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[期刊] 水产学报
[作者]
杨金先 陈强 李英英 宋铁英 葛均青
为了明确鳗鲡疱疹病毒（Anguillid herpesvirus, AngHV）的生物学及理化特性，利用一株从欧洲鳗鲡“脱黏败血综合征”病料中分离的AngHV病毒株研究了其增殖特性及其对主要鱼类细胞系的感染敏感性，进一步分析了其对热、酸碱、氯仿和乙醚等理化因子的耐受性。结果发现，AngHV感染的鳗鲡卵巢细胞系（Eel ovary, EO）内可见许多典型的疱疹病毒样颗粒，细胞出现时序性细胞病变; AngHV可在EO细胞系内稳定传代，较适宜扩繁温度为25 ℃～27 ℃，而不能在鲤上皮瘤细胞系（Epithelioma papilloma cyprinid cell , EPC）、草鱼卵巢细胞系 (Grass carp ovary cell, CO)、胖头鱥肌肉细胞系 (Fathead monow cell, FHM)、大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系（Chinook salmon embryo cell, CHSE-214）、虹鳟性腺细胞系（Rainbow trout gonad cell, RTG-2）、蓝鳃太阳鱼细胞系(Bluegill fry cell, BF-2)等鱼类细胞内增殖；理化特性分析表明，37℃处理30 min，AngHV滴度降低不明显，而56 ℃处理30 min可完全灭活AngHV；AngHV对酸（pH 3.0）敏感，而对碱（pH 10.0）较耐受，且对氯仿和乙醚敏感。本研究结果可为AngHV病的综合防控及疫苗的开发提供参考依据。
[期刊] 水产学报
[作者]
葛均青 杨金先 龚晖 林天龙
为获知鳗鲡"脱粘败血病"与病毒的关系,实验用蔗糖密度梯度离心的方法从发病的欧洲鳗鲡内脏器官组织匀浆液中纯化了病毒粒子,负染后利用电镜观察;进一步用EO细胞对病毒进行了分离、培养,并对感染病毒的细胞进行超薄切片,电镜观察;然后,提取病毒DNA,利用鳗鲡疱疹病毒的PCR检测方法对其进行了鉴定。结果显示,接种匀浆上清液的EO细胞出现细胞融合的病变效应;分离病毒的病毒粒子具囊膜,大小约为200 nm;从感染病毒的细胞上清液DNA中扩增出特异性条带,序列测定与比对分析表明,该序列与鳗鲡疱疹病毒欧洲株(AngHV-1)的序列完全一致。研究表明,利用EO细胞分离了一株鳗鲡病毒,经形态观察和DNA分析,确认该...
[期刊] 水产学报
[作者]
马杰 周勇 范玉顶 刘文枝 江南 曾令兵
为了查明鲤疱疹病毒Ⅱ型（Ｃｙｐｒｉｎｉｄ ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ ２，Ｃｙ ｈｖ－２）的理化与生物学特性以及病毒在细胞内的超微形态发生过程，利用新建立的对Ｃｙ ｈｖ－２敏感的异育银鲫脑组织细胞系（Ｇｉ ＣＢ），对Ｃｙ ｈｖ－２的理化及生物学特性进行了详细研究，比较了不同来源鱼类细胞系对Ｃｙ ｈｖ－２感染的敏感性，并对体外培养细胞中Ｃｙ ｈｖ－２病毒粒子及其超微形态发生过程进行了电镜观察。结果显示，Ｃｙ ｈｖ－２对热、酸、碱、有机溶剂和冻融敏感；常用鱼类细胞系ｅｐＣ、ｒＴＧ－２、Ｋｏｉ－Ｆｉｎ、ＣｉＫ、ＣＣＫ、ｐＦ－Ｆｉｎ对Ｃｙ ｈｖ－２的感染不敏感，特异性巢式ｐＣｒ检测盲传至第７代Ｃｙ ｈｖ－．．．
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
李友娟 郭凤达 葛均青 林天龙
将鳗鲡疱疹病毒(AngHV)福建株(AngHV-FJ)ORF51基因克隆至原核表达载体pGEX-4T-2中,构建表达质粒pGEX-4T-2-ORF51,将其转化至表达菌株E.coli BL21(DE3)中,IPTG诱导后,收集表达菌体,进行SDS-PAGE分析和免疫印迹试验验证,结果表明,获得了高效表达的AngHV-FJ ORF51融合蛋白.经割胶回收纯化,获得高纯度的融合表达蛋白.用纯化的表达蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的兔抗ORF51多克隆抗体.这为进一步研究ORF51蛋白的结构和功能及开展AngHV病的防治研究提供了重要的研究基础.
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
张晶晶 孙慧敏 宋家升 鲍恩东
[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒I型（FHV-1）弱毒疫苗，本研究利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白RFP。[方法]试验构建了针对gIgE基因的3 条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒，将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞（F81），通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化，以重组毒感染F81细胞连续10 代验证其遗传稳定性，通过测定重组毒以及亲本毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]试验结果显示，FHV-1 gIgE基因缺失毒株得到成功构建并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP；提取重组毒DNA通过PCR验证gIgE基因无目的条带，表明重组毒纯化成功，再通过PCR验证RFP基因有目的条带，表明重组毒成功插入外源基因；病毒滴度测定结果显示，与亲本毒相比重组毒的病毒滴度下降了10倍；在F1～F10连续传代过程中可观察到RFP荧光表达且无减弱现象，表明重组毒可稳定表达外源基因；测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线，重组毒的生长趋势与亲本毒大致相同，表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性；噬斑观察及染色结果显示，无论是在病毒感染细胞前期还是后期，重组毒的噬斑都要小于亲本毒，表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]上述结果说明，本研究成功构建并筛选出了FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株，为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了坚实平台与基础。
关键词：
FHV-1 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
肖利 吴惠仙 薛俊增 吴嘉敏 陈文银
日本鳗鲡(Anguilla japonica)是中国和日本最广泛养殖的鱼类之一。其养殖基于对天然玻璃鳗的捕捞,从而导致天然玻璃鳗资源逐渐出现严重的匮乏。为解决此问题,众多研究者致力于玻璃鳗的人工繁殖。主要阐述了30年来日本鳗鲡繁殖生物学研究的相关成果:在亲鳗催熟前需进行强化培育,雌、雄鳗达到性成熟需要不同的催熟药物和催熟时间,17,20-β-二羟孕酮(DHP)的催产效果较好;温度、盐度、水体离子含量等环境因子对胚胎和仔鱼发育影响较大;自由氨基酸、卵黄脂蛋白和硝化甘油是受精卵及卵黄囊期仔鱼的主要能源物质,磷脂是辅助能源物质;用鲨鱼卵冷冻干燥粉末添加复合维生素、磷虾提取液等制成的浆状饵料是仔鱼较适...
关键词：
日本鳗鲡 人工繁殖 催熟 催产 仔鱼
[期刊] 淡水渔业
[作者]
高正勇 曾令兵 肖汉兵 张辉 孟彦 肖艺 徐进
对大鲵虹彩病毒(Giant salamander iridovirus,GSIV)的理化特性及生物学特性进行了研究。结果表明:GSIV对热处理敏感,56℃和65℃处理30 min均可彻底灭活病毒;GSIV经酸(pH3)和碱(pH10)处理,病毒滴度(TCID50)与对照组相比较分别下降了8.58、9.04个对数级,差异极显著(P<0.01);GSIV经有机溶剂氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理,TCID50与对照组相比较分别下降了9.33、7.83、6.49个对数级,差异极显著(P0.05)。GSIV对细胞培养物的感染性试验结果表明,GSIV可在鲤...
关键词：
大鲵虹彩病毒 理化特性 生物学特性
[期刊] 水产学报
[作者]
周雯伊 黄海 尹绍武 齐鑫 张勇 刘晓春 陈国华 林浩然
用肌肉注射HCG的处理方式(剂量为500 U/kg体重,每周注射1次,注射时间为6周)诱导雄性花鳗鲡性腺发育成熟,成熟率达80.0%。对人工催熟花鳗鲡精子的生物学特性研究结果表明:花鳗鲡精子头部长径为(3.81±0.69)μm,短径为(1.24±0.15)μm;尾部长度为(24.83±3.05)μm;精液pH为7.3~7.5,精子密度每毫升1.02×1010尾。精子的适宜盐度为15~20,其中盐度为15时,精子激活比率最高,快速运动时间以及精子的寿命最长。精子的pH适宜范围为6.0~8.0,pH值过高或过低都会影响精子的活力与寿命。另外,4种金属离子(Mg2+、Ca2+、Na+和K+)对花鳗鲡...
关键词：
花鳗鲡 人工诱导 精巢 精子活力
[期刊] 水产学报
[作者]
赵哲 喻飞 郝凯 李舒馨 张小东 陈泓迅
疱疹病毒是双链DNA病毒家族成员之一，具有高度的传染性，严重危及人类及动物的健康；其中异疱疹病毒科各成员是引起水生动物病害的主要病原，严重制约全球水产养殖业的健康发展，尤其对我国鱼类养殖产业影响巨大。本文简要概述鱼类疱疹病毒研究发展历程、现状及进展，主要包括鲤疱疹病毒、鮰疱疹病毒、鲑疱疹病毒及其他鱼类疱疹病毒等，以期增强我们对鱼类疱疹病毒研究发展的系统性认知。
关键词：
水生动物 鱼类 病毒病 疱疹病毒
[期刊] 水产学报
[作者]
岳玉环 黎诚耀 杨盛华 卢强 陶增思 王文东 邹啸环 杨振国 王振英 殷震
实验选用４种鱼类传代细胞，对首次发现的鳗鲡“狂游病”的病原鳗鲡冠状病毒样病毒进行了细胞分离与培养。本研究在鲤上皮乳头状瘤细胞（ＥＰＣ）中复制了鳗鲡冠状病毒样病毒粒子，并经病毒细胞培养物的电镜负染和超薄切片法检查得到了证实。
关键词：
欧洲鳗鲡,冠状病毒样病毒,细胞培养
[期刊] 水产学报
[作者]
柳凌 张洁明 郭峰 张涛
在多年对日本鳗鲡人工育苗技术研究的基础上,通过采用对胚胎和早期仔鱼的活体观察、计算机图文分析以及组织切片等方法,系统研究了鳗鲡胚胎及孵化后19d前仔鱼的生物学特性。研究结果表明,在水温(23±0.5)℃条件下,日本鳗鲡从受精卵到仔鱼出膜需约38h30min,总积温为885.50℃·h。其特征与一般硬骨鱼类胚胎发育基本相同,鳗鲡胚胎发育可分为14期,为典型的盘状卵裂,原肠作用通过细胞的下包和内卷完成。但日本鳗鲡早期仔鱼与一般硬骨鱼类的仔鱼存在较大差异,表现为无色透明的血细胞和S形心管;开放型的口腔,发达且不能闭合的上下颌和3对颌齿;孵化后3～9d在身体两侧出现由神经细胞和支持细胞构成发达的感觉丘...
关键词：
日本鳗鲡 胚胎 仔鱼 发育
[期刊] 水产学报
[作者]
曾令兵 贺路 左文功
草鱼出血病是我国一种十分严重的病毒性鱼病。１９７８年，中国科学院水生生物研究所第三研究室的科研人员首先报道了草鱼出血病是一种病毒性鱼病，并初步认为其病原是一种疱疹病毒（Ｈｅｒｐｓｖｉｒｕｓ）。１９８３年，陈燕新等报道了自己分离的草鱼出血病病毒形态结构...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
向骏 程安春 汪铭书
疱疹病毒衣壳主要由VP5蛋白构成,还包括其它3种含量相对较少的蛋白,VP19C,VP23,VP26。VP5是所有162个衣壳粒的结构亚单位,而VP19C和VP23则位于衣壳粒的空隙间。除了结构蛋白之外,衣壳的组装还涉及蛋白酶和脚手架蛋白preVP22a的参与。冷冻电镜与重组杆状病毒技术的应用使得疱疹病毒衣壳的研究取得重要进展,前者确认了衣壳的形态结构,后者通过证实完整衣壳组装过程中的中间体来确认了组装路径。本文综述了当前疱疹病毒衣壳蛋白及其组装的研究进展。
关键词：
疱疹病毒 衣壳 组装
[期刊] 淡水渔业
[作者]
林而舒
为建立鳗鲡圆环病毒(Eel circovirus,EeCV)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法，根据EeCV复制相关蛋白(replication-associated protein, RAP)基因的保守序列设计特异性引物，并评价其灵敏性、特异性、重复性和应用效果。qPCR的阈值循环数(Cycle threshold value,C_t值)与标准品的拷贝数线性关系良好，且线性范围广(1.0×10~8～10~2拷贝数/μL);可特异性检测EeCV,而对鳗鲡疱疹病毒(Anguillid herpesvirus)、猪圆环病毒(Porcine circovirus)、鸭圆环病毒(Duck circovirus)无扩增；重复性强，组内和组间变异系数均小于3%;灵敏性高于普通PCR法10倍。且qPCR检测后发现，在感染EeCV的鳗鲡体内重要器官均可检测到EeCV,其中鳃的病毒量显著高于其他组织；对保存的44份疑似鳗鲡病毒性感染病料进行检测，阳性检出率为98%,而普通PCR法的阳性检出率为73%。
[期刊] 淡水渔业
[作者]
何福林 向建国
以常温静水实验法用甲氰菊酯对鳗鲡 (体长 4 1～ 5 0cm)进行急性攻毒试验 ,结果表明 :甲氰菊酯对鳗鲡的半致死浓度 (96hLC50 )为 6 5 5 μg/L ,安全浓度 (SC)为 0 6 6 μg/L。甲氰菊酯对鳗鲡有剧毒。
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