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[期刊] 中国农业科学
[作者]
齐雪峰 程安春 汪铭书 杨晓燕 贾仁勇 陈孝跃
【目的】探讨鸭瘟弱毒苗诱导鸭局部黏膜和系统免疫中抗体发生的规律。【方法】将DPV弱毒苗Cha株经皮下、口服和滴鼻途径免疫20日龄樱桃谷鸭后60d内定时随机剖杀5只鸭,采集血清、气管和消化道(食道、十二指肠、空肠和直肠)分泌液,应用间接ELISA检测抗DPV的IgA、IgM和IgG抗体滴度(以lg表示)。【结果】所有免疫鸭检测样品中均可检测到DPV特异性IgG、IgM和IgA抗体。血清中抗体滴度由高到低均为IgG、IgM和IgA,其中IgM检出时间最早,IgG存留时间最长。皮下免疫DPV弱毒苗可更早诱导鸭血清中生成特异性IgG,且抗体滴度最高;气管和消化道分泌液中抗体滴度由高到低均为IgA、Ig...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
蒋金凤 程安春 汪铭书 路立婷 朱德康 贾仁勇 陈孝跃
【目的】探讨壳聚糖对鸭肠炎病毒(duck enteritis virus,DEV)gC基因疫苗免疫反应的影响。【方法】应用壳聚糖作为DEV gC基因疫苗(pcDNA-DEV-gC)递送载体,采用肌肉注射和口服单次免疫Balb/c小鼠50μg剂量基因疫苗,并以肌注不同剂量裸质粒组、弱毒组和生理盐水组作为对照,分别检测不同疫苗免疫后的细胞、体液和黏膜免疫水平。【结果】肌注壳聚糖疫苗组诱导小鼠产生较肌注裸质粒50μg组和口服壳聚糖疫苗组高的细胞和体液免疫反应,且产生与弱毒疫苗相似的细胞免疫应答,但弱毒疫苗诱导体液免疫的能力更强,仅口服壳聚糖疫苗组产生粘膜免疫。【结论】上述研究结果表明壳聚糖具有一定的...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
朱德康 黎敏 车茜 程安春 汪铭书 陈孝跃
【目的】比较小鹅瘟病毒(GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘胜兵 杨倩 姜平
用猪繁殖与呼吸综合征 (PRRS) 弱毒苗分别通过生殖道黏膜免疫和肌肉注射免疫母猪 (各 4头 ), 另 4头经生殖道接种生理盐水作为对照, 运用免疫组化技术显示子宫局部IgA分泌细胞和IgG分泌细胞的分布。结果表明, 对照组子宫中IgA分泌细胞和IgG分泌细胞主要分布于黏膜固有层浅层, 子宫颈中的IgA分泌细胞数量多于子宫角, 而子宫角中IgG分泌细胞数量多于子宫颈。生殖道免疫后, 与对照组相比, 子宫角IgA分泌细胞数量极显著增多 (P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈锴 姚华伟 王长江 徐璐 范学政 赵启祖 邹兴启 朱元源 赵燕 杨光友 王琴
【目的】建立一种快速、敏感、特异的检测猪瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)的荧光定量PCR方法(FQ-PCR),为猪瘟兔化弱毒疫苗的效力检验提供一替代方法。【方法】在猪瘟兔化弱毒疫苗基因组3′非编码区设计一对针对猪瘟兔化弱毒株的特异性引物和一条MGB探针,并进行反应体系及反应条件优化,以及特异性、灵敏度、稳定性及符合性试验。将此方法用于部分批次疫苗厂疫苗半成品的定量检验,与兔热反应进行比较,寻求两方法的相关性。【结果】试验结果证实,CT值与模板之间呈现良好的相关性,相关系数为0.9998,扩增效率为101.14%;该方法仅扩增HCLV,不扩增HCLV以外的其它病原,显示良好的特异性;具有较高的灵敏度,...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
仇华吉 童光志 沈荣显
猪瘟是一种严重危害养猪业的毁灭性传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(即C株),随后创制了不同的疫苗制造工艺,如细胞培养苗、乳兔组织苗和牛体反应组织苗等。C株是一株非常安全的弱毒疫苗,对各种年龄和品种的猪都没有副作用,并且有良好的免疫效力,它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答,对不同基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护,但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。目前已经完成了包括C株及其亲本株在内的几十株猪瘟病毒的全基因组序列测定和注释,建立了猪瘟病毒的反向遗传操作系统,初步解析了猪瘟病毒主要基因的结构与功能,并...
关键词：
猪瘟 猪瘟病毒 猪瘟兔化弱毒疫苗
[期刊] 中国农业科学
[作者]
韩春华 赵际成 段会娟 林健 杨志远 谢佳 潘洁 王小蕾 刘立新 刘月焕
【目的】评价鸭坦布苏病毒病灭活疫苗母源抗体的效力，制定疫苗的最小免疫日龄。【方法】随机采集鸭坦布苏病毒病灭活疫苗（ＨＢ株）二免后１３５日樱桃谷种鸭的种蛋孵化，随机取５、７、１０和１５日龄免疫种鸭后裔雏鸭１０只和相对应日龄非免疫种鸭后裔雏鸭５只，采血，分离血清，测定母源抗体，并以０．１ｍ Ｌ／羽（含１００ＤＩＤ＿（５０））的剂量经腿部肌肉攻毒。观察雏鸭攻毒后的临床表现（采食量、粪便、精神和死亡情况），观察至攻毒后１０Ｄ。攻毒后２Ｄ经颈静脉采血，分离血清进行病毒分离。每份血清接种５枚６日龄ＳＰＦ鸡胚，０．１ｍ Ｌ／枚，３７℃孵化，２４Ｈ以内死亡鸡胚视为非特异死亡，孵化至１６８Ｈ。只要有１枚及以上鸡．．．
关键词：
鸭 坦布苏病毒 母源抗体
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李银聚 程相朝 吴庭才 张春杰
应用RT-PCR方法从鸡新城疫 系疫苗接种鸡胚的脾淋巴细胞中扩增出IL-2基因cDNA。结果表明,以鸡新城疫 系疫苗稀释50倍或100倍接种10日龄鸡胚,培养48h的脾脏提取mRNA的扩增效果最好。测序结果显示,所扩增片段的核苷酸序列及其所编码的氨基酸序列,与已发表的IL-2基因的同源性分别为97.7%～99.8%和95.1%～99.3%。其中第8位、68位和130位氨基酸(分别是L,V和S)的变异是其他品种鸡所没有的。
关键词：
鸡IL-2基因 转录 克隆 序列分析
[期刊] 西南农业学报
[作者]
许宗丽 谢芝勋 谢丽基 刘加波 邓显文 谢志勤 庞耀珊 范晴 罗思思
设计了2对特异性引物,PCR扩增出鸭源NDV分离株GX2011/19的F基因和DuCV的Cap基因,并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1,成功构建重组融合表达质粒pcDNA3.1-F-Cap。经酶切和测序鉴定正确后,将重组质粒pcDNA3.1-F-Cap转染Vero细胞,采用间接免疫荧光检测到目的基因的体外表达。将pcDNA3.1-F-Cap作为DNA疫苗对2周龄的SPF雏鸭以胸部肌肉多点注射的方式进行免疫。分3个实验组,每组接种剂量分别为100、200和300μg/只,另设2组为载体质粒空白组和灭活疫苗组。ELISA检测抗体水平,试验结果显示:各DNA疫苗免疫组的NDV抗体和DuCV抗体...
[期刊] 华北农学报
[作者]
黄娟 隋晓梅 王怡男 单虎
为了弄清是否有新基因型犬瘟热病毒出现，对山东省不同地区的免疫水貂、狐狸和犬进行了犬瘟热病毒检测，扩增了病毒核衣壳基因和血凝素基因（Ｈ），并对１３个犬瘟热病毒山东株（８株貂源，２株狐狸源，３株犬源）血凝素基因进行了测序。结果表明，１３个犬瘟热病毒山东株之间Ｈ基因核苷酸同源性为９９．１％～１００．０％，均为ＡｓｉＡ－１型，这也是我国目前水貂犬瘟热病毒唯一的基因型。与２０１２年之前的犬瘟热病毒中国分离株及疫苗株相比，１３个毒株Ｈ基因有４个氨基酸的一致性变异，即Ｐ２００ｓ、Ｍ２６３ｉ、ｉ５４２Ｎ和Ｙ５４９Ｈ，Ｎ－糖基化位点比ＯＮｄｅｒｓｔｅＰＯＯｒｔ株多６或７个，比ＣｄＶ３株多３或４个。抗原性分析表明．．．
关键词：
犬瘟热病毒 血凝素基因 免疫失败
[期刊] 水产学报
[作者]
路珍 绳秀珍 唐小千 邢婧 战文斌
为探明鱼类黏膜相关淋巴组织中黏液细胞对疫苗免疫的应答特性，本研究利用组织学和组织化学技术，研究了浸泡免疫灭活迟钝爱德华氏菌前后牙鲆皮肤、鳃、前肠、中肠和后肠中黏液细胞数量和特性的时序变化。苏木精－曙红（ＨＥ）、阿尔新蓝－过碘酸雪夫氏（ＡＢ－ＰＡＳ）染色结果显示，免疫前皮肤主要分布含中性黏多糖的Ⅰ型黏液细胞以及含中性黏多糖和少量酸性黏多糖的Ⅲ型黏液细胞，鳃中可观察到Ⅰ、Ⅲ型以及含酸性黏多糖和少量中性黏多糖的Ⅳ型黏液细胞，前肠中主要分布Ⅰ型黏液细胞，中肠、后肠上皮中可观察到Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型和含酸性黏多糖的Ⅱ型黏液细胞。免疫后，牙鲆黏膜免疫相关淋巴组织中黏液细胞总量随时间呈现先增多后减少趋势，后肠在第５．．．
关键词：
牙鲆 黏液细胞 组织学 组织化学
[期刊] 西南农业学报
[作者]
马春霞 李军 潘艳 彭昊 禤雄标 胡帅 谢永平 谢宇舟 何彩美 陈泽祥 杨威
研究猪瘟兔化弱毒苗在免疫猪体内的动态分布，在注射猪瘟兔化弱毒苗后第１、７、１４、２１、２８、３５、６３天采集免疫猪的脾、肾、肺、腹股沟淋巴结、扁桃体及血清，应用免疫组化、ＲＴ－ＰＣＲ、猪瘟抗原、抗体检测试剂盒等方法，检测分析猪瘟病毒在猪体内的动态分布、存留时间及抗体水平。结果表明：应用免疫组化方法于免疫后第７～１４天在脾脏、第７～２１天在腹股沟淋巴结、第１４～２８天在肾脏组织分别检测到猪瘟病毒。在免疫后第７天检测到猪瘟病毒抗体，随后抗体水平持续上升至免疫后第６３天；病毒抗原的分布与ＲＴ－ＰＣＲ检测结果吻合。结论：猪瘟兔化弱毒苗在猪体内主要分布器官为脾、肾和腹股沟淋巴结，免疫后第７天脾和腹股沟淋．．．
关键词：
猪瘟兔化弱毒苗 免疫组化 动态分布
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱新产 邵艳红 朱峰伟 杨丽金
为探究Ig G/Ig M蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理,对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ig进行了分级分离、纯化及Ig G/Ig M蛋白质结构和功能等生化-分子生物学分析。以GPVYZ感染雏鹅,采用(NH4)2SO4分级分离鹅血清Ig,将Sephadex G-100凝胶柱在Utro-gel ACA22凝胶柱色谱工作站上串联,分步聚集纯化出鹅血清Ig M/G进行SDS-PAGE和生化分析。结果显示,初级沉淀鹅血清Ig,在非还原条件下,感染组(RD)缺失6个蛋白主带(128,114,69,59,55,48 k Da);而在还原条件下,RD组缺失7个蛋白主带(139,128,119,1...
[期刊] 华北农学报
[作者]
朱新产 邵艳红 朱峰伟 杨丽金
为探究Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白的分子特征、理化特性及病理学相关致病机理，对鹅细小病毒感染雏鹅的免疫球蛋白Ｉｇ进行了分级分离、纯化及Ｉｇ ｇ／Ｉｇ Ｍ蛋白质结构和功能等生化－分子生物学分析。以ｇＰＶＹＺ感染雏鹅，采用（ＮＨ４）２ＳＯ４分级分离鹅血清Ｉｇ，将ＳｅＰＨａｄｅｘ ｇ－１００凝胶柱在ＵｔｒＯ－ｇｅｌ ａＣａ２２凝胶柱色谱工作站上串联，分步聚集纯化出鹅血清Ｉｇ Ｍ／ｇ进行ＳｄＳ－Ｐａｇｅ和生化分析。结果显示，初级沉淀鹅血清Ｉｇ，在非还原条件下，感染组（ｒｄ）缺失６个蛋白主带（１２８，１１４，６９，５９，５５，４８ ｋ ｄａ）；而在还原条件下，ｒｄ组缺失７个蛋白主带（１３９，１２８，１１９，１．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郭抗抗 邓力 井勇 张彦明 王晶钰 宁蓬勃
【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测...
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