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[期刊] 华北农学报
[作者]
武爽 关伟军 马月辉
为了建立鸡脐带间充质干细胞(Umbilical cord mesenchymal stem cells,UCMSCs)体外培养体系并对其进行生物学特性研究。取11～15日龄鸡胚,脐带分离获得UCMSCs,在L-DMEM培养基中培养,观察其形态。通过传代、生长曲线和周期分析其增殖情况,并研究体外诱导分化潜能。结果表明,鸡UCMSCs可在体外扩增培养,目前传代至P30,表达CD29、CD44和CD71,并具有向胰岛β样细胞诱导分化的潜能。鸡脐带中可以分离出UCMSCs,能够在体外培养,并可诱导分化为胰岛β样细胞。
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
赵文亮 张宏 蔺春恒 郭洋 卢宏宇 孙玉忠 朱大帷 张树义
为研究无血清扩增犬脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells, UC-MSCs)移植对犬急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的临床治疗效果,采用胶原酶消化法分离犬UC-MSCs,无血清对其进行体外扩增,对P3代干细胞的形态、生长曲线、群体倍增时间、体外诱导分化和表面标记基因表达等生物学特性进行鉴定;通过静脉注射P3代无血清犬UC-MSCs对1例急性肾损伤的犬进行治疗。结果表明:无血清犬UC-MSCs原代48h发现有少量细胞贴壁,呈不规则形态。P3代犬UC-MSCs贴壁生长,呈长梭形或多边形等形态,P3代细胞较P6代细胞有更强的增值能力,在体外经诱导可分化为成骨细胞、脂肪细胞、成软骨细胞。病犬就诊前精神沉郁、脱水并伴有呕吐及腹泻等症状,经血液生化检查,该病犬肌酐389μmol·L~(-1)、尿素>46.4mmol·L~(-1)、无机磷4.40mmol·L~(-1),结合血常规及超声检查,确诊为犬急性肾损伤。在常规治疗联合干细胞移植后34d进行复查,病犬精神恢复良好,饮食正常,血液生化检测肌酐下降至133μmol·L~(-1)、尿素下降至14.7μmol·L~(-1)、磷离子下降至1.87μmol·L~(-1),肌酐和磷离子含量稳定在正常参考值范围内,尿素含量明显下降且接近正常参考值范围。表明无血清犬UC-MSCs移植的参与能安全有效治疗犬急性肾损伤,为兽医临床的细胞疗法提供新思路和更理想的细胞种子。
关键词：
犬 无血清 间充质干细胞 急性肾损伤
[期刊] 中国农业科学
[作者]
冯若鹏 张慧茹 窦忠英
目的分离培养胎猪胰腺干细胞对其进行功能检测。方法用先悬浮后贴壁的方法从胎猪胰岛获得胰腺干细胞,用免疫组化方法鉴定该细胞,以MTT法测定其不同代次的生长活性,诱导该细胞成为胰腺内分泌细胞并检测其功能。结果分离得到的细胞不表达nestin,而表达导管上皮细胞标志ck-19、平滑肌标志α-actin,其在体外的生长行为有类似胚胎干细胞样生长形态,细胞体外增殖活力很强,现已传至18代,细胞经诱导后分化为分泌胰岛素的胰腺内分泌细胞,并且伴随着细胞超微结构的改变。结论通过本方法可以分离到胎猪胰腺干/祖细胞,经诱导分化可形成有功能的胰岛样细胞团并释放胰岛素。
关键词：
胎猪 胰岛 胰腺干细胞 培养 诱导分化
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
皇甫一凡 昝林森 王洪宝 成功 刘扬 高建斌 李耀坤 杨宁
【目的】建立稳定成熟的牛成肌细胞胰岛素诱导成脂分化体系,为肉牛肉脂品质的改良提供参考。【方法】取1日龄荷斯坦公牛犊后腿肌肉,用Ⅳ型胶原酶消化法分离成肌细胞,用胰岛素诱导成肌细胞成脂分化,以未添加胰岛素的培养基为对照组,检测成肌细胞成脂分化过程中细胞形态的变化,并分析与成肌细胞和脂肪细胞分化相关基因(C/EBPα、C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ、Myf5、MyoD)分别诱导第3,6,9,12,15天相对表达量的变化,分析牛成肌细胞的诱导分化情况。【结果】成功分离培养了牛原代成肌细胞。胰岛素处理组细胞中脂滴的油红O染色明显,C/EBPβ、C/EBPδ、PPARγ和MyoD相对表达量明显增高...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
闫益波 齐巍巍 钟部帅 樊懿萱 宋洋 黄荣 万永杰 王锋
在建立小鼠胚胎干细胞(ES细胞)无饲养层单层培养体系的基础上,使用丁酸钠(NaB)和表皮生长因子(EGF)作为前期诱导分化剂,诱导分化7 d,再用肝细胞生长因子(HGF)和地塞米松(Dex)诱导分化12 d,建立了体外两步法单层诱导ES细胞分化为肝样细胞的方法,并对诱导分化所得的肝样细胞从形态学、基因表达、蛋白分子标记及细胞功能等方面进行了检测,证明了分化所得细胞为肝细胞,肝细胞分化率为41.67%,为肝细胞来源提供了新的方法。
关键词：
小鼠胚胎干细胞 肝样细胞 诱导分化 小鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
王洋 彭莹莹 段星祥 余娟 孙懿
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)和诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)是一类具有多能性和自我更新能力的多能干细胞,这些细胞具有无限增殖能力,并有潜能分化为机体三胚层所有类型的细胞。多能干细胞来源的肝细胞能够作为肝细胞的替代物应用于体外药物筛选和肝脏疾病的治疗。文章对多能干细胞向肝细胞的诱导研究、多能性干细胞来源肝细胞的鉴定方案研究及其在药物筛选和疾病治疗方面的研究进行了综述分析,并对未来的研究方向进行了总结与展望。
关键词：
多能干细胞 分化 肝细胞
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
马勇江 杨学义 窦忠英
哺乳动物胚胎干细胞一般可从胚胎囊胚内细胞团分离得到 ,具有在体外保持不分化的无限增殖能力 ,在合适的培养条件下 ,胚胎干细胞可定向诱导分化形成多种细胞类型。人们对胚胎干细胞进行体外培养与定向分化可以得到大量同源细胞 ,以应用于患疾病的细胞或器官移植治疗等研究。文章概述了胚胎干细胞增殖与分化的信号调节机制、诱导分化方法 ,国内外研究概况及展望 4个方面的内容
关键词：
胚胎干细胞 诱导分化 信号调节机制
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
余树民 凌占业 刘丹 刘欢欢 夏娟 沈留红 曹随忠 左之才 邓俊良 任志华 马晓平 王娅 胡延春
【目的】研究干细胞标志分子,如干细胞"干性"调控关键基因及胚胎阶段特异性抗原(Stage-specific embryonic antigen,SSEA)在猪脐带组织中的表达状况,为猪脐带来源细胞的利用提供参考。【方法】以猪脐带为研究材料,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法,分析干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1以及SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中的表达。【结果】RT-PCR分析显示,干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1在所有猪脐带样品中阳性转录,但Nanog mRNA的相对表达量显著低于Oc...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
宋晓平 窦忠英
胚胎干细胞是由早期内细胞团分离的一种多潜能细胞 ,在体外分化抑制培养时 ,可保持未分化状态而无限增殖。一旦撤除分化抑制因素 ,或添加适当的诱导剂 ,ES细胞可分化为内胚层、中胚层和外胚层的多种类型的特化细胞。文章综述了体外定向诱导 ES细胞分化为造血细胞、心肌细胞、神经细胞、脂肪细胞、胰岛细胞、内皮细胞、上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞和黑素细胞等的途径和方法。
关键词：
胚胎干细胞 定向诱导分化 生物工程
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
任雯雯 过七根 杨洋 宋红生 文铁桥 陈付学
以胎鼠的神经干细胞为研究对象,将其分别置于FHL,FH,FL,LH 4种培养液中,于37℃、50mL/L CO2、饱和湿度下培养,同时作空白对照试验;7 d后,检测胆碱乙酰基转移酶(ChAT)免疫反应,研究在不同培养液中,神经干细胞向胆碱能神经元定向分化的能力。结果表明,在FHL和FH培养液培养的细胞中,能检测到ChAT阳性细胞,说明FHL和FH培养液可诱导神经干细胞分化为胆碱能神经元。
关键词：
神经干细胞 诱导 分化 胆碱能神经元
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
冯若鹏 张慧茹 窦忠英
对新生仔兔胰腺干细胞的分离、培养方法进行了研究,并检测了其横向诱导分化为心肌、成骨、神经细胞的潜能。结果表明,分离到的新生仔兔胰腺干细胞为上皮样细胞,在传代过程中该细胞的生长特性未发生改变,并始终表达导管源胰腺干细胞的标志CK-19,PDX-1;新生仔兔胰腺干细胞经诱导可分化为心肌、神经和成骨细胞,经免疫组化染色鉴定显示,心肌样细胞表达-αactin、神经样细胞表达NF-200而不表达GFAP、成骨样细胞茜素红染色呈阳性。证明该细胞具有多潜能性,是一种亚全能干细胞。
关键词：
新生仔兔 胰腺干细胞 诱导分化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
杜军慧 曹文广
诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)是借助基因导入技术将某些转录因子导入人或动物的体细胞,使体细胞重编程而得到的多能性细胞。iPS细胞来源丰富,研究表明利用不同的载体诱导系统或不同的转录因子组合,多种体细胞都可被重编程为iPS细胞,如成纤维细胞、肝细胞、角质细胞及脐带血细胞等。作为干细胞中新的一员,iPS细胞在克隆形态、基因表达模式、表面标志物、拟胚体形成、畸胎瘤及嵌合体形成(小鼠)、分化能力等方面与胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)非常相似。与胚胎干细胞一样,在特定的诱导条件下,iPS细胞在体外可被诱导分化为多种细胞...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
文依信 贾绍昌 乐建铭 鲁希 邓茜文 赵炳枢 吴文达 张海彬
[目的]本试验旨在分离、多向诱导分化并鉴定犬脂肪间充质干细胞。[方法]无菌条件下采取经过健康筛查的犬腹部脂肪,机械剪碎,采用1 g·L~(-1)胶原酶Ⅰ型消化,用DMEM+10%FBS培养,观察细胞形态特征,流式细胞术分析细胞表面抗原标志的表达,并检测其体外成脂、成骨、成软骨分化能力。[结果]运用酶消化法可以从犬新鲜脂肪组织中分离到脂肪间充质干细胞,流式分析结果显示其高表达CD29(99.9%),低表达CD34(0.5%)和CD45(0.3%)。这些细胞在体外经诱导可以分化成为骨、软骨和脂肪。[结论]犬腹部脂肪组织中分离得到脂肪间充质干细胞,这些细胞具有多向分化能力。
关键词：
脂肪间充质干细胞 犬 细胞分化
[期刊] 中国农业科学
[作者]
苗向阳 陈晓瑛
自从小鼠的胚胎成纤维细胞和鼠尾成纤维细胞重编程成为诱导多能干细胞(induced pluripotent stemcells,iPSCs)以来,iPS的研究成了干细胞研究领域的热点。与胚胎干细胞相比,iPS细胞有操作简便和高稳定性等优点可以应用于,如创建人类疾病的遗传模型,培育转基因动物用于器官移植,改善动物生产性状和抗病性,以及生物制药等领域。另外,iPSCs的产生对于解决长期以来干细胞研究领域的伦理问题和免疫排斥问题有巨大的意义,iPS结合基因治疗和细胞移植疗法的成果已经应用到了动物疾病模型上。iPS细胞技术给病人特定细胞治疗和基因针对性药品研制带来了巨大的前景。此外,该技术也提供了iPS...
关键词：
重编程 胚胎干细胞 诱导性多能干细胞
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙懿 周静 林戈 卢光琇
【目的】研究Activin A对人胚胎干细胞(hESCs)向限定性内胚层(DE)诱导分化的促进作用及其信号通路分子,为hESCs向DE诱导分化体系的优化提供参考。【方法】在人饲养层体系培养的hESCs中,收集100ng/mL Activin A分别诱导0,6,12,24,48,72,96,120h的细胞,用实时荧光定量RT-PCR检测原条标记Gsc和Mixl1、中内胚层共同前体标记Brachyury、内胚层标记Foxa2和Sox17、中胚层标记Flk1、外胚层基因Pax6、多能性相关基因Oct4与Nanog表达水平的变化,用细胞免疫荧光检测Brachyury和Sox17蛋白表达水平的变化。【结...
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