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[期刊] 淡水渔业
[作者]
吴小平 邹世平 李晓莉 罗晓松 董栩 龙良启
通过萃取回收和色谱条件优化,建立了运用高效液相色谱法(HPLC)检测鳗鲡血浆和肌肉中乙胺嘧啶的方法。结果显示:在柱温30℃、检测波长236 nm、流动相乙腈、水、乙酸体积比为15∶85∶0.25和流速1.0 mL/min的色谱条件下,在设置鳗鲡血浆及肌肉中乙胺嘧啶浓度分别在0～5.0μg/mL与0～2.0μg/g范围内,相关曲线方程分别为y=766.68x+9.2511与y=853.96x+8.0956,相关系数(r)分别为0.9998和0.9999。在萃取回收中,向血浆和肌肉样品中分别加入适量无水硫酸钠,再分别用乙腈、三氯甲烷体积比为10∶1和5∶5的混合液萃取两次,回收率均达80%以上,日...
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
廖碧钗 樊海平 余培建 俞道进 林丽聪
应用高效液相色谱法建立欧洲鳗鲡血浆和肌肉中甲苯咪唑(MBZ)及其代谢物5-羟甲基苯基苯并咪唑(MBZ-OH)和二氨基-5-苯基苯并咪唑(MBZ-NH2)浓度的检测方法.结果表明:选用C18色谱柱,检测波长为248 nm,样品经Na2CO3溶液和乙酸乙酯提取,以乙腈和醋酸—醋酸钠缓冲液(pH 4.5)为流动相,在0.01-1.00μg.mL-1内,MBZ及其代谢物的线性关系良好,标准品添加平均回收率均大于90%,日内、日间变异系数均低于6.70%,最低检测限为3 ng.mL-1.
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林而舒
为建立鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus,EeCV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，根据EeCV复制相关蛋白(replication-associated protein, RAP)基因的保守序列设计特异性引物，并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。qPCR的阈值循环数(Cycle threshold value,C_t值)与标准品的拷贝数线性关系良好，且线性范围广(1.0×10~8～10~2拷贝数/μL);可特异性检测EeCV,而对鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus)、猪圆环病毒(Porcine circovirus)、鸭圆环病毒(Duck circovirus)无扩增；重复性强，组内和组间变异系数均小于3%;灵敏性高于普通PCR法10倍。且qPCR检测后发现，在感染EeCV的鳗鲡体内重要器官均可检测到EeCV,其中鳃的病毒量显著高于其他组织；对保存的44份疑似鳗鲡病毒性感染病料进行检测，阳性检出率为98%,而普通PCR法的阳性检出率为73%。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
李晓琳 王勤 朱振营 吴绍强 仇松寅 刘晓飞 孙敏 潘登科 林祥梅
［目的］本试验旨在建立肌肉生成抑制素基因（ｍｙｏｓｔａｔｉｎ，ｍｓｔｎ）敲除猪的快速检测方法，为该品系转基因猪及其产品的检测提供技术支持。［方法］根据猪β２－微球蛋白基因（β２－ｍｉｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，ｂ２ｍ）设计猪内源性基因引物，标记基因新霉素磷酸转移酶基因（ｎｅｏｍｙｃｉｎ ｐｈｏｓｐｈｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅⅡ，ｎｐｔⅡ）和测定的边界序列设计特异性引物，对引物的量进行调整，优化反应条件。对ｐｃｒ的敏感性和特异性进行检测，并应用建立的方法对随机选取的３２份猪肺和脾脏组织样品进行检测，均仅扩增出ｂ２ｍ条带。［结果］该方法的最佳退火温度为５６℃，最低能检测出含１％ｍｓｔｎ基因敲除基因组成分．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
高露姣 蔡友琼 姜朝军 钱蓓蕾 于慧娟 徐捷
为了解孔雀石绿及其有毒代谢产物无色孔雀石绿在鱼体中的蓄积与消除规律,达到对孔雀石绿的禁用监控,本试验对初始体重为(12.42±2.18)g的欧洲鳗鲡进行0.1 mg.L-1和0.2 mg.L-1浓度(P1和P2组)孔雀石绿药浴24 h,再转移到清水中养殖120 d,采用高效液相色谱法测定肌肉组织中孔雀石绿及无色孔雀石绿的残留。在药浴过程中,鳗鲡肌肉组织中孔雀石绿平均含量不断升高,P1和P2组分别于药浴12 h和24 h达到最高值(720.5±192.6)μg.kg-1和(1404.8±421.9)μg.kg-1;在清水养殖过程中,孔雀石绿在鳗鲡肌肉中含量波动式下降,并于水浴2160 h(90 ...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
丁武 寇莉萍 宋社果 范孝丰
用色彩色差计跟踪检测贮藏过程中新鲜肌肉颜色的变化,同时结合感官检验和蛋白沉淀反应——硫酸铜沉淀法对同一样品进行对照检测,研究了肌肉在贮藏过程中颜色的变化与肌肉新鲜度的关系。结果表明,用色彩色差计法检测原料肉的新鲜度是可行的,与其他理化方法相比较,具有精密度高、测量时间短等优点。用色彩色差计测定的L*值(亮度变量)、a*值(红度变量)与肉品贮藏时间(T)存在显著的线性关系。
关键词：
肌肉 色彩色差计 新鲜度 光学特性
[期刊] 水产学报
[作者]
孔文迪 陈曦 杨金先 葛均青
为了建立美洲鳗鲡腺瘤病毒（AEAdoV）的检测方法，根据AEAdoV福建株（AEAdoV-FJ）的superfamily 3 helicases (S3H)序列，设计引物，建立了AEAdoV的普通PCR和qPCR检测方法；进一步评价检测方法的灵敏性、特异性及重复性，利用两种方法对美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料进行了检测，并对美洲鳗鲡体内不同组织的病毒含量进行了分析。结果显示，普通PCR扩增的目的片段长度约300 bp，利用其构建了qPCR质粒标准品，其拷贝数与qPCR的阈值循环数(C_(T))线性关系良好，线性范围广，标准曲线相关系数(R~(2))达到0.999，扩增效率为105.067％；建立的普通PCR法和qPCR的最低检测AEAdoV拷贝数分别为100个和10个。上述两种方法均可特异性检测AEAdoV，而对蛙虹彩病毒（RGV）、鳗鲡疱疹病毒（AngHV）、鲤疱疹病毒（KHV）、对虾白斑综合症病毒（WSSV）、日本鳗鲡内皮细胞坏死病毒(JEAdoV)和花鳗鲡腺瘤病毒(MEAdoV)均无扩增反应；qPCR法的组内和组间变异系数均小于2%，表明其重复性良好。临床应用结果显示，35份美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病料，采用普通PCR法的AEAdoV检出率为82.8%，而qPCR法的AEAdoV检出率为97%。对美洲鳗鲡不同组织的病毒含量分析结果显示，心脏、肝脏、鳃、鳍的AEAdoV相对含量较高，而黏液、皮肤和脾的病毒含量相对较低。研究表明，建立了AEAdoV的灵敏度高、特异性强的普通PCR和qPCR检测方法，证实AEAdoV与美洲鳗鲡“出血性烂鳃”病密切相关，且在感染鳗鲡主要组织中都存在。上述结果对于研究AEAdoV的致病性，开展其流行情况和病原学情况分析具有重要意义。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
英瑜 李健
将磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine,SM2)与牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)偶联,分别作为免疫原及包被原,建立了水产品中磺胺二甲嘧啶间接竞争ELISA检测方法。实验结果表明,理想的磺胺二甲嘧啶人血清白蛋白(SM2HSA)包被抗原浓度为1mg/L,酶标二抗(羊抗兔IgG HRP)工作浓度为1/1000,多抗(SM2PcAb)工作浓度为1/3200,最适检测范围为10～200μg/L,最低检测限为1.89μg/L,本实验所建立间接竞争ELISA检测方法的孔间差异为2.56%,板间差异为5.14%,实验重复性好。在实验浓度范围内,磺胺二甲嘧啶(Sulfamethazine)...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
郑斌 赵红萍 冷凯良 于慧娟 汪云泉 陈雪昌 钟志
本研究建立了高效液相色谱-荧光检测法测定鳗鲡(Anguilla japonica)中孔雀石绿和结晶紫残留量的新方法。样品中残留的孔雀石绿或结晶紫用硼氢化钾还原为其相应的代谢产物隐色孔雀石绿或隐色结晶紫,用乙腈、乙酸铵缓冲溶液提取,二氯甲烷液液萃取,PRS固相萃取柱净化,反相色谱柱分离,荧光检测器检测,外标法定量。孔雀石绿和结晶紫混合标准工作溶液质量浓度范围为1~600μg/L时,该方法的线性关系极好,相关系数均为0.9999。该方法定量检出限为0.4μg/kg。当空白样品中孔雀石绿和结晶紫添加水平为0.4~100μg/kg时,孔雀石绿回收率为70.0%~90.6%,结晶紫回收率为73.0%~8...
关键词：
荧光检测 孔雀石绿 结晶紫 鳗鲡
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李丽 赵艳丽 郭晓宇 郭咏梅 郑亚光 周艳 闫素梅 张勇伟
为探究饲粮能量水平对肉驴血浆及肌肉氨基酸含量的影响，本研究选用年龄为1岁、体重相近（（150±25） kg）的德州肉驴（公）36头，分为低能量（LEG）、中能量（MEG）和高能量（HEG）3个组，采用舍饲育肥方式，分别饲喂消化能（以干物质计）为12.08、13.38和14.40 MJ/kg（育肥前期，1～45 d）、13.01、14.27和15.60 MJ/kg（育肥中期，46～90 d）以及13.54、14.93和16.23 MJ/kg（育肥后期，91～135 d）的饲粮。试验结束后，测定血清生化指标、血浆及背最长肌、臂三头肌、股二头肌以及臀肌中的氨基酸含量及肌肉中蛋白质含量。结果表明：1）不同饲粮能量水平间的肌肉蛋白质含量差异不显著（P>0.05）;MEG血浆中功能性氨基酸（FAA）、呈味氨基酸（DAA）含量显著高于LEG和HEG(P<0.05),LEG血浆中FAA和DAA含量显著高于HEG(P<0.05)。2)MEG显著提高血浆和股二头肌中必需氨基酸（EAA）、支链氨基酸（BCAA）含量以及EAA/总氨基酸（TAA）、EAA/非必须氨基酸（NEAA）(P<0.05)，显著降低了股二头肌中NEAA和DAA含量（P<0.05）。3)MEG的血清总蛋白含量显著高于LEG(P<0.05)，但与HEG相比差异不显著（P>0.05）。MEG、HEG的血清葡萄糖和胆固醇含量极显著高于LEG(P<0.001)，但MEG和HEG两组间无差异，尿素含量变化规律与之相反。HEG和LEG血清甘油三脂和游离脂肪酸含量显著高于MEG(P<0.05),HEG的甘油三酯含量显著高于LEG，游离脂肪酸含量显著低于LEG(P<0.05)。随着能量水平的增加，高密度脂蛋白含量显著增加（P<0.001）。综上，肉驴育肥前期、育肥中期以及育肥后期饲喂中能量水平的饲粮，可使肉驴肌肉的AA平衡性较好，肌肉的营养价值较高。本研究为通过营养调控提高肉驴的育肥性能和改善肉品质提供参考。
关键词：
肉驴 能量水平 氨基酸 血清生化指标
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
马荣荣 胡鲲 王印庚 吴冰醒 杨先乐
对高效液相色谱法测定草鱼和鲫肌肉组织中"美婷"原料药残留的前处理方法进行探讨。结果表明:以甲醇作抽提剂、二氯甲烷作净化剂,振荡离心,正己烷去脂,30℃旋转浓缩蒸发的前处理方法,快速、准确、经济、实用性强。该方法"美婷"原料药的最低检测限可达1.0μg/kg;在加标水平为1.0~100μg/kg时,回收率为67.72%~95.52%;相对标准偏差为7.76%~37.81%。该前处理方法适合检测"美婷"原料药在鱼体内的残留。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
龚小玲 李思发 蔡完其 杨琴玲 王浩
采用小片段克隆法构建了澳洲鳗鲡(Anguilla australis)的部分基因组文库,并用地高辛标记的(CA)15作探针筛选阳性克隆,共获得76条微卫星序列,其中10次以下CA连续重复序列占83.67%,没有检测到30次以上的连续重复序列。根据微卫星序列两端足够长的侧翼序列,设计引物55对,选择合成引物26对,用澳洲鳗鲡3个个体的混合基因组进行引物筛选,其中的18对具有清晰的扩增条带。将筛选出的18对引物对澳洲鳗鲡1个群体的40个个体进行了遗传多样性分析,其中1对引物扩增产物为单态,17对扩增产物呈现多态;17对扩增多态的引物在40个个体中扩增出等位基因数目为5～14,平均为9个。该澳洲鳗鲡...
关键词：
澳洲鳗鲡 微卫星 分子标记
[期刊] 中国农业科学
[作者]
聂雯莹 罗晓琴 李金超 李行 吴广 王琳琛
【目的】苯乙醇胺A为一种新型违禁添加剂,目前的检测方法繁琐耗时,故建立动物尿液中苯乙醇胺A胶体金免疫层析快速检测方法。【方法】通过苯乙醇胺A与溴代戊醛发生亲核取代反应,制备得到苯乙醇胺A半抗原,将苯乙醇胺A半抗原与载体蛋白偶联得到免疫原和包被原,经TNBS法测定半抗原与载体蛋白偶联比。用免疫原免疫BALB/c小鼠,制备特异性单克隆抗体,采用间接竞争ELISA方法测定单克隆抗体的灵敏度。选取与苯乙醇胺A结构类似的13种同类药物利用间接竞争ELISA方法进行单克隆抗体特异性的测定,计算交叉反应率。并通过胶体金、单克隆抗体-胶体金标记物、结合物释放垫、反应膜、样品吸收垫的制备以及试纸条的组装,建立了...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨灵 王青秀 杨航 师泽晨 苏立恒 吴霆 林蠡 邹娟
脆度是脆肉草鱼品质重要检测指标之一，过度脆化的脆肉草鱼会出现溶血、缺氧和一些器官的病变，因此亟需研发一种检测脆肉草鱼脆度的方法。实验提出一种基于拉曼光谱技术检测脆肉草鱼脆度的方法。首先，通过对不同脆化时间的脆肉草鱼拉曼光谱进行PCA分析，结果显示，拉曼光谱能够应用于不同脆化时间脆肉草鱼脆度鉴别。肌肉总蛋白质结构中的α-螺旋随着脆化时间增加而减少，β-折叠随着脆化时间增加而增加，无规则卷曲在脆化初期变化较大，脆化后期变化不明显。其次，采用SG、SNV、MSC和Normalize 4种预处理方法预处理拉曼光谱数据，发现Normalize的预处理效果最好，预测集RMSEP 为2.33，R~(2)为0.73；再次，采用PLSR、SVR、BPNN建立脆肉草鱼脆度与拉曼光谱信息关系模型，预测集RMSEP分别为2.33、2.26、1.96，R~(2)分别为0.73、0.78、0.83，其中BPNN预测模型效果最好。研究表明，采用拉曼光谱技术和Normalize-BPNN建立的预测模型可以检测脆肉草鱼脆度。本研究将为脆肉草鱼脆度检测提供新的思路。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
杨金增 赵保平 邓昌彦 熊远著
本文以40头猪的试验材料研究了血浆中丙酮酸激酶、磷酸果糖激酶、乳酸脱氢酶和氟烷基因型及PSE肉的相关。研究结果表明:氟烷阳性HAL~(nn)基因型猪血浆丙酮酸激酶和乳酸脱氢酶极显著地高于氟烷阳性HAL~(NN)基因型猪(P<0.05),而且血浆丙酮酸激酶及磷酸果糖激酶的对数值与肌肉品质指标pH值存在显著相关性(P<0.01);血浆丙酮酸激酶活性值及对数值也与其他肉质指标如系水力和光反射值存在较高相关(P<0.001);乳酸脱氢酶与肉质指标也呈较高相关的趋势。
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