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[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
董世山 乔健 赵立红 孙茂红 张建军 田勇
应用组织贴块法、贴块配合差速贴壁法成功培养不同日龄鸡的肺动脉平滑肌细胞。一般需 4～ 7d细胞从组织块边缘长出 ,再经 5～ 1 0 d长成细胞单层。鸡日龄越小培养的肺动脉平滑肌细胞生长越旺盛。培养的肺动脉平滑肌细胞呈梭形、三角形 ,圆形核位于中央 ,胞浆丰富致密。用兔抗鸡α- actin多克隆抗体为一抗做免疫组化染色 ,平滑肌细胞占 95%以上
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
韩燕燕 刘思当 杨鹰
探索简单快速实用的鸡胚肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞培养方法:在严格无菌条件下对肺动脉内皮细胞和平滑肌细胞分离培养,待细胞融合度达约80%时进行传代,得到的内皮细胞利用差速消化法纯化,并观察2种细胞形态特征及培养特性,待细胞稳定生长后,采用荧光免疫组化技术鉴定细胞,并进行冻存和复苏,观察复苏后细胞活性。结果显示:24 h后组织块周围即有少量细胞爬出,内皮细胞大量生长后呈突起状排列,立体感强,平滑肌细胞在培养后的第5天呈现"峰谷"样外观,经免疫荧光法证明是内皮细胞和平滑肌细胞的纯培养,冻存于液氮中1~2个月复苏后细胞的活性都较好,可以恢复旺盛生长。结论:本研究提出的组织贴块法能成功获得内皮细胞和平滑...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
柴娟 胡玉霞 毕师诚 谭勋
为探索内皮素-1(ET-1)对肉鸡肺动脉平滑肌细胞(PASMC)体外增殖的影响及其发挥效应的受体途径,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ET-1对PASMC体外增殖的刺激作用,并分别观察内皮素A受体(ETAR)拮抗剂BQ123和B受体(ETBR)拮抗剂BQ788对ET-1作用下的肉鸡PASMC增殖的影响。结果表明:ET-1可显著刺激肉鸡PASMC的增殖(P0.05)。结论:ET-1具有促肉鸡PASMC增殖的作用,此作用受ETAR介导。
关键词：
内皮素受体 肺动脉平滑肌细胞 肉鸡
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李英 曾健滢 韩前彪 唐兆新 郭剑英 潘家强
【目的】探讨肉鸡肺小动脉中膜5-羟色胺(5-HT)含量与肺小动脉平滑肌细胞增殖的关系,明确5-羟色胺转运体(5-HTT)是否参与了肉鸡肺动脉高压的发生。【方法】20日龄科宝肉鸡分成非诱病组(静脉注射生理盐水,包括空白对照组、氟西汀、西酞普兰组,30只/组)和诱病组(静脉注射纤维素微粒,包括药物空白对照组、氟西汀组、西酞普兰组,50只/组)。自21d起,记录肺动脉高压综合征(PHS)发病率,并分别于21、28、35、42d从各组随机抽样,测定右心室/全心室重量比(RV/TV),采用免疫组织化学技术、增殖细胞核抗原(PCNA)染色和核仁组织区嗜银蛋白(AgNOR)染色方法检测肺小动脉中膜5-HT量...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
李瑞梅 陈秀荔 王海滨 靳亚平
为了建立一种高效的子宫细胞分离培养方法,用酶消化、过滤、离心与差速贴壁纯化相结合的方法分离培养家兔子宫细胞,分别以上皮细胞角蛋白、波形蛋白、α-平滑肌肌动蛋白等为抗原的免疫荧光对分离培养的细胞进行鉴定,并采用流式细胞仪分析细胞纯度。结果表明,家兔子宫内膜上皮细胞培养24 h后大部分贴壁,培养3 d左右形成单层细胞集落,呈角蛋白阳性,细胞圆形或椭圆形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达96%以上;子宫内膜基质细胞培养0.5 h后即有贴壁,培养2 d后呈单层细胞集落状生长,呈波形蛋白阳性,细胞多边形或梭形,胞质呈红色,核呈蓝色,纯度达95%以上;平滑肌细胞培养24 h后大部分贴壁,6~7 d融合成片,呈...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
毕台飞 宋宇轩 窦铖
【目的】研究家兔子宫平滑肌层细胞的体外培养和扩增方法。【方法】应用酶解消化法对新西兰大白兔的子宫平滑肌细胞进行体外分离和培养,并研究不同水平性腺激素对其生长的影响。【结果】酶解消化法可成功进行家兔子宫平滑肌细胞的体外培养和传代。子宫平滑肌细胞在体外的增殖受卵巢性腺激素的影响,100nmol/L雌二醇对其体外增殖有促进作用,而100nmol/L孕酮则有抑制作用。免疫组织化学结果表明,体外培养的子宫平滑肌细胞在激素作用下仍可维持其特性,在体外可传9~10代。【结论】建立了家兔子宫平滑肌细胞的体外培养和扩增方法,可为构建子宫三维结构提供充足的种子细胞。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
潘家强 李锦春 谭勋 王金勇 孙卫东 王小龙
采用组织贴块法培养肉鸡肺动脉内皮细胞(PAEC),并依据细胞形态学特点和凝血因子Ⅷ相关抗原免疫组化染色结果对所培养的细胞进行鉴定。以黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶(X/XO)系统作为氧自由基发生系统建立PAEC氧化损伤模型。结果表明:肉鸡PAEC在体外能够存活并传5-6代。形态学观察和Ⅷ因子抗原免疫组化染色检查证明培养的细胞符合肺动脉内皮细胞的特点。氧自由基能够明显损伤PAEC,X/XO系统作用下细胞生长被抑制,甚至导致细胞死亡,并且这种抑制作用对XO有剂量依赖性。与正常对照组相比,损伤组PAEC培养液中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量升高,提示氧自由基促进了PAEC的脂质过氧化。这说明氧自由基对肉鸡...
关键词：
肉鸡 肺动脉内皮细胞 脂质过氧化损伤
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙璇 唐奕
【目的】探讨含有WW结构域的E3泛素蛋白连接酶1(WWP1)在平滑肌细胞分化过程中的表达情况及其作用机制。【方法】用实时定量PCR,检测WWP1在人、小鼠主动脉血管平滑肌细胞中以及小鼠胚胎干细胞向平滑肌细胞体外分化过程中表达量的变化情况。用萤光素酶活性试验及免疫共沉淀试验检测WWP1与Myocardin的结合情况。【结果】WWP1在人和小鼠的血管平滑肌细胞中高表达,在全反式维甲酸诱导小鼠胚胎干细胞向平滑肌细胞分化过程中的表达水平明显上调。WWP1能与Myocardin蛋白结合,WWP1的表达水平受Myocardin调控。【结论】WWP1很可能通过与Myocardin结合参与血管平滑肌细胞分化的...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
向瑞平 王小龙 王金勇 李家奎
随机抽取 12羽与缺氧有关的肺动脉高压综合征 (PHS)自然病鸡和 12羽同种、同龄健康AA肉鸡 ,用组织形态学方法对患PHS肉鸡和健康肉鸡肺细小动脉结构变化进行定量检测和比较分析。结果显示 :患PHS肉鸡的肺细小动脉血管管壁面积与管总面积之比 (WA/TA)、中膜厚度与管外径之比均极显著高于健康肉鸡 (P
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王慧 王悦尚 刘兆颖 孙志良
采用酶消化法原代培养大鼠肠平滑肌细胞,用倒置相差显微镜测定血根碱对大鼠肠平滑肌细胞收缩的影响。结果表明:酶消化法原代培养的大鼠肠平滑肌细胞纯度高(α–actin检测阳性率达90%以上),密度大,并呈现平滑肌细胞特有的"峰–谷"样排列;血根碱及阿托品可显著抑制肠平滑肌细胞收缩,抑制率分别为32.22%和34.99%;血根碱和阿托品联用对肠平滑肌细胞收缩的抑制率可达68.8%,与单独使用血根碱或阿托品的抑制率差异显著;血根碱对乙酰胆碱、组胺及KCl诱导的肠平滑肌细胞的收缩具有显著的抑制作用;血根碱主要通过作用于细胞膜上的M受体、H1受体和钙离子通道来实现对大鼠肠平滑肌细胞收缩的抑制作用。
关键词：
血根碱 肠平滑肌细胞 舒张作用 大鼠
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
侯海燕 赵立红 乔健 金继昌 赵慧颖 胡永峰
为研究禽流感等敏感病毒及其他致病因子对肺泡上皮Ⅱ型细胞(AEC-Ⅱ)的致病性,建立了鸡AEC-Ⅱ细胞体外培养方法。采用胰蛋白酶和Ⅳ型胶原酶联合消化法对18日龄鸡胚肺组织进行消化,经差速离心和免疫黏附,获得了鸡AEC-Ⅱ细胞,再经纯化、体外培养和碱性磷酸酶染色法鉴定。结果表明,鸡AEC-Ⅱ细胞在接种后18 h开始贴壁进入适应期,细胞为圆形,呈岛屿状生长;接种后24~72 h,进入对数生长期,细胞为多边形,并融合成单层,胞浆内有明显的颗粒;接种后第4天细胞数量达到高峰(1.38×105个/mL),并进入稳定生长期,胞浆内颗粒开始减少;接种后6~7 d,细胞进入衰退期,胞浆内颗粒显著减少,细胞逐渐死...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
谭勋 潘家强 李锦春 刘艳娟 孙卫东 王小龙
240羽商品代肉鸡于14d时随机等分为常温对照组(NT),低温组(LT)和低温加L精氨酸(L arg)组(LA)。自14d起,对LT和LA组肉鸡采用低温诱导肺动脉高压综合征(PHS)。此外,LA组自14d起在饲料中按100mg·kg-1剂量添加L arg。测定右心室/全心室(RV/TV)和血浆一氧化氮(NO)水平。肺组织切片经βNADPH组织化学染色后,检测直径在100～200μm的肺小动脉平均光密度(D)值,以D值代表NOS的活性。结果显示:LT组PHS发病率显著高于对照组(P0.05),但显著低于LT组(P
[期刊] 水产学报
[作者]
许淑英 李焕林 邓国成 姜兰
本文报道经筛选的ＧＣＨＶ－８４１毒株在草鱼吻端成纤维细胞系（ＰＳＦ）中进行适应性培养，弱毒驯化，细胞培养弱毒疫苗的制备，安全性观察，不同稀释度和剂量的免疫保护率测定及保存试验。ＧＣＨＶ－８４１毒株在ＰＳＦ细胞中继代驯化至５３代达到减毒目的。筛选得５３～５９代作毒种制备的细胞弱毒疫苗使用安全。用稀释１０～１０４倍的疫苗，０．１～０．３毫升／尾剂量注射草鱼，其免疫保护率均在８５％以上。生产上使用疫苗的适宜浓度和剂量是稀释１０２倍和０．２毫升／尾。冻干疫苗宜保存于４℃以下。较合适的保存期是６个月（４℃）和１８个月（－２０℃）。
关键词：
草鱼出血病,细胞培养,弱毒疫苗,免疫效果
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘雨潇 华进联 张慧茹 窦忠英
对采用组织块法和酶消化法体外培养小鼠心肌细胞的结果进行了比较,并对体外培养心肌细胞的生理活性进行了初步测定。结果表明,用组织块法分离培养胎、乳鼠心肌可得到自主节律性搏动的心肌细胞;分别用1g/L胶原酶+10g/LBSA,0.5g/L胰酶+1g/L胶原酶,1g/L胰酶分离培养胎、乳鼠心肌,均可得到大量心肌细胞,且细胞活力较好,能自主博动20d以上;用上述2种方法分离培养成年鼠心肌,结果均不理想;在载有自主节律性搏动的小鼠心肌功能性细胞团的培养皿中加入Ca2+和肾上腺素后,细胞团搏动速度加快,搏动力加强;加入K+后则细胞团搏动速度减缓,搏动力减弱,其对钾、钙、肾上腺素的反应与在体内基本一致,表明...
关键词：
心肌细胞 体外培养 小鼠
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘霞 王常勇
为获得高纯度和高存活率的心肌细胞,探索心肌细胞大量培养的条件,并为进一步研究心肌细胞的细胞生物学特性奠定基础,同时为生理学和药理学研究提供细胞来源,试验采用胰蛋白酶顺序消化法及差速贴壁法,从1～2d龄新生大鼠的心肌组织中分离心肌细胞,观测心肌细胞的形态、结构、搏动状态和反映心肌细胞代谢状况的生化参数。结果表明,分离所得的心肌细胞纯度高,培养第3天就开始自发搏动,后连接成片,进而同步收缩;心肌细胞的亚显微结构包括肌丝、Z线、线粒体和大量糖原颗粒,葡萄糖比消耗率为7.44nmol/(个·d),乳酸比产率为3.83nmol/(个·d),乳酸转化率为51%,细胞代谢非常旺盛,说明试验培养条件有利于心...
关键词：
心肌细胞 细胞分离 细胞培养 大鼠
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