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[期刊] 水产学报
[作者]
王立军 周庆杰 曹泽艺 陈凯 谢骏 习丙文
洪湖碘泡虫是中国异育银鲫养殖中常见的一种粘孢子虫，严重感染时病鱼出现眼球凸起，咽部发炎肿胀等症状，造成苗种和成鱼死亡。为探究严重危害养殖异育银鲫“喉孢子虫病”病原的宿主范围以及不同宿主寄生虫株间的遗传差异，本研究广泛采集了金鱼、红鲫、异育银鲫、彭泽鲫、方正银鲫、淇河鲫、金背鲫、杂交鲫等我国常见鲫复合种样品，采用18S r DNA PCR检测了各样品伪鳃的洪湖碘泡虫感染率，并进一步通过巢式PCR克隆测序获得部分样品洪湖碘泡虫的ITS2序列(登录号：OR744899–OR744905)。PCR检测结果显示，来自7个地区8种鲫属鱼类品系都存在洪湖碘泡虫的隐性感染，感染率为25.0%～88.2%;ITS2序列分析表明，感染鲫复合种的洪湖碘泡虫株系间序列差异较低，所获得的序列间仅有6个差异信息位点，平均遗传距离为0.003；不同来源虫株间共存在7种单倍型，其中H1、H2和H3只出现在金鱼、红鲫寄生虫株，H5广泛存在不同来源的异育银鲫寄生虫株。系统发育分析显示，来自不同鲫复合种的洪湖碘泡虫聚集为2个分支，其中寄生金鱼的虫株与瓶囊碘泡虫亲缘关系较近。本研究结果为阐明异育银鲫“喉孢子虫病”的流行病学规律和防控疾病发生提供重要基础数据。
[期刊] 水产学报
[作者]
杨坤 翟凯旋 习丙文 陈凯 谢骏
为探究洪湖碘泡虫感染异育银鲫不同组织器官中的分布及不同感染阶段的差异，实验采用显微镜镜检、PCR检测及组织病理切片相结合手段，对发病异育银鲫及隐性感染异育银鲫的肌肉、伪鳃、鳃、头肾等11个组织器官进行了广泛检测分析。显微镜镜检发现，在发病鱼的咽、伪鳃和鳃能观察到孢囊或成熟孢子；在隐性感染异育银鲫的咽上壁与副蝶骨间结缔组织、伪鳃及其血管周边观察到大量棕黄色结节，并含有洪湖碘泡虫的成熟孢子；不同组织器官DNA样品PCR检测发现，在发病鱼除肌肉外的其他10个组织器官中均检测到洪湖碘泡虫阳性，其中伪鳃检出率最高（100%）；隐性感染异育银鲫在咽上壁组织、伪鳃、头肾、体肾、脾脏及卵巢中检出洪湖碘泡虫阳性，伪鳃检出率也为最高（26.7%）；组织病理切片显示发病鱼咽上壁内分布着大量蜂巢状孢囊及成熟孢子，伪鳃被严重侵占和破坏；残存伪鳃鳃丝周边能观察到增殖和发育阶段的孢子生成细胞。综上所述，本研究首次报道了洪湖碘泡虫在发病和隐性感染异育银鲫不同组织器官中的分布差异，发现伪鳃可能是洪湖碘泡虫寄生和发育成熟的重要器官。研究结果为洪湖碘泡虫病的准确检验检疫和进一步开展致病机制研究奠定基础。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
杨坤 翟凯旋 习丙文 陈凯 谢骏 潘良坤
洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)是引起异育银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)“喉孢子病”的重要病原， 每年导致养殖苗种和成鱼大量死亡。本研究通过隐性感染异育银鲫母本人工受精、实验室条件下受精卵孵化和幼鱼培育， 采用单管半巢式PCR、荧光定量PCR和寡核苷酸荧光原位杂交等检测手段进行亲本、卵和幼鱼等环节的检测分析， 探究异育银鲫寄生洪湖碘泡虫是否存在经卵传播途径。结果表明， 实验所采用34尾异育银鲫母本(A1～A22， B1～B12)的洪湖碘泡虫隐性感染率达50%～75%， 其中， 卵和伪鳃检出率高于卵巢组织样品; 特异性寡核苷酸探针荧光原位杂交在隐性感染母本的卵巢、伪鳃、肾、脾组织检测到洪湖碘泡虫前孢子生成阶段营养体; 实验室条件下阳性母本所产的卵经孵化和培育出的幼鱼15 dph和30 dph样品可以检出阳性(A1、A18、B8和B9); 荧光原位杂交显示15 dph幼鱼在伪鳃、鳃和肾脏组织检测出阳性信号。本研究进一步揭示了异育银鲫寄生洪湖碘泡虫存在经鱼卵传播途径; 研究结果为相关疾病制定防控措施奠定重要的理论基础。
[期刊] 水产学报
[作者]
张潇艺 丁鹏 张城豪 孙荣华 杨承忠 柳阳
为了完善瓶囊碘泡虫的分类学特征及厘清其与洪湖碘泡虫的分类关系，实验采用形态学、组织学和分子生物学方法对瓶囊碘泡虫进行了重描述，并与洪湖碘泡虫的分子标记进行了系统比较。结果显示，瓶囊碘泡虫寄生于异育银鲫的鳃，形成乳白色的圆形或椭圆形孢囊，直径为1.2～1.4 mm。成熟孢子壳面观呈梨形，前端较尖，后端钝圆，孢子长17.3～19.6μm，孢子宽7.4～9.9μm。两个极囊呈瓶状，大小不等。大极囊长6.4～9.7μm，大极囊宽2.1～3.3μm；小极囊长5.3～8.9μm，小极囊宽2.0～3.3μm。极丝圈数为8～11圈。组织学分析显示，瓶囊碘泡虫寄生于鳃小片间的上皮组织。BLAST分析显示，本研究获得的瓶囊碘泡虫的小亚基核糖体DNA (SSU rDNA)序列与GenBank中瓶囊碘泡虫序列的相似性为99.5%～99.8%(KC425223～KC425225、MH329620、JQ690361、JQ690373、KJ725082、MN227351、DQ339482)。系统发育分析表明，瓶囊碘泡虫与洪湖碘泡虫形成姐妹支。瓶囊碘泡虫与洪湖碘泡虫分子标记序列的比较结果显示，这两种碘泡虫的序列相似性为98.2%～98.8%，遗传距离为0.014～0.018，存在27个碱基差异。SSU rRNA二级结构分析显示，瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫同一物种不同群体间的二级结构一致，两个物种间的二级结构存在明显差异，表明SSU rRNA二级结构可以作为鉴别瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫的分子特征。本研究完善了瓶囊碘泡虫在异育银鲫鳃部的详细寄生部位，提出SSU rRNA二级结构可以作为有效鉴别瓶囊碘泡虫和洪湖碘泡虫的分子标记。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
李德文 王瑞 魏忠芬 李加纳 王军 李大雄 张太平
为辅助油菜育种中合理选配亲本以及加快遗传改良进程提供可靠依据,采用SSR标记对37份甘蓝型油菜隐性核不育系和59份不同来源的恢复系进行遗传多样性分析。结果表明:62对SSR引物共扩增出177条多态性条带,平均每对引物为2.9条。材料间的遗传相似系数为0.57～0.93;以0.62为阀值,将96份材料划分为7个类群。除了2365AB及2149AB外,其余35份隐性核不育系聚在类群Ⅱ和类群Ⅲ中,恢复系聚在类群Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ中;虽然隐性核不育系间的遗传差异较小,但是有14份隐性核不育系与19份恢复系间的遗传距离大于0.7,这对育种工作有重要参考价值。
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
许宝红 肖调义 苏建明 江辉 葛熹凯
采用RAPD技术,选用11条有效随机引物研究了南洞庭湖15种野生蚌(圆顶珠蚌、尖锄蚌、圆头楔蚌、鱼尾楔蚌、巨首楔蚌、射线裂脊蚌、球形无齿蚌、勇士尖嵴蚌、扭蚌、杜氏珠蚌、背瘤丽蚌、短褶矛蚌、三巨瘤丽蚌、环带丽蚌、蚶形无齿蚌)之间的遗传多样性,得到RAPD-DNA扩增条带1775条,片段长度500～1500bp,平均每条引物扩增出43.5条带,这些条带构成了南洞庭湖15种野生蚌的遗传多样性图谱.分析表明,属间的遗传距离以裂脊蚌属和尖嵴蚌属间最近,为0.4857,丽蚌属与其他属间的遗传距离最远,为0.7292;种间的遗传距离以圆头楔蚌和巨首楔蚌间最小,为0.3333,背瘤丽蚌与三巨瘤丽蚌及环带丽蚌的...
关键词：
蚌 RAPD 遗传多样性 南洞庭湖
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
贾洛 顾泽茂 柳阳 郭庆祥 李丹 翟艳花
利用蔗糖密度梯度离心法分离纯化洪湖碘泡虫,经反复冻融、液氮研磨提取可溶性蛋白,免疫小鼠制备得到多克隆抗体,并采用间接酶联免疫吸附法(ELISA)、间接免疫荧光试验(IFAT)、免疫印迹分析(Western blotting)对多克隆抗体的免疫特性进行分析。间接ELISA法测定多抗血清的效价为1∶25 600;IFAT荧光定位显示洪湖碘泡虫的抗原主要位于极丝、孢子壳瓣的四周及底部一特定位置;Western blotting印迹分析显示该多抗血清与洪湖碘泡虫可溶性蛋白中约10条带发生反应,该可溶性蛋白中具有免疫原性的蛋白分子质量大小分别约为180、130、78、75、62、52、42、36、34、...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
翟凯旋 曹泽艺 习丙文 陈凯 谢骏
为了阐明洪湖碘泡虫(Myxobolushonghuensis)在隐性感染异育银鲫(Carassiusauratusgibelio,Bloch)不同组织器官中的分布情况,本研究采集曾发生过喉孢子虫病养殖池塘的2龄健康异育银鲫的鳃(丝)、伪鳃、中肾、头肾、肌肉、脾脏、肝脏、卵巢、血液等9个组织器官,采用荧光定量PCR检测分析了不同组织器官的感染率和相对感染强度。结果显示,所采集的30尾异育银鲫都没有明显临床症状,但鱼体的洪湖碘泡虫感染率为100%,均为隐性感染个体;各组织器官间的感染率存在较大差异,除肌肉未检出外,感染率从高到低依次为:伪鳃(100.0%)、卵巢(83.3%)、鳃(73.3%)、脾脏(70.0%)、中肾(36.7%)、头肾(23.3%)、肝脏(10.0%)、血液(6.7%)、肌肉(0)。不同组织器官的相对感染强度由高到低依次为:伪鳃(14.4349±70.0529)、卵巢(0.9556±1.5627)、脾脏(0.3644±0.7854)、鳃(0.3339±0.2682)、头肾(0.2722±0.3761)、中肾(0.0379±0.1055)、肝脏(0.0019±0.0022)、血液(0.0012±0.0011)。研究表明,洪湖碘泡虫可系统感染异育银鲫多个组织器官,其中,伪鳃感染率和感染强度最高,可以作为该病早期检测和疫病监测的首选组织器官。
[期刊] 海洋水产研究
[作者]
王庆恒 杜晓东 李康
采用12个随机引物对北海、三亚、厦门地区的光裸星虫进行RAPD分析,结果表明,光裸星虫北海、厦门、三亚种群平均多态位点比例分别为73·39%、84·20%和87·00%,平均遗传多样性指数分别为0·2450、0·2958和0·2670。北海种群和三亚种群遗传距离(Dbs)为0·1225;北海种群与厦门种群的遗传距离(Dbx)为0·2947;三亚种群与厦门种群的遗传距离(Dsx)为0·2193。在聚类分析树上,厦门种群最先从聚类树上分支出来。OPH-02-880和OPO-09-510为厦门种群的特征性片段,可作为种群鉴别的依据。
关键词：
光裸星虫 遗传多样性 RAPD
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李大命 张彤晴 唐晟凯 钟立强 刘小维
利用线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（ＣＯⅠ）分子标记对洪泽湖河蚬（ＣＯｒｂｉＣｕｌａ ｆｌｕｍｉｎｅａ）野生种群的遗传多样性水平进行分析。采集洪泽湖野生河蚬５０个个体，对ＣＯⅠ基因序列片段进行ＰＣｒ扩增和序列测定。结果显示，长度为６１４ ｂＰ的ＣＯⅠ基因片段中，碱基ａ、Ｔ、Ｇ和Ｃ的平均含量分别为２２．６％、４２．４％、２１．０％和１４．０％，ａ＋Ｔ的含量（６５．０％）显著高于Ｇ＋Ｃ的含量（３５．０％）。ＣＯⅠ基因序列中有６７个核苷酸变异位点，总变异率为１０．９％，其中简约信息位点６３个，单一信息位点４个。５０条ＣＯⅠ基因序列共定义了１５个单倍型，单倍型多样性指数（ｈ）和核苷酸多样性指数（π）分别为．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李大命 张彤晴 唐晟凯 钟立强 刘小维
利用线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)分子标记对洪泽湖河蚬(Corbicula fluminea)野生种群的遗传多样性水平进行分析。采集洪泽湖野生河蚬50个个体,对COⅠ基因序列片段进行PCR扩增和序列测定。结果显示,长度为614 bp的COⅠ基因片段中,碱基A、T、G和C的平均含量分别为22.6%、42.4%、21.0%和14.0%,A+T的含量(65.0%)显著高于G+C的含量(35.0%)。COⅠ基因序列中有67个核苷酸变异位点,总变异率为10.9%,其中简约信息位点63个,单一信息位点4个。50条COⅠ基因序列共定义了15个单倍型,单倍型多样性指数(h)和核苷酸多样性指数(π)分别为...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
冯建彬 吴春林 丁怀宇 华雪铭 李应森 李家乐
利用微卫星标记分析了洪泽湖避风港、蒋坝、鲍集等9个日本沼虾(Macrobrachium nipponense)野生群体的遗传多样性。结果表明,8个微卫星位点呈现高度多态性;每个群体中至少有5个位点显示杂合不足,显著偏离了Hardy-Weinberg平衡;9个日本沼虾野生群体均表现出较高的遗传多样性水平,洪泽湖中、东部避风港和蒋坝等群体遗传多样性高于西部鲍集和界集群体。突变-漂移平衡分析表明,洪泽湖日本沼虾群体部分位点杂合显著过剩,表明洪泽湖日本沼虾群体部分位点偏离了突变-漂移平衡,但近期没有经历过瓶颈效应,群体数量也没有下降。群体间F-统计量及AMOVA分析表明,群体遗传分化极显著(F ST=...
关键词：
洪泽湖 日本沼虾 微卫星 遗传多样性
[期刊] 淡水渔业
[作者]
李丹 柳阳 翟艳花 顾泽茂
为建立一种灵敏、特异的快速检测异育银鲫寄生洪湖碘泡虫(Myxobolus honghuensis)的方法,本研究根据洪湖碘泡虫ITS-5.8S r DNA基因序列筛选出一对特异性引物Mh F/R,建立PCR检测方法,对反应条件进行优化,并通过特异性试验、灵敏性试验与临床检测验证其可行性。结果显示,建立的PCR检测方法能特异性扩增洪湖碘泡虫相应的基因片段,长度为479 bp,而对试验中其他9种粘孢子虫的扩增结果均为阴性;最低能检测0.1 pg的虫体基因组DNA。通过临床样品检测,PCR方法比显微镜检测的检出
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
吴滟 傅洪拓 李家乐 龚永生 李明爽
利用随机扩增多态DNA(RAPD)技术对太湖湖区不同水域(无锡、宜兴、苏州及湖州水域)野生日本沼虾群体进行基因组DNA的遗传多样性分析。在事先优化的条件下,试验从选用的50个随机引物中筛选出16个有效引物,共检测到117个清晰稳定的位点,大小为200bp～2000bp,其中92个位点具有多态性。四个群体的多态位点比例分别为49.57%、60.68%、53.85%、57.26%,杂合度为0.2077～0.2163,Shannon信息指数为0.2967～0.3053,群体间遗传分化指数Gst值为0.1644～0..2002。AMOVA分析结果显示,群体的遗传变异有16.67%是由群体间遗传变异引起...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
房超 李跃建 帅波 刘独臣 刘小俊 梁根云 杨宏
应用SRAP分子标记技术对87份来茄子及其近缘野生种进行了遗传多样性分析。结果显示,从88对SRAP引物中筛选出18对多态性高、稳定性好的引物组合,共检测出309清晰个位点,平均每对引物检测到17.2个扩增位点。.参试茄属植物种质群体位点的平均杂合度为0.6962;平均多态信息含量为0.6441。82份栽培种茄子材料的平均相似系数为0.822,表明茄子栽培种的基因库较小,遗传基础较为狭窄。聚类分析结果表明,87份材料可分成4大类,可以较好地将茄子栽培种与其近缘野生种分开,并且基本可将高级栽培种(S.melongena L.subsp.melongena)和原始栽培种(S.melongena L...
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