大肠杆菌中携带HPI毒力岛的情况非常...
关键词：
犊牛腹泻 大肠杆菌 毒力 毒力岛
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐引弟 宋念华 胡智斌 马力 张厚芝 李德学
从湖北某猪场发生典型黄痢的新生仔猪无菌采集粪便 ,上清接种小白鼠 ,取粪便和死亡小白鼠的心血接种麦康凯琼脂培养基 ,挑红色菌落 ,革兰氏染色镜检为革兰氏阴性杆菌。用法国BioMerieuxATB全自动细菌鉴定及药敏仪ID 32E肠杆菌鉴定条鉴定 ,得到大肠埃希菌的极好鉴定结果。不同剂量接种小白鼠 ,证明其毒力。用 16 3种O抗原标准血清玻板凝集试验定型为O1 0 1 型。用ATBVET药敏试条进行药敏试验结果显示对 7种抗生素敏感。
关键词：
新生仔猪 大肠埃希菌 分离 鉴定
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
索朗斯珠 曾群辉 查果 刘慧文 夏业才
从自然病死的西藏牦牛的心、肝、脾、肾、淋巴结与血液病料中分离到128株疑似大肠杆菌,鉴定结果表明,有32株为大肠埃希氏菌,其中的10株菌有致病性;在这10株中3株毒力较强,为产毒性大肠埃希氏菌,致病率达90%以上,其余7株中等毒力,致病率达50%。首次鉴定出牦牛大肠杆菌血清型有18种:O142,O148,O158,O26,O43,O159,O39,O108,O91,O21,O14,O13,O36,O88,O24,O18,O68和O25。3株毒力较强菌株的血清型鉴定结果表明,1号菌株为O148,O142,O158混合型;2号菌株为O26,O148,O142,O158混合型;30号菌株为O26,O...
[期刊] 水产学报
[作者]
龙苏 韩书煜 牛志伟 梁静真 胡大胜 黄钧 李鸿骥 刘齐 苏江华
为探讨广西南宁市、浦北县和玉林市暴发性死亡胡子鲶的病原菌及其所携带６种毒力基因对其致病力的影响，用常规方法从病鱼的心脏、肝脏等部位分离细菌，人工感染实验确定病原菌的致病性，以ＡＰＩ ２０ＮＥ生化鉴定和１６Ｓ ｒ ｒＮＡ分子鉴定相结合的方法对病原菌进行鉴定，采用ＰＣｒ扩增法检测病原菌的６种毒力基因携带情况。结果显示，从患病鱼中共分离到５株病原菌，其中嗜水气单胞菌３株，温和气单胞菌２株。３株嗜水气单胞菌与标准菌株ＡＥｒｏｍｏＮＡＳ ｈｙｄｒｏＰｈＩｌＡ ＡＴＣＣ ７９６６（ＣＰ０００４６２）的亲缘关系最近，相似性均为９９．８％，２株温和气单胞菌与标准菌株ＡＥｒｏｍｏＮＡＳ ＳｏｂｒＩＡ Ｎｏ．１０．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
王巧煌 林楠 元丽花 季静 林丹
为探明2021年3月福建某水库养殖大口黑鲈疾病暴发的原因，实验从患病大口黑鲈肝脏、肾脏、脾脏中分离优势菌，通过人工感染实验确定病原菌，并综合16S rDNA基因序列分析、生理生化和质谱特征等技术对该病原菌进行种属鉴定，同时，进行毒力基因检测、药物敏感性实验以及组织病理学观察。结果显示，从病鱼脾脏中分离获得1株优势菌并鉴定为鲁氏耶尔森氏菌；该菌株对大口黑鲈的半致死剂量为3.8×10~5 CFU/尾；该菌株携带yrP1、yhl A、yhl B等毒力基因，对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟甲喹、硫酸新霉素、氟苯尼考等5种药物相对敏感。组织病理学观察发现，鲁氏耶尔森氏菌的感染造成大口黑鲈肝脏、肾脏、脾脏不同程度的损伤，表现为明显的变性、坏死及炎症细胞的浸润等。本研究首次报道了鲁氏耶尔森氏菌对养殖大口黑鲈的致病性，可为养殖大口黑鲈鲁氏耶尔森氏菌病的诊断和药物防治提供参考依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
王巧煌 林楠 元丽花 季静 林丹
为探明2021年3月福建某水库养殖加州鲈疾病暴发的原因，实验从患病加州鲈肝脏、肾脏、脾脏中分离优势菌，通过人工感染实验确定病原菌，并综合16S rDNA基因序列分析、生理生化和质谱特征等技术对该病原菌进行种属鉴定，同时，进行毒力基因检测、药物敏感性实验以及组织病理学观察。结果显示，从病鱼脾脏中分离获得1株优势菌并鉴定为鲁氏耶尔森菌；该菌株对加州鲈的半致死剂量为3.8×10~(5) CFU/尾；该菌株携带yrP1、yhlA、yhlB等毒力基因，对恩诺沙星、盐酸多西环素、氟甲喹、硫酸新霉素、氟苯尼考等5种药物相对敏感。组织病理学观察发现，鲁氏耶尔森菌的感染造成加州鲈肝脏、肾脏、脾脏不同程度的损伤，表现为明显的变性、坏死及炎症细胞的浸润等。本研究首次报道了鲁氏耶尔森菌对养殖加州鲈的致病性，可为养殖加州鲈鲁氏耶尔森菌病的诊断和药物防治提供参考依据。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王秀梅 蒋红霞 廖晓萍 张万江 朱恒乾 张悦 刘雅红
【目的】探讨猪大肠杆菌病分离的E.coli的优势血清型与毒力基因和耐药性的相关性。【方法】采用玻片凝集法测定了猪大肠杆菌病有关的血清型分布,PCR方法调查7种毒力相关基因,用微量稀释法测定了所有菌株对18种抗菌药的敏感性。【结果】超过一半的菌株含有astA,Stx2e和eaeA基因,且毒力基因组合Stx2e+astA和Stx2e+eaeA较为流行。定型菌株53株,分别属于15个不同的血清型,其中O8和O64为主要流行的血清型。O8型菌株中,所有均携带astA基因,多数耐四环素、环丙沙星、恩诺沙星、氯霉素和磺胺甲噁唑,但对安普霉素,阿米卡星和多黏菌素E敏感;而O64型菌株中,多数携带astA和S...
关键词：
血清型 毒力基因 耐药性 大肠杆菌
[期刊] 西南农业学报
[作者]
黄艳华 黄钧 胡大胜 施金谷 彭民毅 彭亚
以常规方法从患典型红底板病黄沙鳖的心脏、肝脏和腹水等处分离到5株病原菌,API 20NE、16S rRNA基因序列分析进行病原菌鉴定和确定其系统发育地位,PCR检测病原菌的6种毒力基因。结果表明,5株病原菌均为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila),与Aeromonas hydrophila QDC01菌株的亲源关系最近。6种毒力基因的阳性率,hly、Aer和Act为100%,ahal、Alt和ahp为80%;毒力基因型共3种,在5株菌株中的分布情况为hly+Aer+Alt+Act+ahal+ahp+3株,hly+Aer+Alt-Act+ahal+ahp-1株,hly+Aer...
关键词：
黄沙鳖 红底板病 嗜水气单胞菌 毒力基因
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王颢锦 汤芳 诸葛祥凯 胡林 陈玲 李亚芯 李德志 戴建君
[目的]本文旨在研究禽致病性大肠杆菌auf基因的功能。[方法]利用Red同源重组技术敲除auf基因,构建DE205BΔauf缺失菌株,并分析缺失菌株和野生菌株的生物学特性及致病力差异。[结果]生物学特性试验表明:与野生菌株相比,缺失菌株的生长特性未发生明显改变,但对酸性(乙酸,pH 4.0和5.0,20 min)、碱性(Tris-HCl,pH 10.0,30 min)和高渗环境(2.5 mol·L-1NaCl,1 h)的耐受能力极显著降低(P<0.001),其相对存活率分别降低86.7%、77.3%、59.0%和98.3%;抗血清杀菌能力也显著下降,在100%、50%及25%稀释度的血清中极显...
关键词：
禽致病性大肠杆菌 菌毛 auf基因 黏附
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
坤清芳 耿毅 余泽辉 李亚军 牟维豪 谢航
从四川地区规模化家兔养殖场分离鉴定出97株大肠埃希菌(Escherichiacoli),采用Kirby–Bauer纸片法进行耐药性测定,同时采用PCR方法对相关耐药基因进行检测。结果显示:分离菌株对四环素类药物表现高度耐药,耐药率高达90.72%以上,对磺胺类药物的耐药率达72.16%,对氨基糖苷类药物的耐药率31.96%~58.76%,对多肽类的耐药率较低,为14.43%;耐药基因tet A、tet B、tet C、arm A、rmt B和flo R的检出率分别为61.86%、84.54%、16.49%、4.12%、3.09%和8.25%,未检出tet D、tet E、tet M、tet O、tet L、tet K、rmt A、rmt C、rmt D、rmt E、npm A和cfr基因。
关键词：
家兔 大肠埃希菌 耐药性 耐药基因 四川
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王曼 祁克宗 涂健 周秀红 刘红梅 王惠珂 尹磊
[目的]建立检测禽致病性大肠杆菌phoP蛋白调控宿主菌DNA的方法,为进一步研究phoP蛋白的调控因子奠定基础。[方法]将pho P基因克隆至p MD19-T载体,序列鉴定正确后转至表达载体pET32a,将重组质粒pET32a-phoP导入感受态细菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析蛋白的大小,用Ni-NTA亲和层析柱纯化重组phoP蛋白。通过生物信息学分析法对phoP蛋白与DNA的结合基序进行预测,利用凝胶迁移试验(EMSA)鉴定该蛋白的结合活性。[结果]酶切及测序结果表明原核表达质粒构建正确;SDS-PAGE结果表明目的基因得到表达;重组目的蛋白相对分子质量约为42...
[期刊] 水产学报
[作者]
韩书煜 梁静真 覃志彪 黄艳华 韦慕兰 蒙兰丽 黄维 胡大胜 黄钧
查明广西南宁、贵港和桂平养殖山瑞鳖细菌性败血症的病原菌及其6种毒力基因的携带情况,为有效防控山瑞鳖细菌性败血症提供参考。本研究以常规方法从患病山瑞鳖的心脏和肝脏取样、分离细菌,人工感染方法确定分离菌株的致病性,细菌鉴定采用API 20NE生化鉴定和16S rRNA分子鉴定相结合的方法进行,PCR扩增法对菌株的溶血素基因(hemolysin gene,hly)、气溶素基因(aerolysin gene,Aer)、细胞兴奋性肠毒素基因(cytotonic enterotoxin gene,Alt)、细胞毒性肠
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