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[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘剑华 刘连瑞 李灵娟 徐立新 严若峰 李祥瑞 宋小凯
[目的]在前期研究中,筛选到了存在于多种鸡球虫间的共同抗原泛素缀合酶结构域蛋白(UCE),本研究进一步分析其免疫原性,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[方法]提取纯化的堆型艾美耳球虫孢子化卵囊总RNA,用反转录PCR(RT-PCR)技术扩增堆型艾美耳球虫UCE基因(EaUCE),插入pVAX1质粒,构建真核表达质粒pVAX-EaUCE,通过RT-PCR和Western blot检测pVAX-EaUCE在鸡体内的转录和表达情况。经流式细胞术和间接ELISA法检测pVAX-EaUCE免疫后鸡体细胞免疫和体液免疫水平变化,分析其免疫原性。分别采用柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫及三者的混合卵囊人工感染雏鸡,观察感染前、后雏鸡体质量变化和排出卵囊减少量,评估其对多种球虫感染的免疫保护效果。[结果]EaUCE基因开放阅读框为444 bp,编码148个氨基酸,BLAST分析显示,柔嫩艾美耳球虫、堆型艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫UCE氨基酸序列同源性均大于95%。pVAX-EaUCE能够在鸡体内成功转录和表达。pVAX-EaUCE免疫后,鸡体的CD_4~+/CD_3~+和CD_8~+/CD_3~+细胞比例显著升高,IFN-γ、IL-2、IL-4、TNFSF15、IL-17D、TGF-β4 mRNA和IgY抗体水平显著升高,表明免疫该质粒能诱导细胞和体液产生免疫反应(P<0.05)。pVAX-EaUCE免疫后,与对照组相比,免疫组鸡体质量显著增加,卵囊产量明显下降,肠道损伤也相应减轻。[结论]鸡球虫共同抗原UCE具有良好的免疫原性,可对多种球虫感染提供部分免疫保护力,有望成为抵抗多种球虫感染的候选抗原。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陈思颖 黄剑梅 张杨 陈玉凤 丁文傒 刘佳斌 徐立新 严若峰 宋小凯 李祥瑞
[目的]本试验旨在评估重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2作为亚单位疫苗候选抗原的潜力。[方法]应用PCR技术分别扩增NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1与NA4-1-TA4-1-LDH-2-EMCDPK-1-IL-2基因,用LaserGene分析基因编码蛋白序列特性;表达重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2,经Western blot分析重组蛋白的免疫原性,采用流式细胞术检测蛋白免疫后鸡脾脏中CD~+_4和CD~+_8 T淋巴细胞的比值,经间接ELISA法检测鸡血清中细胞因子水平和特异性IgG水平以分析重组蛋白的免疫原性。取柔嫩艾美耳球虫、毒害艾美耳球虫、巨型艾美耳球虫和堆型艾美耳球虫新鲜卵囊经口感染免疫后的雏鸡,统计平均增重、病变计分、盲肠内容物卵囊数等指标,计算各组抗球虫指数(ACI),评估重组蛋白对球虫感染的免疫保护效果。[结果]LaserGene分析显示重组蛋白拥有密集且连续的T细胞表位,抗原指数高;Western blot分析显示重组蛋白可被4种艾美耳球虫的多克隆抗体识别,重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2均可提高机体CD~+_4/CD~+_3和CD~+_8/CD~+_3细胞比例,提高血清中IFN-γ、IL-4、IL-17、TGF-β和IgG抗体水平。以上结果表明重组蛋白具有良好的反应原性和球虫抗原性。免疫重组蛋白后试验组鸡平均增重高于对照组,卵囊产量下降明显,肠道病变程度减轻,抗球虫指数提升。[结论]重组蛋白rN1T1L2E1和rN1T1L2E1I2可作为多价多表位亚单位抗球虫疫苗的候选抗原。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陶建平 沈永林 李文超 辛玲 戴亚斌
用平均增重和病变记分或卵囊减少率等为试验指标,对11株巨型艾美耳球虫的免疫原性进行了分析。结果显示,各虫株每鸡免疫感染100个卵囊后,不仅对攻击1×105个同源株卵囊均产生大于70%的病变记分降低率,而且使每鸡攻击1×104个同源株卵囊时的卵囊产量均减少97.42%以上,在各虫株间无显著差异。各虫株对异源株的交叉免疫力程度不一致,美国株对国内10个虫株的卵囊减少率为20.09%~82.44%,仅3株大于75%,而国内10个虫株对美国株的卵囊减少率为27.43%~95.26%,有5株大于75%;扬州株、南通株、凤阳株、龙岩株、广州株和上海株间的相互卵囊减少率为-1.72%~96.67%,其中南通...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
古努尔·吐尔逊 米晓云 张壮志 石保新 吐尔洪·依米提 金映红 张妹 程小波 张旭 赵莉 张文宝
【目的】探索细粒棘球绦虫成虫表膜糖抗原的免疫性。【方法】细粒棘球绦虫成虫虫体冻融产物,经蛋白酶K消化,离心上清作为粗提表膜糖抗原,SDS-PAGE鉴定糖抗原成分,硫酸-蒽酮法测定多糖浓度,ELISA、Western-blot和IFA法分别检测免疫小鼠抗血清抗体效价和特异性以及确定抗原在虫体组织中的位置。【结果】SDS-PAGE图谱显示无蛋白条带出现,表明成虫膜蛋白被蛋白酶K完全降解;制备的糖抗原浓度为2.54mg.mL-1,初步确定为糖抗原。ELISA结果显示,随着免疫次数增加,抗血清中特异性抗体(IgG、IgM和IgA)效价也随之升高。与阴性血清相比,IgG、IgM和IgA的P/N值分别为4...
关键词：
细粒棘球绦虫 表膜糖抗原 抗血清
[期刊] 西南农业学报
[作者]
王敏 石团员 李锐 郝力力
【目的】为调查兔大型艾美尔球虫四川株的致病性和免疫原性。【方法】本研究利用实验室分离到的大型艾美尔球虫四川株进行了动物感染试验。【结果】5×103和5×104个卵囊组的SPF兔在接种后第49天,出现轻微的食欲减少症状;5×105组在接种后第68天持续中度腹泻,第8天体重与对照组有明显差异(P≤0.05),但均无死亡现象。感染剂量为5×103时卵囊产量最多,为2.31×108;免疫原性实验中,7×105个卵囊攻毒后,5×103卵囊免疫组卵囊排出最少,为6.28×104,各组体重与对照组相比无明显差异。【结论
关键词：
兔 大型艾美尔球虫 致病性 免疫原性
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵鑫 高美须 牟慧 沈月 王志东
【目的】Pen a 1是虾中的主要过敏原,已知其5个抗原表位在过敏反应中起着决定性的作用。用全蛋白抗体和表位特异性抗体,检测Pen a 1经体外模拟胃液(simulated gastric fluid,SGF)消化后其抗原表位免疫原性的变化情况,为研究人体消化对Pen a 1的影响机理及脱敏食品的制备提供理论依据。【方法】以刀额新对虾(metapenaeus ensis)为原材料,提取纯化虾过敏原Pen a 1,采用Fmoc化学法合成Pen a 1抗原表位的5个多肽片段(No.1—No.5),分别与载体蛋白KLH和牛血清蛋白BSA偶联制备人工免疫原和包被原。用Pen a 1和制备的多肽免疫原免...
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
查红波 蒋金书
通过用地塞米松处理鸡和用特异性抗原作刺激因子的微量全血淋巴细胞转化试验(LPA),研究了雏鸡抗 Eimeria maxima 再感染中细胞免疫现象。结果表明,地塞米松处理可损伤鸡抗 E.maxima 再感染的免疫力.这提示了 CD8+T 细胞、γIFN 及 IL-2等在抗 E.maxima 卵囊抗原刺激因子的微量全血 LPA结果表明,其刺激指数值与鸡抗 E.maxima 再感染抵抗力有关。此反应可用于体外监测鸡体抗 E.maxima再感染的抵抗力。
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
窦兰清 傅宝权 牛炳亨 朱兴全
为了明确猪在免疫旋毛虫抗原和感染旋毛虫肌幼虫后的抗体应答反应,应用 ELISA 法,肌幼虫凝胶层析纯化抗原、新生幼虫和成虫可溶性抗原,对用肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫 ES 抗原、成虫可溶性抗原、成虫 ES 抗原、灭活新生幼虫抗原制备的免疫原免疫后猪血清抗体以及攻击感染后的猪血清抗体进行了检测。用肌幼虫纯化抗原检测时,感染猪在感染后7d 抗体即出现变化,第14～21d 时上升较快,第28d 达最高值,抗体可持续6个月以上;各免疫组在第1次免疫后抗体滴度有不同程度升高,第2次免疫后上升较快,其中肌幼虫可溶性抗原及其 ES 抗原免疫组抗体应答较其它几种抗原免疫组强。用成虫可溶性抗原检
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈汉忠 谢婷 罗秀帧 姚玲 郭直 孙坚 欧阳康 韦晓宝
将野毒(强毒)混合卵囊制成微囊型强毒鸡球虫疫苗,探讨该剂型球虫疫苗拌料免疫鸡的效果。结果表明,3个剂量组(200、300、400个卵囊/羽)的增重和肉料比均与空白对照组相当,其中200个卵囊/羽的增重和肉料比还略优于空白对照组。微囊型鸡球虫疫苗使用方便,不需逐只鸡免疫,节省人力物力,剂量较容易控制,即使用于免疫小鸡,只要剂量适宜也能获得安全的效果。该剂型球虫疫苗的进一步完善和推广应用,将为我国鸡球虫病的免疫预防提供新的方法。
关键词：
微囊型球虫疫苗 免疫剂量 免疫效果 鸡
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘晓东 李敏 朱春华 陈强 林天龙
拟指环虫病是严重危害养殖鳗鲡(Anguilla sp.)的寄生虫病,为了寻求更为安全有效的免疫防治方法,对鳗鲡拟指环虫(Pseudodactylogyrus spp.)的结构蛋白及其免疫原性进行分析。以鳗鲡拟指环虫全虫蛋白为抗原,制备了鼠和鳗鲡抗拟指环虫免疫血清,ELISA检测效价分别为1∶51 200和1∶3 200。SDS-PAGE分析表明,虫体含有16 kD、21 kD、29 kD、37 kD、43.5 kD6、8 kD和110 kD等主要结构蛋白,其中29 kD的多肽为高丰度蛋白;Western blot证实免疫鳗和康复鳗血清均能识别25 kD、43.5 kD6、2 kD、81 kD等...
关键词：
鳗鲡 拟指环虫 结构蛋白 免疫原性
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
索勋 赵忠芳 李安兴 蒋建林 吕艳丽 王振华 吴文学 曲鸿飞
在实验条件下,研究了强效艾美耳牌鸡球虫苗对平养鸡群的免疫效果.实验Ⅰ比较了免疫鸡群和对照鸡群在接种后1,2,3,4,5,6周的肠道病变分。结果表明免疫鸡群较自然感染建立免疫的对照鸡群的免疫整齐度高,判断依据是免疫后2周盲肠细小、内容物亦少的眼观指标。实验Ⅱ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群在攻虫后的三处肠道病变.结果表明免疫鸡群对大剂量卵囊攻击有很强的抵抗力,不免疫不用药组对相同剂量的卵囊攻击抵抗力表现不整齐,不免疫用药鸡群对攻虫没有抵抗力.实验Ⅲ比较了免疫鸡群、不免疫不用药鸡群、不免疫用药鸡群的生长情况,结果表明免疫鸡群生长均匀(标准差小),但在接种后第7～14d 有个生长抑制...
[期刊] 华北农学报
[作者]
马毅 陈小强 王文杰 李晴 关宏 安晓荣 陈永福
为提高肌肉抑制素(Myostatin,MSTN)免疫原性,进行了乙肝核心抗原(HBcAg)作为分子佐剂可能性的研究。利用PCR方法获得了MSTN的C端片段,并分别在乙肝核心抗原的N端、C端及中间位点融合,构建了3个融合表达克隆:pET-30a-MSTN/HBcAg(N)、pET-30a-MSTN/HBcAg(C)和pET-30a-MSTN/HBcAg(M),转化大肠杆菌后IPTG诱导表达,然后利用Ni2+亲和层析纯化融合蛋白。应用重组蛋白免疫小鼠后利用间接ELISA法检测抗血清效价。结果表明:融合蛋白免疫效果要显著优于MSTN(P
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李润成 余兴龙 白霞 侯强红 罗维 刘忠华 向卫军
通过对GenBank近10年内收录的O型口蹄疫(FMD)病毒VP1基因序列的同源性比较分析,并根据中国、老挝、缅甸等国家FMDV流行毒株的基因序列,设计并合成了有群内抗原代表性的结构蛋白VP1全基因序列.将合成的序列克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,构建了VP1的表达质粒pETVP1.SDS-PAGE和Western-blot分析表明,该质粒的BL21(DE3)LysS转化菌在IPTG诱导下可特异性表达VP1蛋白,该重组蛋白以包涵体的形式存在,相对分子质量约30 000,能与口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清发生特异性反应.动物接种试验表明,重组蛋白能诱导小白鼠产生特异性抗FMDV抗体.
[期刊] 西南农业学报
[作者]
卢海亭 乔军 孟庆玲 彭叶龙 田路路 贡莎莎 才学鹏 陈创夫
【目的】本文研发了MO重组活疫苗。【方法】利用PCR技术从LM-SB5株基因组中扩增出rli60基因上下游同源片段a、b,从pMD19-T-meAg15中扩增出MO meAg15目的片段,采用重叠延伸PCR(SOE-PCR)技术将扩增得到的3个基因片段融合成ameAg15b,将其克隆测序鉴定。将ameAg15b目的基因亚克隆到pKSV7穿梭载体,构建pKSV7-ameAg15b重组穿梭质粒,将该重组穿梭质粒电转化至LM-SB5感受态细胞,在氯霉素、高温双重压力筛选重组菌LM-Δrli60-ameAg15b
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
相权珈 蒲响林 陆明敏 严若峰 徐立新 李祥瑞 宋小凯
[目的]本研究旨在评估巨型艾美耳球虫DNA疫苗候选抗原抵抗巨型艾美耳球虫感染的免疫保护效果。[方法]在之前的研究中，我们从巨型艾美耳球虫（E. maxima）cDNA表达文库中筛选到3个候选抗原EmLPL、EmTregIM-1和EmTregIM-2。本研究中，我们构建真核表达质粒pVAX1-EmLPL、pVAX1-EmTregIM-1和pVAX1-EmTregIM-2，用PLGA纳米颗粒包被所构建的质粒来制备纳米DNA疫苗PLGA-pVAX1-EmLPL、PLGA-pVAX1-EmTregIM-1和PLGA-pVAX1-EmTregIM-2，通过动物免疫攻虫试验观察疫苗的免疫保护效果。[结果]与对照组相比，疫苗免疫均能显著减少球虫感染引起的体重损失和卵囊产量(P < 0.05)。除了pVAX1-EmLPL免疫组外，其它5个免疫组的抗球虫指数（ACI）均在120～160，表明能对巨型艾美耳球虫感染提供部分免疫保护力。其中DNA纳米疫苗组的ACI值均在120以上，高于其对应的裸质粒免疫组。[结论]本研究所构建的3个巨型艾美耳球虫纳米DNA疫苗免疫均能为抵抗巨型艾美耳球虫感染提供免疫保护力。本研究为鸡球虫新型疫苗研发提供候选抗原，为鸡球虫病的免疫防控提供参考。
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