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[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 邵国青  毛洪先  蔡宝祥  钱建飞  吕立新  
鸡毒霉形体(MG)中毒株S6在固体平板上3次克隆后,在无细胞培养基上传100代以上进行致弱培养。用MGS6F108株培养物在雏鸡和SPF鸡胚上作6次回归感染,证明MGS6F108株不返强。通过气管环培养、纤毛运动损伤试验及对鸡点眼、滴鼻、左胸气囊注射不同代次培养物(F108、F113、F121、F150、F153),检查气囊病变和病原体再分离,结果证明F108以上代次的菌株低毒、安全,且有较强的免疫原性
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 屈小玲  毕丁仁  
用多聚酶链反应检测了鸡毒霉形体(Mycoplasmagalisepticum,MG)种内菌株的特异性DNA片段,并用该法对人工感染鸡及野外鸡群进行了MG感染的分子流行病学调查。结果表明,通过基因扩增及电泳,仅MG出现特异性扩增条带,最低能检出18pgMGDNA,说明该方法具有很高的特异性和敏感性。人工感染60只鸡,3d后即可用PCR查出MG阳性,6d后100%为阳性,对照鸡全部为阴性。与分离培养的结果完全一致。PCR对野外鸡群的MG检出率为10.5%~35%,平均为20%(16/79),与血清学检查结果基本一致;从PCR阳性鸡中,有61.5%(6/13)能分离到MG。这说明PCR在MG感染的分...
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 高俊伟  毕丁仁  胡思顺  彭秀丽  
研究了培养温度、培养时间、培养基pH值以及异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galacto-side,IPTG)浓度等不同条件对鸡毒霉形体黏附素截短蛋白在大肠杆菌中表达量的影响。经SDS-PAGE分析表明:诱导温度为28℃、诱导时间为9 h、培养基pH值为7.0、IPTG浓度为0.010 mmol/L时目的蛋白在细菌裂解沉淀和上清液中均最大量表达,分别达到30%和17%左右。上清液经GST.Bind Resin亲和层析分离纯化后,洗脱产物中pMGAⅣ融合蛋白纯度高达95%。Western-blot分析表明,该蛋白可被鸡毒霉形体阳性血清识别,具有较好的免疫学活性。
[期刊] 沈阳农业大学学报  [作者] 刘明春  佟恒敏  何剑斌  赵玉军  于立辉  
研究了氟喹诺酮新药司帕沙星对实验性感染大肠杆菌-败血霉形体病鸡的疗效。采用试管液体二倍稀释法测得司帕沙星对大肠杆菌(O78)和禽败血霉形体(PG31)的最小抑菌浓度均为0.00625mg·L-1。240只30日龄雏鸡随机分为司帕沙星3个不同剂量组(25,50,100mg·L-1)、环丙沙星对照组(50mg·L-1)、恩诺沙星对照组(50mg·L-1)、泰乐菌素对照组(500mg·L-1)、健康对照组和感染对照组,每组30只鸡,连续饮水给药5d,对实验性感染大肠杆菌-禽败血霉形体病鸡进行治疗试验。结果表明:司帕沙星3个不同剂量组、环丙沙星组、恩诺沙星组、泰乐菌素组的治愈率分别为86.7%、96....
[期刊] 中国农业科学  [作者] 于可响  马秀丽  袁小远  刘存霞  胡峰  凌红丽  李玉峰  黄兵  
【目的】将鸭坦布苏病毒BZ_2010株在SPF鸡胚上进行连续传代致弱;旨在选育安全性高、免疫原性好的活疫苗候选毒株。【方法】以SPF鸡胚为增殖宿主,将BZ_2010株连续传代,直至第120代;以1日龄雏鸭和30周龄的产蛋种鸭为试验对象,对第120代次毒株(命名为VC2)的安全性进行评价;以1d雏鸭为试验对象,对VC2株的返强情况进行评价;以18周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的中和抗体进行监测;以25周龄的种鸭为试验对象,对VC2株免疫后的保护效果进行评价;利用RT-PCR方法分别扩增BZ_2010株和VC2株的E基因和N54A基因,进行测序分析。【结果】传代病毒对鸡胚的平均死亡时间逐渐...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 杨树江  陈万芳  徐福南  陈溥言  
将从鹌鹑分离出的一株新城疫病毒,人工接种于不同日龄的朝鲜系鹌鹑、雏鸡及成年鸡.结果表明:1)该毒株对鹌鹑的致病力随鹌鹑年龄增加而减弱,以致对成年鹌鹑不产生任何临床症状;2)该毒株对雏鸡和成年鸡引起100%的致死性速发嗜肺脑型新城疫,能在鹌鹑与鹌鹑之间,鹌鹑与鸡之间水平传播.
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 陈仕怡  陈媛  赖隆永  李春燕  刘梦茜  袁晓琴  郑庆礼  许丽惠  王全溪  
选取传染性法氏囊病病毒(IBDV)强毒力代表株BC6/85和弱毒力代表株B87为研究对象,根据VP2基因保守区设计一对通用引物和两个限制性内切酶位点,分别扩增两个毒株的VP2基因,然后进行BamHⅠ和PstⅠ酶切,采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应(PCR-RFLP)分析酶切产物,并进行特异性、敏感性和重复性检测.结果表明:所设计的引物均可扩增两个毒株的VP2基因,大小约856 bp;经BamHⅠ和PstⅠ酶切后,BC6/85株的PCR产物被BamHⅠ和PstⅠ切出166、242和449 bp大小的3个片段,而B87株仅被PstⅠ切出242和615 bp大小的2个片段,且重复性好,特异性强.可见,采用PCR-RFLP分析IBDV VP2基因的方法操作简单,是一种能够快速鉴别IBDV强、弱毒株的可靠方法.
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 魏燕鸣  龚文孝  杨影  马季  邹忠  金梅林  
为建立禽腺病毒4型的禽源细胞感染模型,并考察细胞培养毒株对动物的致病性,将实验室2014-2017年间分离的5株血清4型禽腺病毒接种鸡肝癌细胞(leghorn male hepatocellular cells,LMH)并盲传,选取各病毒的LMH细胞培养物,按一定剂量经腿部肌肉注射接种4周龄SPF鸡;记录试验动物的发病情况,剖检采集发病或死亡鸡的脏器并制作病理切片,观察并分析病毒细胞培养物感染SPF鸡的组织病理变化。结果发现:5株血清4型禽腺病毒在LMH细胞上盲传至第4代时开始出现I群禽腺病毒所致的特异性细胞病变,提取培养物中病毒核酸并进行PCR鉴定,均能扩增出大小约564bp的特异性扩增片段,表明病毒能在LMH细胞上稳定增殖。选取各病毒第10代细胞培养物进行SPF鸡回归试验,发现细胞培养上清接种4周龄SPF鸡后第3天开始,有部分鸡开始精神沉郁,食欲消退、卧地不起瘫痪并迅速死亡,病理剖检及病理组织切片结果显示HB-1、HB-2、HB-3和SD-1毒株保持对4周龄SPF鸡的致病性,病死鸡中能观察到典型的组织病理学变化,而对照组不出现任何临床症状及病理变化。以上结果表明,LMH细胞可用于禽腺病毒增殖传代,是开展禽腺病毒分子致病机制研究的理想细胞模型。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 牛晓磊  薛泉宏  涂璇  袁虎林  
 采用琼脂块法研究了6株生防放线菌在不同培养基、培养时间及紫外线处理等多种条件下对2株辣椒疫霉的皿内拮抗作用。结果表明,6株放线菌(10号除外)在供试培养基上的拮抗性表现为PDA>黄豆粉>腐殖酸,PDA琼脂培养基可作为辣椒疫霉生防放线菌的筛选培养基;6株放线菌不同培养时间对辣椒疫霉的抗菌活性表现为13d>20d>7d,以培养13d时的拮抗效果较好;6株拮抗放线菌对陕西岐山辣椒疫霉P4的拮抗效果均优于青海辣椒疫霉P3菌株;用紫外线直接照射拮抗性放线菌琼脂块,不能准确地指示放线菌分泌的抗生素化学结构是否稳定,还需提取发酵产物进行紫外线照射处理加以判断。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)  [作者] 车勇良  俞伏松  陈少莺  陈仕龙  程晓霞  王隆柏  魏宏  胡奇林  
用PCR方法扩增了PRVFB弱毒株和PRVFA野毒株的gE,gI基因,对FB弱毒株的gE,gI基因进行克隆和测序,并将其与GenBank中收录的PRVFA的gE,gI基因进行了比较。结果发现,PRVFB和PRVFA株的gE基因有2处碱基发生了点突变,同源性为99%;gI基因有7处碱基发生了突变,其中1处发生了3个碱基的插入突变,同源性为98%。表明PRVFB在传代过程中发生了遗传性变异。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)  [作者] 李娜  陈淑莲  罗忠宝  黄宝钦  吴异健  
近日,在福建省南平市某鸡场发现一株新的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)流行株,并将其命名为IBDV-FJ02.为了明晰IBDV-FJ02株遗传变异情况和临床致病特征,进行了A节段基因组序列和特征性氨基酸位点的分析、基于A节段和B节段的新型基因型分类以及对无特定病原体(SPF)鸡致病性的研究,旨在为鸡传染性法氏囊病的防治提供依据.结果显示:IBDV-FJ02株A节段核苷酸序列与早期变异株E的同源性最高,达95.6%,与中国变异株SHG558在同一分支上;IBDV-FJ02株VP2-4-3蛋白氨基酸序列第222位氨基酸为T,第249位为K,第318位为D,参考变异株中仅GLS、E与其一致,位点N~(213)、T~(222)、K~(249)、 D~(318)、E~(323)均符合变异株的特征.根据新型基因型分类方案,显示IBDV-FJ02株属于A2dB1基因型,即IBDV新型变异株类群.致病性测定结果显示:IBDV-FJ02株感染3周龄SPF鸡并不会导致感染鸡只死亡,在感染后21 d内,主要引起鸡只法氏囊的严重萎缩和脾脏的轻微肿大.上述结果表明,IBDV-FJ02株是一种IBDV新型变异株,具有明显的IBDV变异株致病特点.
[期刊] 华中农业大学学报  [作者] 侯真真   张华伟   郝根喜   罗修鑫   宋文博   周明光   陈焕春   徐高原  
为获得安全性良好、免疫原性高的变异株弱毒苗,采用鸡胚成纤维细胞(CEF)传代培养的方法对猪伪狂犬病病毒流行毒株JS18株进行传代,最终获得JS18-150株,随后通过PCR鉴定、测序、致病力试验和免疫效力试验对JS18-150株体外生长特性、安全性和免疫原性进行初步研究。试验结果显示,在CEF上连续传代后,JS18株的gI、gE、US9基因缺失,获得的JS18-150株毒力已致弱,在CEF上适应性显著提高,与JS18株生长动力学相似;将JS18-150株以10~(7.0)TCID_(50)/mL接种仔猪,所有仔猪均未观察到任何临床症状,且体温均未超过40.5℃;JS18-150株以10~6TCID_(50)接种仔猪后能保护仔猪有效抵御JS18株和HBZL05株的攻击。结果表明,JS18-150株对仔猪安全性良好,可作为PRV弱毒疫苗研制的候选毒株。
[期刊] 中国农业大学学报  [作者] 尤永君  张国中  刘月焕  梁武  王腾  刘兴彩  沈元  王友  
为掌握近年来我国传染性支气管炎病毒的流行动态和变化规律,利用检测转化至克隆载体鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,应用MEGA5分析软件进行聚类分析,并对瑞普生物疫病诊断研究服务中心2010—2013年间从我国野外分离并测定的30株传染性支气管炎的S1基因序列与常用疫苗毒株和GenBank中代表性IBV毒株的对应基因序列进行比较,结果发现:1)30株野外分离株可分为2个基因型:LX4型和TW型,分别占总数的93.3%和6.7%;2)LX4型分离株S1基因和氨基酸序列与常见疫苗毒株序列差别很大,同源性仅分别为77.6%~86.3%和75.8%~85.7%;3)分析S基因裂解位点时发现同一...
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 宋秀红  赵化阳  高晓磊  刘思当  
将正常免疫的AA肉仔鸡于10、20及30日龄时,按抗体水平的高低分成2组(H组、L组),接种新城疫病毒建立人工致病模型,对攻毒鸡群的症状、病理变化及抗体水平进行动态观察。结果发现,日龄及抗体水平不同的肉仔鸡均表现非典型新城疫,淋巴组织广泛性坏死是其主要病变,L组比H组病情严重。发病率及病理变化的程度10日龄时攻毒低于20与30日龄攻毒,各感染组鸡的抗体水平均呈先迅速下降后逐渐回升的消长规律,但L组抗体水平始终低于H组。试验结果表明,日龄及抗体水平与抵御新城疫病毒的攻击能力密切相关。
[期刊] 南京农业大学学报  [作者] 郭小权  黄克和  陈甫  骆建兵  潘翠玲  
将100羽35日龄伊沙蛋鸡随机均分为对照组(含钙1.00%)和高钙组(含钙3.78%)。在饲喂高钙日粮32 d时对2组鸡作动脉血血气分析及血清电解质测定,并采用结肠造口术收集尿液,测定鸡尿液电解质的变化,以探讨高钙日粮对鸡体内酸碱度和电解质变化的影响。结果表明,高钙日粮能致鸡腹泻;高钙组尿量增加,尿液pH值较对照组显著升高;与对照组相比,高钙组鸡血液pH值、碳酸氢根以及剩余碱显著升高,动脉血氧分压、二氧化碳分压和血氧饱和度显著降低;高钙组血清无机磷和钾显著降低,血清钙显著升高,血清镁、氯稍有下降,钠稍有升高,但差异不显著(P>0.05);高钙组鸡尿液中的钾相对含量和24 h总量稍低于对照组(P...
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