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[期刊] 中国水产科学
[作者]
陈中元 刘荭 李正秋 王敏 张奇亚
为查明养殖鲤(Cyprinus carpio)突然大批发病死亡的原因,对鲤病样品进行了细胞攻毒、空斑测定、电镜观察,以及鱼体感染等实验。先以患病鲤的组织匀浆液,经过滤后,分别接种到草鱼鳍条细胞(GCF)、鲤上皮瘤细胞(EPC)等14种培养细胞中。利用倒置显微镜观察显示,在1~2 d内,该病鱼组织匀浆液可使其中9种细胞出现典型的细胞病变。收集出现病变的细胞液(即病毒悬液),进一步进行病毒滴度检测、空斑测定和鱼体感染实验。结果显示,在GCF细胞上的病毒滴度为107.3TCID50/mL;在FHM,TSB和GCO等细胞中可产生直径1~4 mm的圆形空斑,空斑的大小与宿主细胞的种类和接种的病毒浓度有关...
关键词：
鲤 病毒 细胞培养 病毒感染 空斑实验
[期刊] 中国农业科学
[作者]
邹兴启 赵启祖 范运峰 朱元源 王琴 徐璐 范学政 宁宜宝
【目的】建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒C株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础。【方法】本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了C株全长感染性克隆pAC-CS。体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞。拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖。【结果】通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功。经比较以电转的方式转染SK6的效果较好。通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达104TCID50.mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧...
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
温立斌 张丹 何孔旺 解建平 董美响
利用无缝克隆方法构建ＺＪ－Ｒ全长基因组的单拷贝分子克隆以及双拷贝串联分子克隆；通过生物信息学技术预测ＺＪ－Ｒ病毒结构蛋白的Ｂ细胞抗原表位，人工合成选定的表位肽，然后偶联ＫＬＨ免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体；免疫组化试验证实该多抗与转染ＰＫ１５细胞的ＺＪ－Ｒ双拷贝串联分子克隆具有反应性。结果表明构建的ＺＪ－Ｒ双拷贝串联分子克隆具有感染性。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
周斌 党占国 刘珂 陈溥言
通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了猪瘟病毒(CSFV)的E0、E2和E012基因并进行了克隆与鉴定。构建了真核表达载体pcDNA-E0、pcDNA-E2和pcDNA-E012,通过与鼠白血病病毒(MuLV)假型病毒构建体系的两种质粒pHIT60和pHIT111瞬时共转染人胚肾细胞(293T),48h后收集假型病毒上清液,将假型病毒上清液超速离心后用抗CSFV的多抗进行Western-blot检测。结果证明E012蛋白能够在假型病毒颗粒表面表达,说明E012能够整合到此病毒粒子表面;用其感染多种宿主细胞,48h后检测发现在猪肾细胞(SK6,PK15)和猪睾丸细胞(ST)上,标记基因...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王晓钧 魏丽丽 相文华 张晓燕 吕晓玲 赵立平 朱远茂 邵一鸣 沈荣显
马传染性贫血病毒(equineinfectiousanemiavirus,EIAV)驴强毒株DV是一株经过驴体传代获得的而具有超强毒力的毒株,对马和驴均可100%致死。用PCR方法分段扩增了DV其前病毒基因,将包含全基因片段的3个基因克隆以限制性内切酶消化后顺次连接克隆到pLG338上,命名为pD70344。将此克隆体外转染驴胎皮肤细胞和驴白细胞,连续盲传3代并以反转录酶活性测定,RT-PCR鉴定其病毒活性,透射电镜观察发现细胞培养物中存在大量典型病毒粒子,证明获得了1株具有感染性的EIAV病毒粒子,命名为pD70344V。经序列测定确认了本试验首次构建了1株完全来源于EIAV强毒基因的感染性...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
祁小乐 高宏雷 高玉龙 邓小芸 步志高 王晓燕 王笑梅
【目的】建立高效鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)拯救平台,为深入研究该病毒基因组的结构与功能奠定基础。【方法】在IBDVGt株全基因组中引入分子标签(A节段:EcoR V酶切位点;B节段:PstI酶切位点)。在基因组两端分别引入锤头状核酶结构(HamRz)和丁肝病毒核酶结构(HdvRz)。将带有分子标签和核酶结构的IBDV基因组插入载体pCAGGS的β肌动蛋白启动子下游,构建IBDV感染性克隆pCAGGmGtAHRT和pCAGGmGtBHRT,LipofectamineTM2000介导共转染DFI细胞,进行病毒拯救研究。【结果】构建的IBDV感染性克隆可在DFI、Vero/E6、Vero/P1...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
陈昌英 王泽洲
用血凝试验（ＨＡ）来测定肾病变型传染性支气管炎地方毒株（ＩＢＶ—Ｌ）的半数感染量（ＥＩＤ＿（５０））。对ＩＢＶ的ＨＡ试验进行初步研究的结果表明，ＩＢＶ—Ｌ株未经胰酶处理不具有血凝性，经１％～２％胰酶处理２～３，小时具有凝集鸡红细胞的特性，且以０．７５％鸡红血球悬液凝集状态最佳，１％以上者血凝价明显降低，对于不同孔型微量反应板进行测定，以Ｕ型板凝集效果最好。在建立ＨＡ试验的基础上，作者利用ＨＡ试验和特征性病变两种方法分别测定ＩＢＶ—Ｌ的ＥＩＤ＿（５０），两种方法对比的结果相似。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
郭龙军 陆月华 黄立平 危艳武 刘长明
【目的】中国猪群中猪圆环病毒2型(PCV2)感染存在不同基因型毒株(PCV2a、PCV2b和PCV2d),有必要阐明不同基因型PCV2毒株的致病性差异。【方法】采用感染性克隆技术构建了不同基因型代表性毒株,对拯救的毒株进行体外生物学特性试验。【结果】构建了4个不同基因型的PCV2感染性分子克隆,经转化细胞后拯救4个克隆毒株,经核酸序列分析、病毒形态学观察、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)等证实属于不同基因型的PCV2毒株;拯救的毒株均通过细胞连续传10代,病毒增殖能力稳定,毒价均可达到105.0TCID50.mL-1;用具有中和病毒活性的单克隆抗体(1D2株)进行抗原捕获ELISA检测,...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
艾海新 王崇明 王秀华 刘英杰 李赟 贺桂珍 宋微波
从发病疫区栉孔扇贝(Chlamysfarreri)组织中分离出病毒和立克次体(Rickettsiaorganism,RO),对健康栉孔扇贝进行人工感染。结果显示,病毒注射组死亡率为75%,病毒浸浴组死亡率为68.7%;RO注射组死亡率仅为18.7%;灭活RO注射组死亡率为31%;灭活病毒注射和空白对照组死亡率皆为12.5%;病毒注射、浸浴组与灭活病毒注射组、空白对照组死亡率有显著差异。而RO注射组与灭活RO注射组、空白对照组死亡率没有显著差异。电镜复检结果显示,发病扇贝的外套膜、鳃、消化腺组织中分布有大量病毒粒子,该病毒粒子的形态特征、病理学特征与自然海区发病扇贝中的病毒粒子特征完全一致。人工...
关键词：
栉孔扇贝 病毒 立克次体 人工感染实验
[期刊] 中国水产科学
[作者]
刘丹 耿毅 汪开毓 余泽辉 陈德芳 欧阳萍 黄小丽 牟维豪 李亚军
本研究旨在观察大鲵在大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)感染过程中组织的动态病理损伤,同时定量检测CGSRV在组织中的动态分布。对大鲵腹腔注射1.0×106.5 TCID50/m L的CGSRV进行人工感染,在感染的0d,3d,5d,7d,9d,13d,16d随机采集3尾,取肝、肾、脾、肺、肠、皮肤、肌肉、脑、心脏和胃等组织,石蜡切片和HE染色对CGSRV感染大鲵的病理损伤过程进行观察,采用SYBR Green q PCR技术对病毒在组织中的动态分
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李薇 罗维 余兴龙 李润成 白霞 葛猛 王亚 向卫军 李晶
通过PCR扩增出猪圆环病毒2(PCV-2)3个亚群(1A、1B、1C)毒株的全基因组DNA序列,并分别克隆入pMD-18T载体,获得含有PCV-2全基因组的3个重组质粒,分别命名为RP8(1A)、P0(1B)和P4-1(1C)。将3个重组质粒分别用SacⅡ切出l 767 bp的PCV-2全基因组,并在体外分别用T4连接酶连接而环化。用脂质体将3种自身环化的基因组转染无PCV-1污染的PK-15细胞,并按常规病毒培养方法分别传代,第5代细胞培养物分别用间接免疫荧光试验(IFA)及PCR方法检测转染的细胞,检测结果均为阳性,说明已获得PCV-2共3个亚群1A、1B、1C的感染性克隆。用1A、1B、...
关键词：
猪圆环病毒2 感染性克隆 基因亚群 毒力
[期刊] 中国农业大学学报
[作者]
张龙现 宁长申 吴宁鹏 郎利敏 贾志阳
采用鸭源贝氏隐孢子虫卵囊经口感染2日龄雏鸡,感染剂量分别为8×10~5,16×10~5,32×10~5,64×10~5个/只,设空白对照组.在 PID5,PID10,PID25各取2只鸡进行病理剖检并取其喉头、气管、法氏囊进行扫描电镜观察.在 PID20和 PID25对各试验组动物进行称重,并在 PID25全剖杀实验动物采摘法氏囊并称重;计算各组动物法氏囊与体重元比.结果表明:接种后第4 d 在各组鸡粪便中查到隐孢子虫卵囊.持续排卵囊时间25 d 左右;排卵囊高峰期分别为8×10~5为 PID8～15,16×10~5为 PID12～16,32×10~5为 PID5～16,64×
[期刊] 淡水渔业
[作者]
杨明生
20 0 1年 4月对彭泽鲫鱼卵感染水霉的问题进行了研究 ,设计了 11个处理组 ,对受精卵、未受精卵、死胚卵进行了观察 ,孵化 116h均未见到霉卵出现。另外探讨了孔雀石绿对胚胎发育的影响 ,使用孔雀石绿处理 ,浓度在 2 0mg L内 ,每次不超过 10分钟对胚胎发育是安全的 ,但会明显延迟出膜时间
关键词：
彭泽鲫 孔雀石绿 水霉 抗性
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘文枝 曾令兵 张辉 杨星 徐进 江南 周勇 马杰
鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirusⅡ,CyHV-2)感染异育银鲫(Carassius auratus gibelio)是近年新出现的一种严重病毒性疾病,已经造成重大经济损失,目前缺乏有关该病发病机理的相关研究。以CyHV-2感染异育银鲫的患病鱼内脏组织超微过滤匀浆液,腹腔注射感染健康异育银鲫,分别对感染组与对照组鲫尾静脉采血,进行白细胞分类计数、吞噬细胞活性检测以及血清生化指标测定与分析。结果表明,与对照组相比较,感染组鲫血细胞总数变化不明显,但单核细胞和淋巴细胞百分比显著上升,其中淋巴细胞上升呈极显著差异(P<0.01),单核细胞上升呈显著差异(0.01
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
陈俊杰 李媛媛 阳瑞雪 古晶晶 汪开毓 耿毅 欧阳萍
为建立一种特异和敏感的检测锦鲤疱疹病毒(koi herpesvirus,KHV)潜伏感染的方法,以KHV Sph基因为靶序列设计特异性引物,通过条件优化建立Real–Time PCR检测方法,并且对该方法进行特异性和敏感性评估及临床样品应用研究。结果显示:建立的方法与鲤痘疱疹病毒、金鱼造血器官坏死病病毒和鳗鲡疱疹病毒均无交叉反应,特异性强;最低检出率为42拷贝/μL,灵敏度高。用本方法对63份临床样品进行检测,有锦鲤疱疹病毒病(KHVD)病史的18份样品的检测结果全为阳性,阳性率为100%;从有临床症状的
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