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[期刊] 水产学报
[作者]
胡秀彩 沈晓静 吕爱军 孙敬锋 YEONG Yiksung 宋亚娇 李莉 孔祥会
为了建立鱼类皮肤蛋白质组双向电泳图谱及质谱鉴定，以鲫为实验动物，采用蛋白双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术，进行鲫皮肤的蛋白质组学研究。结果表明，当上样量为８００μｇ，采用１８ ｃＭ、ｐ Ｈ３～１０ Ｉｐｇ胶条，等电聚焦８０ ０００ ＶＨ，２－ＤＥ图谱检测为２１４个皮肤蛋白点，匹配率达８８％；对其中３１个蛋白点进行ＭＳ／ＭＳ鉴定为２２种蛋白，包括肌球蛋白、肌动蛋白、角蛋白、锌指蛋白５８５Ｂ、效应蛋白ＲＡＢ１５、卷曲螺旋结构域蛋白１６８、ＮｃＫ１相关蛋白，肌酸激酶、烯醇化酶、丙酮酸脱氢酶、腺苷酸激酶同工酶等；进行蛋白功能聚类（ｇＯ）分．．．
关键词：
鲫 皮肤 蛋白质组 双向电泳 质谱
[期刊] 水产学报
[作者]
王宝杰 刘梅 蒋克勇 张国范 王雷
中国明对虾的血浆脱盐处理后,通过固相pH梯度胶条等电聚焦、SDS-PAGE垂直电泳对蛋白质进行分离,对不同pH范围IPG胶条、脱盐方式、上样量等进行了优化,并分别利用硝酸银和胶体考染方法进行染色,应用PDQuest软件对图谱进行了初步分析,采用基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱法对主要的高丰度蛋白点进行了质谱鉴定。结果显示,中国明对虾血浆在pH 4～7范围、18 cm的2-DE胶上得到了很好的分离,上样量为150μg左右,采用银染可以获得较好的分析胶图谱;而上样1 000μg左右,采用胶体考染方法能获得较好的制备胶图谱;通过MALDI-TOF/TOF MS鉴定的11个最主要的高丰度蛋白点都是血...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
薛宝贵 黄智慧 周洲 马爱军
通过对表皮蛋白质提取方法、不同裂解液配方、等点聚焦程序和上样量等条件的对比试验,建立及优化了大菱鲆表皮组织蛋白质的双向电泳体系。试验采用改良的TCA/丙酮和超声波提取相结合的方法提取大菱鲆表皮组织的全蛋白,裂解液配方根据Bio-Rad公司推荐的进行调整,使用17cmpH4~7的IPG胶条被动水化上样,上样量为250μg。等点聚焦程序采用30V线性6h、250V线性2.5h、500V线性1.5h、1000V快速2h、4000V线性3h、8000V快速3h、8000V线性1h、500V24h,凝胶银染后用I mage Master2D Platinum7.0软件进行分析,最终得到较满意的双向电泳图...
关键词：
大菱鲆 表皮组织 蛋白质 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
董婧 逯晓萍 吕二锁 薛春雷 李俊伟
为了优化玉米叶片双向凝胶电泳技术条件，通过比较３种总蛋白提取方法对玉米双向电泳结果的影响，并对蛋白质上样量、ＩＥＦ等电聚焦条件及ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶浓度等参数进行探索、优化；结果发现，与酚提取法和磷酸缓冲液法相比，采用改进的ＴＣＡ／丙酮法提取总蛋白操作简单、方便，所得的２－ＤＥ图谱中蛋白质点数量多、背景清晰，是一种适用于提取玉米苗期叶片总蛋白的有效方法；同时筛选出：第一向ＩＥＦ等电聚焦样品上样量为８００μｇ，聚焦条件为２０ ０００ Ｖ／ｈ，在浓度为１２．５％的ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，能够在１７ Ｃｍ的ＩＰｇ胶条上获得背景低、分辨率较高、重复性好的双向电泳图谱，该优化体系适用于玉米叶．．．
关键词：
玉米 叶片 蛋白质提取 双向电泳
[期刊] 西南农业学报
[作者]
朱佳杰 沈夏霜 付强 周宇 谭芸 甘西
以吉富罗非鱼为研究对象,通过对其肝脏蛋白质的提取方法、等电聚焦程序和IPG胶条pH选择这几个关键环节的优化探索,建立了吉富罗非鱼肝脏蛋白质组双向电泳技术体系。结果表明:①采用液氮研磨法比匀浆器匀浆法提取蛋白质的效果更好;②聚焦时延长除盐时间至10 h,同时升高电压至8000 V,可获得清晰的电泳图谱;③通过双向电泳检测到吉富罗非鱼肝脏的蛋白点主要分布于pH值4.0~7.0之间。该技术体系的建立为今后开展罗非鱼蛋白质组学的进一步研究奠定了基础。
关键词：
吉富罗非鱼 肝脏 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 中南林业科技大学学报
[作者]
马松亚 蒋维昕 屈林丰 曹雪宁 谭玲 杨梅
为了建立适用于桉树叶片蛋白质组研究的双向电泳体系，以尾叶桉Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ ｕｒｏｐｈｙｌｌａｓ广林４号无性系作为试验材料，对蛋白质样品获取方法、双向电泳等电聚焦胶条ｐ ｈ范围、蛋白质上样量、胶条平衡条件以及染色方法进行了优化。结果表明：提取液＋酚抽提法最适合桉树叶蛋白质的提取，电泳图谱可检测到８５０个蛋白质点。７ ｍｏｌ／ｌ尿素＋２ ｍｏｌ／ｌ硫脲＋４％ｃｈａｐｓ＋６０ ｍｍｏｌ Ｄｔｔ １０μｌ的蛋白质干粉裂解液，裂解效果较好；使用５０ ｍｇ蛋白质干粉和６００μｌ裂解液所获得的蛋白质浓度较高，为３．９７μｇ／μｌ。使用ｐ ｈ４～７、２４ ｃｍ Ｉｐｇ胶条，蛋白质上样量为１ ２００μｇ，．．．
关键词：
桉树 叶片 蛋白质组 无性系 双向电泳
[期刊] 林业科学研究
[作者]
索慧英 郑密 卢晗 曲冠证 李莹
[目的]探究适用于杨树叶片蛋白质组学研究的双向电泳体系,建立杨树叶片蛋白质的双向电泳图谱。[方法]本研究以小黑杨(Populus simonii×P. nigra)叶片为材料,对小黑杨叶片双向电泳体系的2D裂解液、蛋白的纯化、IPG胶条的pH范围、蛋白上样量、等电聚焦时间和SDS(Sodium Dodecyl sulfate)平衡时间进行优化。利用优化后的双向电泳体系分别对小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质进行双向电泳实验。[结果]采用2D裂解液Ⅱ对小黑杨叶片蛋白质进行溶解,可显著提高蛋白的溶解性,双向电泳图谱中可分辨出326个蛋白质,比采用2D裂解液Ⅰ溶解的蛋白样品多209个蛋白质。通过蛋白裂解液提取小黑杨叶片蛋白质,利用2D clean-up试剂盒法对蛋白样品进行纯化,所得的双向电泳图谱背景清晰、蛋白质的分离效果较好。小黑杨叶片蛋白质主要集中在pH 4～7内,选用24 cm、pH 4～7的线性IPG胶条进行双向电泳,可获得分离效果较好的393个蛋白质。蛋白上样量提高至1 mg时,可分辨的蛋白质的个数明显增加,由326个增加至454个。10 000V的等电聚焦时间为13 h,SDS平衡时间为40 min时可得到背景清晰、蛋白质个数多、分辨率较高的双向电泳图谱;采用优化后的双向电泳体系对小黑杨、大青杨(Populus ussuriensis Kom.)和84 K杨(Populus alba×P.glandulosa)叶片蛋白质进行双向电泳实验,分别可检测到531、828、525个蛋白质,且蛋白质分离效果好、图谱分辨率高。[结论]优化后的双向电泳体系提高了小黑杨叶片蛋白质双向电泳图谱的分辨率和重复性,采用优化后的双向电泳体系成功的建立了小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质的双向电泳图谱,该体系适用于小黑杨、大青杨和84 K杨叶片蛋白质组学的分析,为杨树叶片蛋白质组学的研究奠定了基础。
关键词：
小黑杨 蛋白质 双向电泳 优化
[期刊] 华北农学报
[作者]
邵媛媛 柳展基 王龙龙 毕玉平
以花生品种鲁花14为试验材料,提取叶片可溶性蛋白进行双向电泳分析。在三氯乙酸/丙酮沉淀法的基础上,对样品抽提、样品溶解、胶条pH范围选择、蛋白上样量、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳等关键步骤进行改进,获得了蛋白点较多、重复性好的双向电泳图谱,为开展花生叶片蛋白质组研究奠定了基础。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
田邁 莫海波 常亚青 湛篧篧 陈百尧 伏光辉 安建
以刺参肠组织为材料,通过蛋白质提取方法、上样前处理方法、上样量以及聚焦条件的优化,建立了刺参肠组织蛋白质双向电泳技术体系。试验结果表明,采用TCA-丙酮沉淀法制备刺参肠组织蛋白质,能够得到高纯度的蛋白质提取液。刺参样品上样前不经过处理,等电聚焦电压1 000V,电流7mA,聚焦时间3h,平衡时间30min,最佳上样量25μg,pH 4~6.5、8.5cm的IPG胶条,银染能获得较好的双向电泳图谱。通过蛋白质双向电泳体系的优化,获得了刺参肠组织的蛋白质表达图谱,为进一步研究刺参差异表达蛋白的筛选及蛋白质组学研究提供技术保障。
关键词：
刺参 肠组织 蛋白质双向电泳
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
张小果 乔桂荣 李翠云 刘明英 蒋晶 李海营 邱文敏 卓仁英
林木抗逆机制的研究是林木抗逆育种的重要基础。为了解旱柳Salix matsudana耐盐机制,实验采用蛋白质双向电泳技术研究盐碱胁迫前后旱柳蛋白表达变化,分离鉴定旱柳耐盐相关基因,建立一套适合于旱柳根系蛋白质的双向电泳技术体系是蛋白质组学的基础。用改进的酚抽法抽提旱柳根总蛋白,此方法不仅能很好地分离蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了900μg.胶条-1的最佳上样量,10 min平衡时间以及10万V.h的聚焦时间的双向电泳条件。还比较了氯化钠胁迫后双向电泳图谱差异,发现了39个差异表达蛋白,其中15个下调,24个上调(11个新诱导表达),为下...
关键词：
林木育种学 旱柳 蛋白质组学 双向电泳
[期刊] 华北农学报
[作者]
张曼 羊杏平 徐锦华 刘广 姚协丰 李苹芳
为建立高效、稳定的西瓜根系蛋白质双向电泳技术体系，对西瓜根系蛋白质样品等电聚焦（ＩＥＦ）条件、样品上样量、ＩＰＧ胶条Ｐ Ｈ值范围、染色方法等参数进行优化。结果表明，采用ＴＣＡ／丙酮法提取西瓜根系总蛋白，裂解液组成为７ ｍｏｌ／ｌ ＵｒＥＡ、２ ｍｏｌ／ｌ ＴＨｏＵＩｒＥＡ、４％ＣＨＡＰＳ（ｍ／Ｖ）、１％ＣｏＣｋＴＡＩｌ（Ｖ／Ｖ）、６５ ｍｍｏｌ／ｌ ＤＴＴ、２％Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ ＢＵＦＦＥｒ，上样量为８００μＧ，Ｐ Ｈ值４～７ ＩＰＧ（１３ Ｃｍ）胶条、ＩＥＦ条件为４８ ０００ ＶＨ，分离胶浓度为１２．５％，ＣＢＢ－ｒ２５０染色时，可获得分辨率高、重复性好的双向电泳图谱，该技术条件为适合．．．
关键词：
西瓜根系 蛋白质组 双向电泳
[期刊] 水产学报
[作者]
吕爱军 胡秀彩 孙敬锋 YEONG Yiksung 石洪玥 李莉 孔祥会
为建立鱼源嗜水气单胞菌全菌蛋白图谱并进行质谱分析，利用双向电泳（２－ＤＥ）结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦ／ＴＯＦ－ＭＳ）技术对嗜水气单胞菌的蛋白质组学进行鉴定研究。结果显示，嗜水气单胞菌２８°Ｃ培养１２ ｈ、三氯醋酸（ＴＣＡ）／丙酮沉淀法提取全菌蛋白、等电聚焦２０ ０００ Ｖｈ的２－ＤＥ图谱匹配率达８１％；采用１８ ＣＭ、ｐ ｈ ３－１０ ＩｐＧ胶条进行２－ＤＥ分析获得１４６个蛋白点，随机选取部分蛋白点进行肽质量指纹图谱（ｐＭＦ）分析，共鉴定２３个蛋白点包括膜脂蛋白、分子伴侣、３０Ｓ核糖体蛋白Ｓ１、延伸因子、细胞色素Ｃ等，其中发现烯醇化酶、甘油醛－３－磷酸脱氢酶、二氢．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
王璐 杜国强 师校欣
双向电泳技术是蛋白质组研究的核心技术之一,本文对其原理、发展概况、优缺点及其在园艺植物蛋白质组学研究中的应用做了介绍,并对其今后的发展做了展望。
关键词：
双向电泳 蛋白质组学 园艺植物
[期刊] 西南农业学报
[作者]
岑卫健 刘娇 付秋霞 杨丽超 朱平川 姜伯乐
以十字花科黑腐病菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)8004菌株为研究材料,采用双向电泳-质谱技术鉴定Hrc V控制的分泌蛋白质组。结果表明,野生型和突变体菌株均获得分辨率高且具有可重复性的双向电泳银染图谱,经过图像软件分析找出差异点61个,以野生型菌株为对照,22个蛋白点上调,39个蛋白点下调。挖取下调蛋白质点39个做质谱分析,质谱成功鉴定出25蛋白质,主要包括各种酶类、转运蛋白、延伸因子、Dna K蛋白、分子伴侣及假定蛋白。推测这些蛋白质可能在Xcc 8004的致病性中起到重要作用,为进一步研究Xcc的致病机理奠定基础。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
庄维兵 高志红 章镇 侍婷 邵静
以果梅花芽为材料,比较了TCA/丙酮法和酚抽法2种总蛋白质提取方法对蛋白质双向电泳(2-DE)的影响,同时对IPG胶条种类、凝胶浓度、蛋白质上样量及染色方法等环节进行了优化。结果表明:TCA/丙酮法比酚抽法在2-DE凝胶图谱上的蛋白质点数增多,图谱背景也比较清晰,没有明显的纵横条纹;采用17 cm pH 4～7的胶条、10%的凝胶浓度、1.5～1.8 mg的蛋白质上样量,经改良胶条考马斯亮蓝G-250染色后可获得背景清晰、重复性好、蛋白质分辨率高的2-DE图谱。高质量的果梅花芽蛋白质提取方法和蛋白质双向电泳体系的优化可为果梅蛋白质组学研究奠定技术基础。
关键词：
果梅 花芽 蛋白提取 双向电泳
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