- 年份
- 2024(7738)
- 2023(10900)
- 2022(9800)
- 2021(9189)
- 2020(7807)
- 2019(17709)
- 2018(17785)
- 2017(33624)
- 2016(18825)
- 2015(21228)
- 2014(21053)
- 2013(20844)
- 2012(19039)
- 2011(17130)
- 2010(16763)
- 2009(15044)
- 2008(14500)
- 2007(12364)
- 2006(10532)
- 2005(9002)
- 学科
- 济(68165)
- 经济(68090)
- 管理(49972)
- 业(47839)
- 企(39659)
- 企业(39659)
- 方法(34200)
- 数学(29609)
- 数学方法(29278)
- 学(19244)
- 农(18561)
- 中国(16726)
- 财(16622)
- 业经(15229)
- 地方(13859)
- 农业(12592)
- 理论(12206)
- 贸(11902)
- 贸易(11893)
- 和(11746)
- 环境(11678)
- 易(11527)
- 技术(11093)
- 制(11063)
- 务(11041)
- 财务(10982)
- 财务管理(10959)
- 企业财务(10404)
- 教育(10078)
- 划(9945)
- 机构
- 大学(264427)
- 学院(262250)
- 管理(102298)
- 济(94562)
- 经济(92360)
- 理学(90050)
- 理学院(88933)
- 研究(88889)
- 管理学(87162)
- 管理学院(86727)
- 中国(62615)
- 科学(62471)
- 京(56280)
- 农(54423)
- 业大(48132)
- 所(46600)
- 农业(43512)
- 研究所(43373)
- 财(41099)
- 中心(39854)
- 江(37320)
- 北京(34686)
- 范(34555)
- 师范(34068)
- 财经(33911)
- 院(31897)
- 经(30922)
- 技术(30780)
- 州(30282)
- 农业大学(29171)
- 基金
- 项目(191619)
- 科学(148646)
- 基金(138188)
- 研究(132646)
- 家(123166)
- 国家(122168)
- 科学基金(103499)
- 社会(79921)
- 省(77245)
- 社会科(75594)
- 社会科学(75571)
- 基金项目(74814)
- 自然(71644)
- 自然科(69934)
- 自然科学(69911)
- 自然科学基金(68630)
- 划(65143)
- 教育(60716)
- 资助(56236)
- 编号(53215)
- 重点(43091)
- 成果(42701)
- 部(40537)
- 发(40377)
- 创(40140)
- 计划(38361)
- 科研(37734)
- 创新(37467)
- 课题(36841)
- 大学(34970)
共检索到363812条记录
发布时间倒序
- 发布时间倒序
- 相关度优先
文献计量分析
- 结果分析(前20)
- 结果分析(前50)
- 结果分析(前100)
- 结果分析(前200)
- 结果分析(前500)
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
付连军 刘磊 张磊 贺元欣 莫索 王会岩
【目的】克隆和表达鸡β-防御素3(Gal-3)基因,并对其抑菌活性进行研究,为寻找替代抗生素的抗菌肽提供试验依据。【方法】利用RT-PCR方法,从鸡心脏中分离并克隆了鸡Gal-3基因,将其与分子伴侣基因SUMO相融合,再将该融合基因与原核表达载体pET-20b连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中,经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;最后,对Gal-3融合蛋白进行纯化,并对表达产物进行体外抑菌试验。【结果】通过RT-PCR扩增获得了约240bp的鸡Gal-3基因,经IPTG诱导获得约26ku的蛋白。IPTG在终浓度为0.6mmol/L,33℃诱导4...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
金立波 刘秀明 刘磊 刘敏 杜淑环 朱海林 王会岩
【目的】在紫花苜蓿中表达鸡β-防御素3(Gal-3),为利用紫花苜蓿规模化生产Gal-3奠定基础。【方法】PCR扩增鸡Gal-3基因,以潮霉素作为转基因植物的选择标记,将鸡β-防御素Gal-3基因克隆至表达载体pCAM-BIA1390R(简写为p1390R)上,构建重组表达质粒p1390R-Gal-3;采用冻融法将质粒p1390R-Gal-3转入根瘤农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化至紫花苜蓿;采用PCR检测、Southern blot筛选阳性转基因苜蓿植株,并对Gal-3蛋白进行抑菌活性研究。【结果】PCR扩增获得了240bp的鸡Gal-3基因,成功构建植物表达载体p1390R-Ga...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
毛秀敏 张雪梅 杨帆 贺三刚 刘明军
【目的】克隆和表达新疆荷斯坦牛中性粒细胞防御素5(BNBD5)基因,对BNBD5蛋白进行纯化并分析其抗菌活性。【方法】利用RT-PCR方法扩增新疆荷斯坦奶牛BNBD5的cDNA序列,将BNBD5 cDNA克隆到原核表达载体pGEX-4T-2,测序分析后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。经IPTG诱导后,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blotting分析;利用GST亲和柱纯化BNBD5蛋白,并进行体外抑菌试验。【结果】通过PCR扩增获得了218bp的牛BNBD5全长cDNA序列,经IPTG诱导,获得了约33 ku的牛BNBD5蛋白。牛BNBD5蛋白在15~25℃培养时的可溶性较...
[期刊] 华北农学报
[作者]
陆玉建 吴信明 管宇 张松林 李树芳 韩文瑜 沈志强
为了提高ＭＤＣＫ细胞表面禽流感病毒（ＡＩＶ）受体的水平，以１２日龄的ＳＰＦ鸡胚为试材，通过反转录ＰＣＲ扩增唾液酸转移酶Ⅰ基因（Ｓｔ３ｇＡｌⅠ），并将回收的片段插入到ＰＭＤ１８－ｔ载体中。酶切ＰＭＤ１８－ｔ－Ｓｔ３ｇＡｌⅠ和ＰＣＩ－ｎｅｏ质粒，将目的片段进行连接，构建含有Ｓｔ３ｇＡｌⅠ基因的真核表达载体。利用脂质体介导法转染ＭＤＣＫ细胞，在ｇ４１８的筛选下，获得具有抗性的转基因细胞系。通过细胞克隆化培养和ＰＣＲ检测，筛选可稳定表达Ｓｔ３ｇＡｌⅠ基因的细胞株。结果表明，从鸡胚中克隆的Ｓｔ３ｇＡｌⅠ基因成功的插入到ＰＣＩ－ｎｅｏ质粒，从而实现真核表达载体ＰＣＩ－ｎｅｏ－Ｓｔ３ｇＡｌⅠ的构建。在ｇ４１．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
符梅 熊显荣 兰道亮 李键
【目的】克隆与表达牦牛β-防御素5(BNBD5)基因,检测其重组蛋白的体外抗菌活性。【方法】采用RT-PCR方法从牦牛肺组织中扩增BNBD5基因成熟肽编码区,根据已发现的哺乳动物β-防御素5和部分禽β-防御素5的序列构建遗传进化树。将BNBD5基因亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)的BamHⅠ和XhoⅠ双酶切位点上,构建重组表达质粒pET32a-BNBD5。将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG于37℃进行诱导表达,SDSPAGE检测融合蛋白的表达情况,并对该重组蛋白进行纯化,测定其体外抑菌活性。【结果】克隆得到了BNBD5基因成熟肽编码片段,其长度为138bp,编码45个氨基酸...
关键词：
牦牛 β-防御素5 重组蛋白 抑菌活性
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
白莉 陈亚东 夏永涛 许式见 胡谋 沙珍霞
β-防御素是一类富含半胱氨酸的阳离子抗菌肽,在脊椎动物免疫系统中发挥重要作用。本研究基于转录组Solexa测序结果,利用PCR和荧光定量PCR技术对俄罗斯鲟(Acipenser gueldenstaedti)β-防御素基因进行了克隆和表达模式分析。结果显示,俄罗斯鲟β-防御素cDNA片段长度为333 bp,包含开放阅读框(Open reading frame,ORF)213 bp,推测编码71个氨基酸;SMART分析表明,该基因包含23个氨基酸的信号肽,1个防御素-beta-2结构域,6个保守的半胱氨酸残
[期刊] 中国农业科学
[作者]
廖文艳 马得莹 刘胜旺 韩宗玺
【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素9(AvBD9)基因,在原核表达重组鸭AvBD9蛋白;研究重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【方法】采用RT-PCR法,从鸭肝脏组织中扩增鸭AvBD9基因,测定该基因在鸭各组织器官中的分布;将鸭AvBD9基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上,构建重组表达质粒pGEX-duckAvBD9,将重组质粒转化大肠杆菌BL21,用IPTG诱导表达;亲和层析纯化蛋白,利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定重组鸭AvBD9蛋白的体外抗菌活性与理化特性。【结果】从鸭肝脏组织中克隆得到鸭AvBD9基因,序列分析表明该基因大小为204bp,前体肽包括67个氨基...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
武建明 王长法 何洪彬 胡桂学 杨宏军 杨少华 高运东 仲跻峰
【目的】实现荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组BNBD12的抗菌活性。【方法】RT-PCR扩增荷斯坦牛中性粒细胞BNBD12基因,序列分析后人工合成了适于在大肠杆菌中表达的BNBD12成熟肽,构建原核表达载体pET32a(+)/BNBD12,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过琼脂扩散法分别确定重组蛋白对牛源乳腺炎主要致病菌革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌效果,应用扫描电镜观察重组蛋白的杀菌效应。【结果】测序结果表明扩增片段长度为180bp,可编码含60个氨基酸的成熟蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析显示人工合成的BN...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王瑞琴 廖文艳 马得莹 韩宗玺 刘胜旺
【目的】从鸭组织中克隆鸭β-防御素(AvBD)2基因,在大肠杆菌中高效表达,检测重组鸭AvBD2蛋白的生物学特性。【方法】应用RT-PCR技术从鸭胰腺组织中扩增鸭AvBD2基因,根据已发现的禽β-防御素和部分哺乳类动物β-防御素-2的氨基酸序列构建系统进化树,将该基因克隆到大肠杆菌原核表达载体pGEX-6p-1上进行原核表达,对该重组蛋白进行纯化,测定体外抗菌活性与理化特性。【结果】鸭胰腺组织中克隆出鸭AvBD2基因的cDNA大小为195bp,编码64个氨基酸。同源性分析表明,鸭AvBD2与其它物种AvBD2同源性较高。凝胶电泳结果显示重组鸭AvBD2蛋白在原核高效表达(分子量约为32kD),...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张 涓 陈思思 何玉慧 黄金海 刘小玲 陈孝煊 袁改玲
从团头鲂（Megalobrama amblycephala）中克隆出β-防御素1（maBD-1）基因，检测该基因在组织中的分布，及在病原菌感染后该基因表达量的变化情况。将maBD-1基因重组到pGEX-KG原核表达载体上，构建重组质粒pGEX-KG-maBD-1，重组质粒经转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达，将融合蛋白免疫日本大耳白兔，制备该融合蛋白的多克隆抗体，并检测血清效价。 结果表明：maBD-1基因ORF全长为204 bp，编码67个氨基酸。该基因在组织中广泛分布，病原菌感染后头肾和脾脏组织maBD-1基因表达量显著上调。经间接酶联免疫分析（ELISA）获得的抗血清效价为1∶3 2...
关键词：
团头鲂 maBD-1 克隆 表达
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张涓 陈思思 何玉慧 黄金海 刘小玲 陈孝煊 袁改玲
从团头鲂(Megalobrama amblycephala)中克隆出β-防御素1(maBD-1)基因,检测该基因在组织中的分布,及在病原菌感染后该基因表达量的变化情况。将maBD-1基因重组到pGEX-KG原核表达载体上,构建重组质粒pGEX-KG-maBD-1,重组质粒经转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达,将融合蛋白免疫日本大耳白兔,制备该融合蛋白的多克隆抗体,并检测血清效价。结果表明:maBD-1基因ORF全长为204bp,编码67个氨基酸。该基因在组织中广泛分布,病原菌感染后头肾和脾脏组织maBD-1基因表达量显著上调。经间接酶联免疫分析(ELISA)获得的抗血清效价为1∶3 200...
关键词：
团头鲂 maBD-1 克隆 表达
[期刊] 华北农学报
[作者]
陈红英 宋凌云 崔保安 胡功政 贾艳艳 郭显坡
通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序。序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag融合。经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Westernblot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白。表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Ve...
关键词：
鸡 α干扰素 克隆 原核表达 抗病毒活性
[期刊] 水产学报
[作者]
李佩芬 林志华 包永波
通过已构建的泥蚶转录组文库EST,利用SMART RACE技术扩增得到泥蚶Tg-TIMP-3基因全长c DNA序列,并对其进行生物信息学和组织表达相关分析。结果显示,泥蚶Tg-TIMP-3 c DNA全长为804 bp,其中开放阅读框为570 bp,编码189个氨基酸;氨基酸序列比对发现其氨基酸序列与其他动物的相似性并不高,与长牡蛎的相似性仅为35.8%,但TIMP基因的两个功能域(N端和C端)相对保守。qRT-PCR检测结果显示:Tg-TIMP-3 mRNA在鳃中表达最高,外套膜和肝胰腺次之,表达量最低的是血液。在不同浓度重金属镉(Cd)攻毒后,泥蚶鳃中的Tg-TIMP-3 mRNA表达量先...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
张家荣 秦宏宇 谢婷 张效宇 李飞霞 吕俊贤 贾玉东
类胰岛素生长因子3 (insulin-like growth factor 3， IGF3)在硬骨鱼类性别分化过程中扮演重要角色，但其是否影响卵巢发育尚不明确。本研究以欧亚养殖良种大菱鲆(Scophthalmus maximus)为实验材料，通过RACE (rapid-amplification of cDNA ends)克隆技术，获得了IGF3全长cDNA序列，分析了其生物信息学特征，预测了其与IGF特异性受体(IGF receptors， IGF-1R， IGF-2R)结合情况，查明了其组织和卵巢不同发育时期表达规律。结果显示，大菱鲆IGF3 cDNA全长为1 255 bp，编码259个氨基酸。生物信息学分析发现，IGF3为亲水性蛋白，具有典型的IGF特异性结构域和信号肽序列，同大西洋庸鰈(Hippoglossus stenolepis)同源性最高；蛋白质三级结构域由3个α螺旋串联而成，同IGF-1R和IGF-2R紧密结合。组织表达分析显示，igf3在大菱鲆各个组织中均有分布，雌、雄大菱鲆表达规律显著不同，但皆在脑组织中表达最高。在卵巢发育过程中，igf3在卵黄生成后期表达量显著上升，在核迁移期达到最高，在闭锁期显著下降。以上结果表明，大菱鲆IGF3具有典型的IGFs家族结构特征，作为局域性内分泌因子，在组织中广泛分布且具有显著的性别二态性，同时参与调控了卵巢发育和成熟。相关结果为深入解析IGF3对大菱鲆卵巢发育和卵母细胞成熟的影响及其作用机制奠定了基础，同时也为探究鱼类IGF3新功能提供了重要思路。
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
武丹阳 杨洋 李慧玉
根据已有的白桦Betula platyphylla茎尖、叶片及木质部等45个转录组信息,获得3条白桦BEE基因的全长c DNA序列,分别命名为BpBEE1,BpBEE2和BpBEE3。对3个BpBEE基因进行了生物信息学分析和实时定量聚合酶链式反应分析,结果表明:3个基因具有典型的结合DNA及特异识别序列E-box和N-box,属于b HLH类转录因子。这3个基因与拟南芥Arabidopsis thaliana中At BEE基因亲缘关系较近,属于b HLH超家族第25亚类。在白桦生长季内,BpBEE1,B
文献操作()
导出元数据
文献计量分析
导出文件格式：WXtxt
删除
