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[期刊] 中国农业科学
[作者]
孙法良 刁有祥 孙宁 马艳芳 纪巍
【目的】制备抗氟苯尼考(FFC)的高亲和力特异性抗体,建立检测氟苯尼考的间接竞争ELISA新方法。【方法】氟苯尼考分别与牛血清白蛋白(BSA)和人血清白蛋白(HSA)经混合酸酐法偶联,得到免疫抗原和包被抗原,其偶联比分别为14.4和14.7。用免疫原FFC-HS-BSA免疫新西兰大白兔获得了效价较高的特异性抗体。建立并优化了间接竞争ELISA检测方法。【结果】抗血清效价为1:102400。最佳包被抗原浓度为0.5μg·ml-1,最佳抗体工作浓度为1:6400,酶标二抗的工作浓度为1:20000。回归方程Y=-0.1516X+0.788(R2=0.9859),检测范围为0.18～500ng·ml...
关键词：
氟苯尼考 残留检测 间接竞争ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王虎虎 徐幸莲
【目的】建立在鸡肉生产一线具有较强操作性,并可同时检测沙门氏菌、单增李斯特菌、大肠杆菌O157的三重PCR方法。【方法】利用该3种致病菌的特异性基因invA、HlyA、rfbE设计3对引物,在确定方法特异性和抗干扰能力的基础上,用优化后的反应体系对反应灵敏度进行测定,模拟并检测在鸡肉中常见腐败菌和鸡肉基质对检测方法的干扰影响作用下,在前增菌程序的辅助下该方法的实际样品检测灵敏度。【结果】该方法特异性和抗干扰能力强,3种致病菌测序结果的同源性分别达到100%、99%和99%,反应体系的最佳退火温度为51℃,灵敏度试验中3种致病菌同时检出的检测线达到103CFU/mL,单重的灵敏度达到101CFU...
关键词：
冰鲜鸡肉 三重PCR 致病菌 检测
[期刊] 淡水渔业
[作者]
岳刚毅 吴志新 于艳梅 杨倩 曲艺 谢玲玲 陈孝煊
建立了克氏原螯虾(Procambarus clarkii)血淋巴、肌肉、肝胰脏中氟苯尼考及氟苯尼考胺的高效液相色谱检测方法。采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm×4.6 mmi.d,5μm)反相色谱柱,以A液(乙腈):B液(0.04 mol/L NaH2PO4、0.004 mol/L十二烷基硫酸钠和0.10%三乙胺)(体积比为30∶70)为流动相,225 nm紫外检测波长完成分析。结果显示:本方法在0.025~20 mg/L范围内浓度与峰面积呈良好的线性关系;组织的加标回收率为78.8%~94.2%,相对标准偏差小于8.16%,氟苯尼考在血淋巴、肌肉、肝胰脏的检出限分...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
何玮玲 胡序建 程欣 黄明 周光宏
【目的】建立含有扩增内标(IAC,Internal amplification control)的用于食品中猪肉和鸡肉成分鉴别的Taqman探针实时荧光PCR检测方法。【方法】分别基于猪的beta actin基因和鸡的transforming growth factor基因设计引物和探针;考察引物和探针的特异性与灵敏度;设计并构建扩增内标,优化体系中扩增内标浓度,建立内标实时荧光PCR体系;使用该检测体系对鲜肉和熟肉来源的DNA模板进行检测评价;应用该体系对市售38份样本进行盲样检测。【结果】含有扩增内标的Taqman探针实时荧光PCR体系能有效地进行食品中猪肉和鸡肉成分的快速检测,非目标物种...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
职通瑞 宋晓玲 张晓静 张盛静 黄倢
为了从对虾体内分离出的菌株中快速筛选出蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌,将蜡样芽孢杆菌与溶藻胶弧菌作为抗原,免疫SPF新西兰大白兔,获得免疫血清,效价均高于1:2000。将免疫兔血清作为一抗,HRP-羊抗兔血清作为二抗,建立了蜡样芽孢杆菌和溶藻胶弧菌快速检测的间接ELISA方法。此方法中,兔抗血清最佳稀释度为1:10000,菌液最佳包被浓度为106 CFU/ml;HRP-羊抗兔血清最佳稀释浓度为1:1000,可检测细菌最低浓度为104 CFU/ml。抗蜡样芽孢杆菌血清与苏云金芽孢杆菌有交叉反应,抗溶藻胶弧菌血清与其亲缘相近菌株无交叉反应,具有较强的特异性。2012年和2013年,分别从斑节对虾、中国对...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
庞文静 付明哲 张琪 何亚鹏 许信刚
【目的】原核表达小反刍兽疫病毒(Peste des petits ruminants virus,PPRV)的N蛋白,并以N蛋白为包被抗原建立血清间接ELISA检测方法。【方法】克隆PPRV N蛋白基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a中进行重组N蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化复性,并进行Western-blot鉴定。用复性后的N蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清中PPRV抗体水平的间接ELISA检测方法,并对其进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后用该方法对临床样品进行检测,检验其应用效果。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡大雁 钱冬 刘问 张友平 潘清清 陈昌福
从中华鳖中分离的嗜水气单胞菌致病株T0608经福尔马林灭活后,注射免疫新西兰兔,制备了高价免疫血清,血清的菌体凝集效价可达1/1 280;G蛋白亲和层析纯化兔IgG,将IgG用生物素标记,建立了生物素-亲和素双抗体夹心酶联免疫吸附法(BA-ELISA);其最低检出限为2.5×103cfu,相当于0.5 ng菌体蛋白,其检测灵敏度为ABC-ELISA(4.0×104cfu)和间接ELISA(4.0×104cfu)的16倍;特异性试验结果表明,本法与鱼类气单胞菌、拟态弧菌、海豚链球菌、大肠杆菌等无交叉反应。BA-ELISA可不经细菌培养直接检测人工感染48 h中华鳖的肝、肠道组织中的嗜水气单胞菌。...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
范盛先 袁宗辉 孔科 王大菊
以表皮葡萄球菌 2 6 0 6 9型 (Staphylococcusepidermidis,ATCC12 2 2 8)为测试菌 ,用微生物学杯碟法定量测定庆大霉素在猪肉和鸡肉组织中的残留。庆大霉素在磷酸盐缓冲液、鸡和猪的肌肉组织中的最低检测限分别为 0 .0 2 5 μg/ml、0 .0 5 μg/g和 0 .0 5 μg/ g ,在磷酸盐缓冲液中标准曲线的线性范围为 2 .5× 10-2 ～ 0 .8μg/ml。庆大霉素浓度为 0 .0 5、0 .10、0 .2 0 μg/g时 ,鸡肉组织中的回收率分别为 (85 .8± 4 .5 ) %、(90 .1± 5 .9) %和 (88.8± 5 ...
关键词：
庆大霉素 微生物学杯碟法 残留 检测
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
罗小清 张珍瑞 郭凡溪 郭洋洋 吴峰 余祖功
[目的]建立一种可靠、快速、灵敏的超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)用于猪可食性组织中氟尼辛残留量的检测。[方法]猪可食性组织(肌肉、皮脂、肝脏、肾脏)经绞碎、均质后,用乙酸乙酯-乙腈(体积比1∶1)提取,MCX固相萃取柱净化,Acquity UPLC BEH C_(18)色谱柱梯度洗脱,在电喷雾正离子(ESI+)下选用多反应监测(MRM)模式进行待测物的分析,外标法定量。[结果]该方法的检测限(LOD)与定量限(LOQ)分别为0.5μg·kg-1和1.0μg·kg(-1);待测物氟尼辛含
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈文帮 丁作坤 陶小平 曾明华 许世富 吴丽君
建立了检测鸡肉中阿德呋啉药物残留的高效液相色谱法(HPLC)。样品经氯仿提取,MCX固相萃取柱净化,XBD-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,以甲醇水溶液(体积分数50%)为流动相,260 nm处检测。方法在100～500 ng.mL-1范围内线性关系良好(R2≥0.999),检出限为25μg.kg-1。阿德呋啉在80、100、150和200μg.kg-14个添加水平时,平均回收率分别为61.4%、70.4%、88.4%和90.2%,相对标准偏差(RSD)小于10%。结论:该方法快速、灵敏、高效,适用于鸡肉中阿德呋啉残留的测定。
关键词：
鸡肉 阿德呋啉 药物残留 高效液相色谱法
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
王敏 王玮 吕青骎 徐幸莲 周光宏 李春保
[目的]本研究旨在建立一种简单、快速检测猪肉中氯丙嗪(CPZ)残留量的方法。[方法]以CPZ-牛血清白蛋白(BSA)为包被抗原,自制鼠抗CPZ单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测猪肉中CPZ含量的间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),同时优化检测条件并对该方法进行评价。[结果]采用自行制备的特异性鼠抗CPZ单克隆抗体,建立间接竞争ELISA检测方法,优化得到最佳反应条件:抗原包被稀释倍数为1∶10 000,单克隆抗体浓度为1μg·mL~(-1),酶标二抗稀释倍数为1∶1 000,最低检测限为0.51 ng·mL~(-1),线性检测范围为1.37～111.11 ng·mL~(-1)。线性回归直线方程为y=-1.252 6x+2.853 2,相关系数(R~2)为0.986 6,总变异系数(CV)为6.97%,空白猪肉添加回收率为96.90%～118.79%。[结论]建立的间接竞争ELISA方法特异性强,灵敏度、精密度、准确度和重现性良好,可用于猪肉组织中CPZ残留的快速检测。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
刘伟 匡光伟 陈小军 许朝爱 孙志良
为探明鸡粪中氟苯尼考的降解特性,采用气相色谱法,分别研究微生物、有机质、光照、氟苯尼考起始浓度与鸡粪中氟苯尼考降解的关系,以20℃恒温培养箱中避光培养的未灭菌、未去有机质的鸡粪中氟苯尼考降解为对照,结果表明,对照氟苯尼考的降解半衰期为1.9d,降解动力学方程为Ct=7.81×e-0.3699t,11d的降解率达95%;与对照相比,高温灭菌和去除有机质后,鸡粪中氟苯尼考的降解能力显著下降,半衰期分别提高到6.4、7.2d;光照处理与避光处理(对照)鸡粪中氟苯尼考降解的半衰期、降解速率常数和降解速率方程均无明显差异;氟苯尼考起始含量5、10mg/kg的半衰期差异不大,分别为1.8、1.9d,而20...
关键词：
氟苯尼考 鸡粪 微生物降解 半衰期
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
赵萍 储岳峰 高鹏程 贺英 赵海燕 逯忠新
利用绵羊肺炎支原体标准株Y98制备抗原,经超声破碎后作为包被抗原建立了间接ELISA检测方法用于检测绵羊肺炎支原体血清抗体.经方正滴定确定了抗原包被质量浓度为2.5μg.mL-1,血清样品稀释倍数为1∶64,兔抗羊IgG辣根过氧化物酶结合物最佳稀释倍数为1∶40000,抗原抗体最佳结合时间为1 h.试验结果确定的判定标准为:样品D490 nm(P)与标准阴性血清D490 nm(N)之比,即P/N≥3.0为阳性,P/N≤2.5为阴性,介于二者之间的为可疑.试验证明该方法具有良好的稳定性、重复性和特异性,并且与间接血凝试验相比较其敏感性高于后者.
关键词：
绵羊肺炎支原体 间接ELISA 检测
[期刊] 华北农学报
[作者]
宋帅 李春玲 臧莹安 郭海祥 李淼 杨冬霞 徐志宏
为了建立一种准确、快速的副猪嗜血杆菌病原夹心ＥＬＩＳＡ检测方法，以副猪嗜血杆菌外膜蛋白Ｐ５的特异性单克隆抗体１Ｅ２作为捕获抗体，兔抗副猪嗜血杆菌多克隆抗体作为检测抗体，通过方阵滴定优化夹心ＥＬＩＳＡ检测方法最佳反应条件，并对该检测方法进行特异性、敏感性验证以及临床样品的检测应用。结果显示，该检测方法中单克隆抗体１Ｅ２最佳包被浓度为３．４３４μｇ／ｍ Ｌ，兔抗副猪嗜血杆菌多抗的最佳稀释浓度为３．３５０μｇ／ｍ Ｌ，用１０ ｍｇ／ｍ Ｌ明胶３７℃封闭１ ｈ优于其他封闭液，辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔多体最佳使用浓度为１∶４ ０００。该检测方法的特异性试验结果显示可检测出１５个血清型的副猪嗜血杆菌病．．．
关键词：
副猪嗜血杆菌 单克隆抗体 夹心ELISA
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘永夏 刘建柱 成子强 周栋 王振勇 刘海涛 王林 柴同杰
【目的】针对猪附红细胞体g1基因编码的MSG1表面粘附蛋白(rMSG1)和以此蛋白制备的多克隆抗体,建立相应的ELISA方法进行猪附红细胞体的临床检测,并进行效果评估,以获得一种猪附红细胞体感染的有效检测手段。【方法】将MSG1-pET28c_E.coli BL21菌株,在适宜的条件进行诱导表达,经菌体破碎、层析等步骤获取纯化的目的蛋白。以纯化的rMSG1制备免疫原接种小鼠,获取符合要求的多克隆抗体。以rMSG1和多克隆抗体建立ELISA检测方法,分析其敏感性、特异性、符合性和重复性。【结果】接种后获得了符合效价的抗血清;基于rMSG1的间接ELISA方法临床检测猪附红细胞体感染率为46.25...
关键词：
猪附红细胞体 MSG1 ELISA 建立
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