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[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
胡存洁 车金远 黄旭雄 罗土炎 鲍宝龙
通过基因重组技术，敲除鳗弧菌毒力基因vah1,成功构建vah1缺失鳗弧菌菌株Δvah1。Δvah1菌株溶血活性下降89.4%,生物膜形成能力下降16%。Δvah1菌株感染凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)的半数致死量为(9.77±0.50)×10~5 cfu/mL,相比鳗弧菌野生菌株的半数致死量(3.16±0.80)×10~5 cfu/mL提高了2.09倍；相比鳗弧菌野生菌株，Δvah1菌株在凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)肝胰腺的定殖能力明显下降，对肝胰腺细胞造成溶解和空泡化的破坏程度也相对较小，肝胰腺免疫相关基因CAT、SOD、PO、LZM和ACP的表达水平降低。这些研究结果表明，vah1缺失影响鳗弧菌对凡纳滨对虾的致病能力，Δvah1菌株为后续鳗弧菌减毒疫苗或抗鳗弧菌免疫增强剂的制备奠定了基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
姜维 周家宇 王雨果 胡存洁 方秀 罗土炎 刘洋 鲍宝龙
为阐明毒力因子溶血素对鳗弧菌感染花鲈过程中发挥的作用，实验以花鲈为研究对象，通过对花鲈幼鱼分别注射5.0×10~5 CFU鳗弧菌野生株和缺失株△vah1-vah4-rtxA，评估了溶血相关基因缺失对花鲈的感染能力、花鲈各组织的病理变化情况以及免疫响应的影响。结果显示，花鲈感染野生株后的LD_(50)为2.103×10~5 CFU/mL，感染缺失株△vah1-vah4-rtxA后LD_(50)为1.837×10~6 CFU/mL，溶血相关基因缺失使鳗弧菌毒性降到原来的11.44%；鳗弧菌主要定植在花鲈的肠道和鳃中，溶血相关基因缺失降低鳗弧菌在花鲈体内的定植能力，同时降低对鳃和肠道的损伤程度；转录组分析表明vah1、vah4和rtxA缺失后，头肾组织的差异表达基因显著富集到造血细胞谱系、抗原处理和呈递、细胞黏附分子、肠道免疫网络的IgA生产等免疫通路，并用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对表达水平进行了验证。研究表明，溶血相关基因缺失降低了鳗弧菌感染花鲈的致病能力。研究结果有助于进一步了解鳗弧菌的致病机制，并为开发花鲈抗弧菌免疫增强剂或减毒疫苗提供依据。
关键词：
花鲈 鳗弧菌 溶血素 细菌感染 免疫应答
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
白雪瑞 王权 陈永军 万莹 凌娇 王亚磊 蒋蔚
[目的]外膜蛋白Omp A是一个多功能蛋白,在很多革兰氏阴性菌的环境适应性和致病性过程中发挥重要作用,而副溶血弧菌Omp A的功能尚未见报道。本试验旨在研究omp A基因(VPA1186)对副溶血弧菌生物学特性及致病性的影响。[方法]通过构建副溶血弧菌SH112株的omp A基因缺失株和互补株,开展对该基因在细菌生长特性、生物被膜形成、运动性、血清杀菌、细胞黏附、细胞毒性,组织载量以及小鼠致病性等相关生物学特性和致病性的影响研究。[结果]omp A的缺失不影响副溶血弧菌的生长速度、生物被膜形成能力和运动性。野生株和Δomp A的黏附和抗血清试验结果无显著差异。但Δomp A对Caco-2细胞的毒性作用显著低于野生株。小鼠染毒验结果显示,与感染野生株的小鼠相比,感染Δomp A的小鼠症状明显减轻,存活率更高,Δomp A在小鼠血液和肝脏中的带菌量显著低于野生株,而互补株的毒力恢复至野生株水平,表明omp A缺失能显著降低副溶血弧菌的毒力。[结论]omp A与副溶血弧菌的致病性相关,为潜在的毒力因子。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
孟璐 车金远 黄旭雄 罗土炎 鲍宝龙
溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)是海水养殖过程中一种常见的致病菌。当温度为25～35℃时，容易暴发流行性的弧菌病。利用OverlapPCR和同源基因重组技术，成功构建溶藻弧菌RseB基因敲除缺失株。结果显示：与野生溶藻弧菌相比，在生长速度上，RseB基因显示出与生长具有相关性，RseB基因缺失提高了溶藻弧菌的生长速度；RseB基因缺失造成溶藻弧菌溶血性下降37.5%。凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)致病性试验结果显示，RseB基因缺失菌株感染后凡纳滨对虾开始死亡时间推迟4 h, LT_(50)推迟20 h。攻毒后的第24小时，RseB基因缺失菌株在对虾中的定殖能力下降53.4%。受溶藻弧菌感染的凡纳滨对虾肝胰腺严重受到侵染，肝小管的排列顺序紊乱，并且间隙变大、边界线也逐渐模糊，肝胰腺小管的管腔消失；肝细胞的排列开始不规则，有些肝细胞形状很明显地肿大，甚至整个细胞开始变性，被伊红染深，细胞核开始消失。相同时间点的病理切片显示，RseB基因敲除菌株感染的凡纳滨对虾肝胰腺受损情况相对较轻。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
赵东康 Rachit PENGLEE 车金远 易欣鑫 邱超达 鲍宝龙
嗜水气单胞菌是水环境常见的病原体，具有较强致病性。在本研究中，首次敲除了嗜水气单胞菌aguA基因，通过转录组分析发现aguA敲除后细菌的粘附、致病、胺代谢等生物过程下降。通过qRT-PCR进一步验证发现10个粘附基因、9个发病基因和8个胺代谢基因的mRNA表达水平明显下降；此外，转录组水平分析结合qRT-PCR验证发现VI型分泌系统基因、II型分泌系统基因、鞭毛合成相关基因、菌毛合成相关基因、溶血基因、I型分泌系统基因、肠毒素基因、RTX基因等毒力基因的RNA表达水平也出现下调。对两株菌进行草金鱼的体内感染实验，与野生菌株（WT）相比，aguA敲除株（△aguA）感染草金鱼的致病力降低了7.47倍，且aguA敲除株生物膜形成能力降低了16.6%。以上结果显示aguA基因与嗜水气单胞菌的致病性密切相关。
[期刊] 福建农林大学学报(自然科学版)
[作者]
段世宇 杨阳 令狐远凤 杨琦 周碧君
为探究沙门菌外膜蛋白基因fadL、ompN、ybfM以及sRNA RybB和伴侣蛋白Hfq缺失对该菌致病性的影响，构建了鼠伤寒沙门菌基因缺失菌株，并测定了基因缺失菌株的生长曲线，同时通过小鼠腹腔注射测定了基因缺失菌株的毒力及其在小鼠脾脏和肝脏上的定殖能力.结果显示，与鼠伤寒沙门菌亲本野生型菌株LT2相比，基因缺失菌株的生长能力变化不大.LT2对小鼠的LD_(50)为3.97×10~7 CFU;外膜蛋白基因缺失菌株ΔompN、ΔfadL和ΔybfM的LD_(50)分别为1.58×10~5、6.29×10~5、9.97×10~5 CFU,毒性明显增强；sRNA敲除菌株(ΔrybB)的LD_(50)为9.97×10~7 CFU,毒性有所下降；伴侣蛋白Hfq敲除组(Δhfq)及rybB&hfq双敲除组的小鼠死亡数未超过50%,毒性明显下降.感染48 h后，与对照组(LT2)相比，所有基因缺失菌株处理组的脾脏指数均极显著性升高；ΔrybB&Δhfq、Δhfq处理组的脾脏载菌量显著降低，其余菌株处理组的载菌量与LT2差异不显著；ΔrybB、ΔrybB&Δhfq、ΔfadL、ΔybfM处理组的肝脏指数均显著下降，而Δhfq、ΔompN处理组的肝脏指数变化不显著；ΔrybB、ΔfadL处理组肝脏载菌量变化不显著，Δhfq、ΔrybB&Δhfq处理组的肝脏载菌量显著下降，而ΔompN、ΔybfM处理组的载菌量显著上升.总的来说，hfq、rybB缺失降低了鼠伤寒沙门菌的致病力，而fadL、ompN、ybfM的缺失提高了鼠伤寒沙门菌的致病力.
[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈吉祥 刘霜 李筠 王祥红 杜宗军 于德华 纪伟尚 徐怀恕
从山东省莱州海区自然发病的花鲈 (Lateolobraxjapanicus)体内分离到 1株致病性鳗弧菌 ,经硫酸铵盐析、DEAE SepharoseFastFlow和Sephadex G10 0凝胶层析等方法从其培养液中分离纯化了 1种胞外蛋白酶。用SDS PAGE电泳测得蛋白质的分子量为 36 7kD ,酶的最适温度为 5 0℃ ,对热不稳定 ,70℃ 15min完全失去活力 ;最适pH为 7 0 ;1mmol/L的PMSF对酶活性无影响 ,部分金属离子如Cu2 + 、Fe2 + 、Fe3 + 、Zn2 + 对酶活力有抑制作用 ,而Ca2 + 对酶有一定程度的激活作用 ,1mmol/LE...
关键词：
鳗弧菌 胞外蛋白酶 分离纯化 理化性质
[期刊] 浙江林学院学报
[作者]
方志刚 张立钦 赵仁友
浙江省丽水地区是马尾松毛虫白僵病自然常发区。近几年来采集并分离到球孢白僵菌9 个野生菌株。测定它们在PDA 平板上的营养生长和产孢量, 以及菌株对马尾松毛虫的致病力。结果表明, B2 , B4 和B14 等3 个菌株致病力最强, 营养生长最快, 产孢量较高, 达3 亿个·cm - 2 , 在今后生产上对马尾松毛虫的防治最具应用潜力; 次之是B7 , B10 , B11 和B12 等4 个菌株; 而B6 和B13 菌株的各个性状较差,几无潜力。同时也说明自然界中存在遗传多样性的自然菌株。表5 参6
关键词：
球孢白僵菌 菌株 马尾松毛虫 致病性
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
袁盛勇 张宏瑞 孔琼 李正跃 骆弟乾 王学丽 董丽玲
【目的】明确球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马的致病性,为该菌株在农业害虫防治中的开发应用及后续研究奠定基础。【方法】采用浸渍法,测定球孢白僵菌MZ060812菌株不同孢子浓度对西花蓟马成虫和若虫的致病性。【结果】在3.0×105～3.0×108mL-1浓度下,球孢白僵菌MZ060812菌株对西花蓟马成虫的致死中时间(LT50)值分别为9.61,6.63,5.57和4.49d;致死中浓度(LC50)分别为3.307×108、1.528×107、4.030×106和5.839×105mL-1。对若虫的LT50值分别为8.51,6.81,5.00和4.02d;LC50分别为2.352×107...
关键词：
球孢白僵菌 西花蓟马 致病性
[期刊] 西南农业学报
[作者]
周兵 陈洁 马胜平 殷帅文 王宁
链格孢菌为空心莲子草最具开发潜力的生防菌之一。通过室内生物测定的方法比较了链格孢菌不同菌株对空心莲子草的致病性，并测定了培养基、温度及ｐＨ值条件对强致病菌株菌落生长和产孢的影响，优化了其培养条件。结果表明，菌株Ｊ－１４的致病性最强，其次为菌株ＭＳ６１３、ＺＬ５００和ｐＥＣ，而菌株ＭＬ０３的致病性最弱，其所产生的病斑直径仅为Ｊ－１４的２２．１２％。菌株Ｊ－１４在空心莲子草茎叶煎汁培养基（ＡＤＡ）上菌落生长和产孢量较高，培养５ Ｄ后其菌落直径和产孢量分别为５．８００ ＣＭ和５１９．３７４×１０６个；温度２０～３０℃及ｐ Ｈ值６．５～８．５是其菌落生长和产孢的适宜温度和酸碱度，且最适温度和ｐ Ｈ值分．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
傅丹丹 肖亚婷 薛媚 Muhammad Akmal Raheem 冯寒霜 涂健 宋祥军 邵颖 祁克宗
[目的]构建禽致病性大肠杆菌(APEC)Ⅲ型分泌系统2(ETT2)转录因子eivF缺失株,并对其进行生物学特性及转录组学分析,探究转录因子eivF基因在APEC致病过程中的作用,为后期深入研究ETT2致病机制奠定基础。[方法]利用Red同源重组技术构建APEC ETT2转录因子eivF基因缺失的APEC AE81△eivF株及其回复株AE81 C-eivF,通过运动性、生物被膜形成等试验分析eivF对APEC生物学功能的影响;并利用转录组学方法分析eivF在转录调控网络中对细菌鞭毛和生物被膜等相关因子的转录调控作用。[结果]成功构建了APEC eivF基因缺失株AE81△eivF和回复株AE81 C-eivF;生物学结果表明,与野生株AE81相比,缺失株AE81△eivF运动能力降低,生物被膜形成褶皱堆砌且厚度增大,空间结构呈立体、多层次状,并形成类似于三维塔状结构的突起,回复株AE81 C-eivF运动能力和生物被膜形成能力基本恢复;与野生株AE81相比,缺失株AE81△eivF有576个基因差异表达,且鞭毛和生物被膜等相关基因在转录水平上均发生显著变化。[结论] ETT2的转录因子eivF参与调控APEC的生物表型变化,其可能通过调控鞭毛、生物被膜相关基因而调控APEC致病过程。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
公衍军 陈吉祥 杜萌 李爱娟 李筠 张晓华
对已分离的1株致病性鳗弧菌W1外膜蛋白图谱进行SDS-PAGE分析,并与8株不同血清型的鳗弧菌外膜蛋白进行比较。结果表明,鳗弧菌W1主要外膜蛋白分别为24 kD,38 kD,42 kD和47 kD,主要外膜蛋白图谱与鳗弧菌O1血清型标准菌株VIB1相似。抗生素药敏试验表明该菌对氨苄青霉素、强力霉素、磺胺嘧啶等14种常用药物产生了抗性,只对新生霉素、呋喃妥因、利福平、新霉素等9种药物敏感。研究不同浓度的氨苄青霉素、强力霉素、磺胺嘧啶和庆大霉素对鳗弧菌外膜蛋白表达的影响。结果表明,氨苄青霉素、强力霉素和磺胺嘧啶明显地抑制鳗弧菌42 kD的主要外膜蛋白的表达,随着抗菌素浓度的增加,该外膜蛋白的表达量...
关键词：
鳗弧菌 耐药性 外膜蛋白 表达
[期刊] 中国水产科学
[作者]
王斌 于兰萍 袁甜 姜志强
采用平板玻璃纸覆盖技术提取哈氏弧菌(Vibrio harveyi)H-06091菌株的胞外产物(ECP),通过肌肉和腹腔注射2种方式研究其对红鳍东方鲀(Fugu obscurus)的致病性。采用双层纸片法对其主要酶成份进行初步研究;测定其对绵羊红细胞和红鳍东方鲀红细胞的溶血活性;将哈氏弧菌在不同温度下(15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃)培养36h和25℃下培养不同时间(12h、18h、24h、36h、48h、60h、72h)后提取其胞外产物并对其蛋白质含量进行测定;经SDS-PAGE分离粗提胞外产物中蛋白成分,并用Dot-ELISA和Western-blot方法对其成分进行分析。...
关键词：
红鳍东方鲀 哈氏弧菌 胞外产物
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
李国霞 严毓骅 王丽英
本文通过对北京地区蜡蚧轮枝菌11个单孢分离菌株的菌落生长、产孢量、分生孢子萌发率以及对温室白粉虱2龄若虫致病性研究比较，结果表明：上述性状特别是产孢量，在11个菌株中均表现有显著差异，但孢子萌发率都较高，达94．01％～9897％（12h）。在同一菌株中这些性状有的表现出一致性，有的则不同。综合比较几种性状，筛选出B3／S1－SUb2和4号两个优良菌株，它们首先具有致病性高（对2龄粉虱若虫的致死率＞95．76％，12d）、其次孢子萌发率高（94．24％和98．42％）、产孢量大（5．06和4．38×109抱子／皿）以及菌落生长速率快（3．13和3．00mm／d）的特性，具有实用价值，可为今后生...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李成云 陈琼珠 陈宗麒 罗朝喜 林长生 内藤秀树
报道了5个稻瘟病菌杂交组合的后代菌株在4个水稻品种和4个龙爪稷品种上的致病性分离结果。其中水稻菌3514－R－24对龙爪稷品种EC3的非致病性，龙爪稷菌株G10－1对水稻品种Keneana的非致病性及水稻菌3472－R－12对龙爪稷品种EC3、EC21的非致病性，可能是受一对基因控制的，因为它们与致病性菌株杂交后，致病性后代与非致病性后代的分离比为1∶1。3472－R－12对两个龙爪稷品种的非致病性基因可能就是相同的，因为对EC3致病的后代菌株，对EC21也都是致病的，反之亦然。其他组合中的龙爪稷菌对水稻的非致病性和水稻菌对龙爪稷品种的非致病性，则可能受一对以上的基因控制。
关键词：
稻瘟病 后代 非致病性/致病性分离
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