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[期刊] 中国农业科学
[作者]
于学辉 李键 程安春 黄志宏 罗薇 冉丹丹
【目的】为了建立鸭源出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O46分离株的实验病理模型并观察其在雏鸭体内的动态分布及组织病理学和超微病理学变化。【方法】本研究以O46分离株通过口服、肌肉和皮下注射3种途径感染10日龄健康雏鸭,感染剂量均为0.5 mL/只(2×108CFU·mL-1),感染后2、4、6、12、24h剖杀、取样,以后每隔12h剖杀、取样并对剖解变化进行详细观察,在每个安排的时间点平行采集2只雏鸭的心、肝、脾、肺、肾、脑、食道、胸腺、十二指肠、空肠、盲肠、直肠、法氏囊、胰腺和气管等组织制备组织切片和超薄切片,通过H.E染色、醋酸铀、柠檬酸铅染色...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 何孔旺 赵攀登 栾晓婷 叶青 温立斌 倪艳秀 周俊明 李彬 王小敏 郭容利 俞正玉 茅爱华 吕立新
肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌。志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子。选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB)基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力。经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
赵燕娟 王刚 索朗斯珠
为调查西藏地区牦牛源肠出血性大肠杆菌的流行情况,利用PCR检测和生物进化分析方法,对西藏林芝、拉萨不同地、市149株牦牛源大肠杆菌的肠出血性大肠杆菌相关毒力基因进行了研究。结果表明:牦牛源肠出血性大肠杆菌6对毒力基因中,只检出ehxA基因,检出率为9.40%;对检测到的14株牦牛源肠出血性大肠杆菌进行克隆测序,经系统发育分析发现牦牛源肠出血性大肠杆菌菌株内同源性达到99.9%左右,与GenBank中所录其他菌株的同源性达到99%。因此,西藏牦牛源肠出血性大肠杆菌基因确实存在,其毒力基因主要为ehxA基因;西藏林芝、阿里、日喀则、昌都均有分布,拉萨、山南和那曲地区未检出,应引起重视。西藏地区要根据各地实际情况需要加强监测肠出血性大肠杆菌引起的腹泻,建立流行毒株预警机制并合理用药。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
张雪寒 何孔旺 茅爱华 周俊明 俞正玉 温立斌 倪艳秀 郭容利 吕立新
【目的】克隆、表达肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转位紧密素受体(Tir)基因,并研究其抗原性。【方法】选用pET28原核表达载体,体外构建Tir原核表达重组菌,并在大肠杆菌中获得高效表达。选用家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。选用HEp-2细胞进行粘附和粘附抑制试验,通过光镜、电镜和荧光显微镜进行观察。选用Balb/c小鼠进行免疫试验。【结果】成功获得高效表达重组Tir蛋白,并制备了兔源Tir多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与Tir发生特异性抗原抗体反应。表达Tir蛋白能够抑制O157:H7对HEp-2细胞的粘附和A/E损伤。二免后B...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
林健 韩春华 陈华林 蒋桃珍 梁武 何平有 杨保收 王英 韩婧雯 刘东艳 潘洁 段会娟 丁佩佩 胡胜强 刘月焕
【目的】建立鸭出血性卵巢炎的实验动物感染模型并对其发病特点进行观察,为疫苗研究和筛选评价抗病毒药物提供工具。【方法】以每只约104个ELD50的剂量经滴鼻、点眼和口服途径感染196日龄北京鸭后,观察鸭临床症状,于感染后5、7、9、21、28、34 d采血和剖检鸭,应用固定病毒稀释血清的方法测定血清中和抗体,取卵泡膜、肝脏、脾脏和脑组织进行病毒分离,对主要组织脏器进行病理学检查。【结果】攻毒后3、4、5d采食量均显著下降(下降80%),6d采食量恢复至约正常量的50%,11d恢复到正常水平;攻毒后3、4、5d产蛋量出现明显下降,6、7、8d鸭群未见产蛋,36d发病鸭群的产蛋率恢复到60%,39d...
关键词：
鸭 出血性卵巢炎 实验模型
[期刊] 华北农学报
[作者]
张雪寒 何孔旺 卢维彩 赵攀登 温立斌 李彬 郭容利 王小敏 倪艳秀 周俊明 俞正玉 茅爱华 吕立新
为了更好防治由出血性大肠杆菌O157∶H7引起的疾病,尝试研制基因工程疫苗,其中亚单位疫苗时具有很大优势。构建表达tir和stx1b的融合基因,将tir基因中间295个氨基酸残基(Tir295)与stx1b亚基基因72个氨基酸串联构建pGEX-stx2b-tir-stx1b重组质粒,将其转化于BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳检测,该融合蛋白获得了高效表达,目的蛋白表达量占菌体总蛋白含量的30%左右。重组蛋白纯化后皮下途径免疫小鼠,能够诱导高滴度(105)的IgG,鼻腔内途径免疫小鼠不仅能够诱导高滴度(104)的IgG,还能诱导高达102的IgA。二免后攻击50...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
周珍辉 陈可毅 李玉冰 杨久仙 向双云 于凤芝
观察了 38例雏鸡实验性大肠杆菌病的病理变化 .发现其主要特征是各脏器出现亚急性浆液———纤维性炎症 ,有大量嗜异性白细胞浸润并形成化脓灶 ,局部组织水肿、坏死 ,同时淋巴细胞增生 .炎症迁延到慢性阶段时 ,脏器表面的纤维素性渗出物发生机化 .重要病变为纤维素性化脓性气囊炎 ,浆液性纤维素性心包炎和肝周炎 ,脾肿大 ,肺肉芽肿结节 .
关键词：
雏鸡 实验性大肠杆菌病 病理变化
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张雪寒 张碧成 栾晓婷 汪伟 周俊明 何孔旺
肠出血性大肠杆菌(Enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7是重要的食源性病原菌,导致严重的人兽共患病。本文旨在建立以Z0372基因为靶基因的PCR检测技术,特异性检测EHEC O157:H7。以Z0372基因为靶序列,设计引物,建立Z0372-PCR,分析敏感性、特异性,并检测模拟阳性污染样品。结果表明,Z0372-PCR对纯培养物检测限103~104CFU/m L,模拟阳性污水样和肉样,增菌后检测限10~102CFU/m L(g)。非大肠杆菌O157和其他肠道病原全部为阴性扩增,只有肠出血性大肠杆菌O157:H7扩增出清晰而特异的条带。模拟阳性样品检测,条...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
方廖琼 陈昌琼 何成明
中华鳖出血性肠炎病病理组织学研究方廖琼陈昌琼何成明（四川畜牧兽医学院水产系，重庆６３２４６０）本文作者对中华鳖出血性肠炎病部分组织器官作病理分析，以期对鳖出血性肠炎症的防治提供理论依据。１材料与方法实验室水族箱饲养稚鳖，体重５０—７５克，共４只，３雄...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王景松 郭亚男 王健霖 王建东 张正刚 刘红燕 李继东
【目的】对宁夏某规模化绵羊场大肠杆菌和艾美耳球虫混合感染进行分离鉴定并对靶器官的组织病理学变化进行分析。【方法】采用固体培养基进行细菌病原分离，饱和盐水漂浮法进行寄生虫检测；采用大肠杆菌16S rRNA引物进行基因序列扩增和测序，使用DNA Star软件将分离菌株测序结果与GenBank中的标准株序列进行同源性比较；采用MEGA 7.0软件中的邻接法，依据16S rRNA序列构建分离株系统发育树并进行遗传进化分析；对靶器官组织进行病理组织学观察。【结果】在伊红美蓝培养基中观察到金属光泽的黑色单一菌落，在血平板中有溶血环的灰色圆形单一菌落，染色为革兰氏阴性杆菌，共分离得到3株菌株；麦克马斯特法检测显示，粪便中有卵圆形，表面光滑的孢子化艾美尔球虫卵囊，其平均OPG为2200，属于轻度感染；对3株菌株16S rRNA扩增片段与阳性对照一致，16S rRNA基因序列构建的系统发育树与大肠杆菌在同一分支；病理组织学观察显示，肠系膜淋巴结淋巴细胞数量减少，有中性粒细胞浸润；肠组织黏膜层绒毛溶解坏死、黏膜上皮结构丢失；回肠固有层内有球虫虫体，呈嗜酸性圆形；空肠间质有中性粒细胞浸润，腺腔有镰刀状球虫裂殖体；结肠局部黏膜有溃疡灶，并有大量弱嗜碱性短杆状物质沉积。【结论】结合病原形态学和分子生物学结果分析表明，该例绵羊群腹泻是由大肠杆菌和艾美尔球虫共同感染所致。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王娟芳 戴建君 姜敏 任建鸾 李德志 张鹏 孙建和 汤芳
[目的]本试验旨在建立一种能同时检测禽致病性大肠杆菌O_1、O_2和O_(78) 3种血清型的三重PCR检测方法。[方法]根据O_1、O_2和O_(78) 3种血清型的特异性基因片段设计并合成引物,分别提取O_1、O_2和O_(78)血清型禽致病性大肠杆菌的DNA作为模板,优化三重PCR反应条件,进行特异性和敏感性检测,并对临床模拟样品进行检测。[结果]在三重PCR的25μL反应体系中,dNTP 1.5μL,MgCl_22.5μL,Taq DNA酶0.6μL,O_1、O_2、O_(78)最佳引物加入量分别为0.6、0.2、0.6μL;最佳退火温度为55.9℃。三重PCR的特异性好,3种血清型之间无交叉反应;对146株不同血清型的大肠杆菌进行检测,准确率为99.32%(145/146),用金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和枯草芽胞杆菌进行特异性检测时,没有出现非特异性扩增。三重PCR敏感性高,以单一血清型DNA为模板时,O_1和O_2血清型的DNA最低检测限均为0.1 ng·μL~(-1),O_(78)血清型的DNA最低检测限为0.02 ng·μL~(-1);以O_1、O_2和O_(78)混合DNA为模板时,最低检测限为0.05 ng·μL~(-1)。对18份临床模拟样品进行检测,准确率为94.4%(17/18)。[结论]建立了一种能同时检测O_1、O_2和O_(78)3种血清型禽致病性大肠杆菌的三重PCR方法,方法特异性好,敏感性高,适用于临床上禽大肠杆菌病的快速检测。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
恽时锋 郑明球 潘震寰
从江苏地区５个大型种鸡场孵化后期死亡的１６３枚鸡胚及８４羽出壳弱雏中分离鉴定出９９株大肠埃希氏菌，死胚分离率为３６．８１％，出壳弱雏分离率４６．４３％；从其它９个蛋鸡场４７羽疑似大肠杆菌病的病、死鸡的肝、脾、心包、腹水、输卵管、脑、眼中分离鉴定出２３株大肠埃希氏菌，分离率为４８．９４％。分离菌中有６７株对清洁级昆明种小鼠（ＫＭ）具有强毒力。对其进行大肠埃希氏菌Ｏ群抗原鉴定，共有２２种Ｏ型血清型，Ｏ１１、Ｏ８８、Ｏ１１５为优势血清型，Ｏ７８及Ｏ８１各为３株，Ｏ１８、Ｏ２０、Ｏ２６、Ｏ３６、Ｏ８９各为２株，其余为Ｏ３、Ｏ４、Ｏ９、Ｏ３０、Ｏ６０、Ｏ７５、Ｏ９３、Ｏ１０３、Ｏ１１４、Ｏ１３１、Ｏ１３...
[期刊] 华北农学报
[作者]
沈华 张安国 马文芝 宋桂敏 刘田生
从天津地区１０个区县、２３个养鸡场的２４１只疑似大肠杆菌病病例中，分离出病原菌９２株，所得菌株符合大肠杆菌的微生物学特性。致病性在各菌株间略有差异。分离菌对氟哌酸、庆大霉毒、氯霉素最为敏感。抗“Ｏ”血清型鉴定，结果表明，分离菌株分属２５个血清型，并以Ｏ１１１、Ｏ８９、Ｏ８６、Ｏ３０、Ｏ７８为主。从优势血清型中选取的菌株，均具有良好的抗原性。
关键词：
鸡,大肠杆菌,病原特性,血清型,抗原性
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
陈明勇 陈德威 曾群辉
从西藏地区腹泻死亡牦牛中分离出一株肠毒素型大肠杆菌。该菌在形态特征、培养特性和生化特性方面与大肠杆菌基本一致。血清学试验表明 ,该菌的O抗原属O148,K88、K99、987P单因子血清均不能凝集本菌。在MSHA反应中 ,本菌能凝集绵羊、豚鼠、马、鸡的红细胞 ,而K88、K99、987P抗血清均不能抑制其对绵羊、豚鼠、马、鸡红细胞的凝集。腹腔接种对小白鼠具有高致病性。乳鼠胃内投服试验和兔回肠结扎试验证明 ,该菌能产生热稳定肠毒素和热敏性肠毒素。总之 ,该菌是一株不表达K88、K99、987P的、能产生ST和LT的肠毒素型大肠杆菌。
关键词：
肠毒素型大肠杆菌 牦牛 鉴定
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
贡嘎 王刚 罗润波 陈明勇 索朗斯珠
为研究西藏牦牛源大肠杆菌的致病性及其遗传进化情况,了解其与其他动物源大肠杆菌的亲缘关系,采集西藏牦牛腹泻粪便240份,采用微生物学方法对其进行细菌的分离培养、血清型鉴定和致病性研究,并运用分子生物学方法对其进行16SrRNA鉴定、测序和系统发育分析。结果表明:获得的16株牦牛致病性大肠杆菌分离株中:3株与猪源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;5株与禽源致病性大肠杆菌亲缘关系较近;2株与犊牛源大肠杆菌亲缘关系较近;4株与牛源大肠杆菌亲缘关系较近;1株牦牛源致病性大肠杆菌单独形成一个较远的分支;1株与痢疾杆菌和人源出血性大肠杆菌亲缘关系较近,可能成为对人类造成潜在危险的病原菌。西藏牦牛源大肠杆菌与牛源、禽源、猪源、人源大肠杆菌的之间亲缘性很近,存在跨种间传播风险。该种西藏牦牛源大肠杆菌动物致病试验表明,致死率高达95%,应引起高度重视。
关键词：
西藏牦牛 大肠杆菌 致病性 系统发育
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