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[期刊] 中国水产科学
[作者]
丁炜东 曹哲明 曹丽萍
采用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆出鲇(Parasilurus asotus)垂体阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)基因全长cDNA序列,共1 099 bp,包括129 bp 5′非翻译区、648 bp阅读框以及322 bp 3′非翻译区,阅读框共编码215个氨基酸,POMC前体蛋白的结构主要由信号肽(Met1-Ala28)、N端多肽(Gln29-Asp102)、促肾上腺皮质激素(ACTH,Ser 105-Met144)、α-黑色素细胞刺激激素(α-MSH,Ser105-Val 117)、促肾上腺皮质激素样中叶肽(CLIP,Arg123-...
关键词：
鲇 垂体 阿黑皮素原
[期刊] 华北农学报
[作者]
赖章龙 阮超岭 肖伟 刘彦斌 俞兆曦 刘凯 赛清云 田永华 张锋 杨瑞兰 柳婷 杨立强 王玉涛 连总强
针对兰州鲇人工驯食转化率、苗种培育成活率低等问题，为利用基因编辑技术创制和培育易驯食兰州鲇新种质，开展了兰州鲇神经肽Y基因(NPY)的克隆及其表达分析研究。结果表明：兰州鲇NPY基因cDNA序列全长为775 bp,包括288 bp的开放阅读框，编码95个氨基酸，含有1个跨膜螺旋和1个信号肽胰腺激素类识别结合位点。兰州鲇NPY蛋白序列与南方鲇的一致性最高，为98.95%。荧光定量PCR检测发现NPY mRNA在脑组织中表达量最高，其次是下丘脑，肌肉中表达量最低。不同年龄雄性各组织中NPY mRNA表达水平均高于雌性；且雌雄性别组间均表现出随年龄的增长NPY mRNA表达下降的特征。利用原位杂交技术进行脑组织细胞定位发现，脑细胞中NPY主要在细胞质中表达；不同部位脑组织中主要以前脑的视前区、视顶盖和脑垂体，小脑的豆状核区域以及延脑的尾状核区域表达量较丰富。进一步进行饥饿补偿验证发现，饥饿可引起脑组织NPY表达量显著升高，摄食后NPY表达量显著下降。上述结果表明，NPY基因可能在兰州鲇生长和摄食过程中都具有重要作用，可作为对后续功能基因进行编辑的重要验证并创制新种质，对加快兰州鲇良种新品种选育具有重要的理论意义和技术支撑作用。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
孙晶 李广丽 朱春华 吴天利 邓思平
采用RT-PCR和RACE法,克隆了胡子鲇(Clarias fuscus)脑型芳香化酶基因Cyp19a1b,应用荧光实时定量PCR检测其在前脑、下丘脑、脑垂体、肝、精巢和卵巢6种组织,以及性腺分化前后(出膜后12～30 d)全鱼中的mRNA表达。结果表明,Cyp19a1b cDNA全长2 347 bp,5′端非编码区219 bp,3′端[不包括poly(A)]596 bp,开放阅读框(ORF)1 503 bp,编码500个氨基酸,推测其编码蛋白质分子量为56.388 kD。序列分析及分子系统进化树结果表明,胡子鲇Cyp19a1b氨基酸序列与非洲鲇(Clarias gariepinus)Cyp1...
[期刊] 上海水产大学学报
[作者]
单红 周国勤 张其中
采用RT-PCR法和SMARTRACE(rapid amplification of cDNA ends)技术从南方鲇肝脏RNA克隆获得Hsc70基因的全长cDNA(scHsc70 cDNA)。此cDNA全长2384 bp,其中,5′非编码区194 bp,3′非编码区249bp,编码区域(coding sequence,CDS)长度为1941 bp。根据编码序列推导出相应的646个氨基酸,与其他脊椎动物Hsc70序列进行同源性比较,发现南方鲇Hsc70与欧洲银鲫(Carassius auratus gibelio)、鲦鱼(Pimephalespromelas)、人(Homo sapien)和鸡...
关键词：
南方鲇 Hsc70 序列对比 基因结构
[期刊] 华北农学报
[作者]
柳婷 李敏敏 赖章龙 刘彦斌 刘凯 肖伟 赛清云 田永华 杨立强 阮超岭 杨瑞兰 刘哲 连总强
为了解Dmrta1基因的生物学特性及其在兰州鲇生长发育中的生理作用，以及为加快实现全雄兰州鲇群体生产提供理论依据和技术支撑。采用同源克隆和cDNA末端快速克隆(RACE)技术获得兰州鲇Dmrta1全长cDNA序列，通过qRT-PCR技术检测该基因在兰州鲇胚胎发育、仔稚幼鱼以及3龄雌雄异体和3龄雌雄同体不同组织中的表达特征。结果表明，兰州鲇Dmrta1基因cDNA全长1 415 bp, ORF全长1 158 bp,共编码385个氨基酸，包含20种氨基酸；经SMART预测显示，该基因属于典型的Dmrta亚家族蛋白，具有保守的DM和DMA结构域。同源性比对和系统进化树分析结果表明，兰州鲇与南方鲇的相似性最高(95.47%),且亲缘关系最近。组织表达结果表明，Dmrta1 mRNA在未受精卵粒及胚胎发育各个时期均有表达，而在未受精卵粒中表达最高(P<0.05);在兰州鲇孵化后40 d内不同发育时期中，Dmrta1 mRNA在同期XX个体组织中表达均显著高于XY个体，且在35 d迅速达到峰值(P<0.05);Dmrta1 mRNA在3龄雌雄异体兰州鲇雌性卵巢、鳃和雄性鳃组织中表达显著高于其他组织(P<0.05),且卵巢表达显著高于雌性和雄性鳃，除卵巢表达是精巢的47.07倍外，其他组织中不存在雌雄性别差异；3龄雌雄同体和3龄雌雄异体表达特征一致，都是卵巢表达显著高于鳃和精巢(P<0.05)。以上结果说明，Dmrta1基因属于母源基因，该基因可能在兰州鲇性别分化、卵子形成和鳃弓形成过程中发挥重要作用，在雌雄同体和雌雄异体兰州鲇性腺中的作用一致。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张林 邹世平 艾晓辉 吴涛
为探讨中华鳖不同地理种群的POMC基因的多态性,建立区分中华鳖不同地理种群的分子遗传标记,采用RT-PCR的方法扩增得到4个不同地理种群(太湖鳖种群、沙鳖种群、台湾鳖种群和黄河鳖种群)中华鳖的POMC基因,对该基因进行克隆及序列测定,并对所测序列进行比较,分析其SNP位点,并对所得的SNP位点进行验证。结果显示:4个不同地理种群中华鳖所扩增的POMC基因的核苷酸序列均为786bp;以megalign软件比较分析4个不同地理种群中华鳖的POMC基因,发现该序列中共有15个多态性核苷酸位点,经过验证,第129位核苷酸的变异为台湾鳖种群不同于其他种群的变异,第441位核苷酸变异为太湖鳖种群不同于其他...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
俞兆曦 连总强 吴旭东 杨忠礼 李力 张锋 肖伟 赛清云
为研究兰州鲇（ＳｉｌｕｒｕＳ ｌａｎｚｈｏｕｅｎＳｉＳ）生长性状相关基因，运用ｒＴ－ＰＣｒ、Ｔａ克隆和核酸测序等技术对兰州鲇ＭｙｏＤ基因的ＣＤＳ区及全基因进行克隆和生物信息学分析。获得兰州鲇ＭｙｏＤ基因的完整ＣＤＳ区序列８１０ ｂＰ（Ｇｅｎ ｂａｎｋ登录号：ｋＴ２７７５５１）及ＭｙｏＤ基因全序列１ ２１０ ｂＰ（Ｇｅｎ ｂａｎｋ登录号：ｋＴ３３９１７５），包括部分５＇端６３ ｂＰ和３＇端５８ ｂＰ；ｏｒＦ区含有３个外显子和２个内含子，外显子长度分别为５１０ ｂＰ、８０ ｂＰ和２２０ ｂＰ，内含子长度分别为１５６ ｂＰ和１２３ ｂＰ，编码２６９个氨基酸残基组成的可溶酸性蛋白质；预测亚细胞定位Ｍｙ．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
王发新 连总强 吴旭东 魏大为 肖伟 李力
利用长片段PCR及T-A克隆技术,从兰州鲇(Silurus lanzhouensis)基因组DNA中首次克隆兰州鲇GH基因全序列并提交至Genbank获得登录号KM215221,同时,使用DNAstar等生物信息学软件进行序列分析研究。兰州鲇GH基因全长2 067 bp,由5个外显子和4个内含子组成,完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)为603 bp。5个外显子大小分别为10、140、117、132和204 bp;4个内含子大小分别为229、103、565和103 bp;内含子与外显子的连接区序列遵循基因组成规则。编码区编码1条由200个氨基酸残基组成的蛋白...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史学营 徐永江 武宁宁 柳学周 杨洪军 臧坤 史宝 李存玉
为认识养殖半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞学特性，利用显微观察方法研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞的形态特征，比较了３种色素细胞在有眼侧皮肤、无眼侧正常和黑化皮肤中的数量分布特征。为进一步揭示无眼侧黑化的分子机制，克隆了半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列。结果显示，黑色素细胞较大，含黑色和棕色的色素颗粒，有树突状分枝不明显和延伸成放射状两种形态；黄色素细胞较小，含黄色素颗粒；虹彩细胞最小，含鸟粪素颗粒。半滑舌鳎ＰＯＭＣ基因的Ｃ ＤＮＡ序列长９１０ ｂＰ，包括一个１１４ ｂＰ的５＇非翻译区和一个１５４ ｂＰ的３＇非翻译区，开放阅读框长度为６４２ ｂＰ，共编码２１３个氨基酸，包含ＡＣＴＨ、α．．．
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
史学营 徐永江 武宁宁 柳学周 杨洪军 臧坤 史宝 李存玉
为认识养殖半滑舌鳎无眼侧黑化的细胞学特性,利用显微观察方法研究了其皮肤黑色素细胞、黄色素细胞和虹彩细胞的形态特征,比较了3种色素细胞在有眼侧皮肤、无眼侧正常和黑化皮肤中的数量分布特征。为进一步揭示无眼侧黑化的分子机制,克隆了半滑舌鳎POMC基因的c DNA序列。结果显示,黑色素细胞较大,含黑色和棕色的色素颗粒,有树突状分枝不明显和延伸成放射状两种形态;黄色素细胞较小,含黄色素颗粒;虹彩细胞最小,含鸟粪素颗粒。半滑舌鳎POMC基因的c DNA序列长910 bp,包括一个114 bp的5'非翻译区和一个154 bp的3'非翻译区,开放阅读框长度为642 bp,共编码213个氨基酸,包含ACTH、α...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
马淑慧 李亚楠 赫晓燕 王海东 杨磊 董常生
【目的】对不同毛色绵羊皮肤中的阿黑皮素原(proopiomelanocortin,POMC)进行定位和表达差异分析,确定POMC与毛色形成的关系,进一步丰富有关哺乳动物毛色形成机制的理论知识。【方法】选取年龄相近的雄性黑色和白色成年绵羊各3只,用取皮器分别在臀部采集皮肤组织3块,对其中一块制作石蜡切片后采用免疫组织化学法确定POMC在不同绵羊皮肤中的定位,另两块置于液氮中冻存后分别提取皮肤总RNA和总蛋白,总RNA经反转录成cDNA后,经NCBI分析比对后设计POMC特异性PCR引物,采用QRT-PCR方法检测POMC基因在mRNA水平的表达差异;总蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳后,采用Wes...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
宋明江 陈叶雨 吴晓雲 刘亚 龚全 赖见生
【目的】研究似鲇高原鳅抗菌肽的生物学功能。【方法】通过似鲇高原鳅转录组测序数据库,获得LEAP-2基因序列。【结果】cDNA序列为2253 bp,其中5’非编译区(UTR)为270 bp, 3’UTR为1698 bp,开放阅读框为285 bp,编码94个氨基酸。信号肽预测结果显示LEAP-2信号肽包含28个氨基酸残基。似鲇高原鳅的LEAP-2与西藏高原鳅LEAP-2聚在一支,置信度为99%。组织分布结果表明,LEAP-2在健康似鲇高原鳅的鳃、肾脏、肝脏、肌肉、胃、脑、肠道、脾脏、皮肤、眼睛和心脏共11个组织中均有表达,其中,在似鲇高原鳅肝脏中的表达量最高,是鳃中表达量的2000多倍。在迟缓爱德华氏菌作用下,似鲇高原鳅LEAP-2 mRNA表达量在各免疫组织中呈现出不同的变化趋势。在粘膜相关组织皮肤、鳃和肠道中,细菌侵染后LEAP-2出现显著上调表达(P<0.05),随后下降;脾脏中LEAP-2先下降表达,随后显著上调表达(P<0.05)。【结论】似鲇高原鳅LEAP-2参与了机体对抗致病菌侵染的生物学过程。
[期刊] 华北农学报
[作者]
罗启慧 刘芸 唐秀莹 陈正礼
为了探究大豆异黄酮通过瘦素减重的作用机制,建立食源性肥胖大鼠模型,后进行低、中、高剂量(50,150,450 mg/kg)大豆异黄酮干预,并每周定期称量记录体重,采用苏丹Ⅲ染色、SABC免疫组织化学法和核酸原位杂交法,观察大豆异黄酮对肥胖大鼠体重、腹部脂肪细胞形态和下丘脑弓状核及垂体α-MSH、POMC mRNA、Ob-Rb mRNA表达的影响。结果显示,标准对照大鼠α-MSH在弓状核、垂体神经部和中间部均大量表达,POMC mRNA在弓状核和垂体仅少量表达,Ob-Rb mRNA仅在弓状核表达,同时肥胖大鼠3种因子表达均显著降低;大豆异黄酮干预后肥胖大鼠体重降低,腹部脂肪细胞面积缩小且形态分布...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
倪迎冬 周玉传 卢立志 陈杰 赵茹茜
采用反转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法 ,检测绍兴蛋鸭出雏后至性成熟期 (12 0日龄 )下丘脑促性腺激素释放激素 (GnRH Ⅰ )和阿片促黑激素皮质素原 (POMC)mRNA的变化。结果表明 :从 1日龄到 12 0日龄 ,下丘脑GnRH ⅠmRNA水平逐渐升高 ,1日龄水平最低 ,90日龄时显著高于 1日龄 (P
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
张林 吴涛 何力
为探讨不同地理群中华鳖的pomc基因的多态性,建立区分中华鳖不同地理群的分子遗传标记,采用PCR-RFLP的方法扩增得到4个不同地理群(太湖鳖群体、沙鳖群体、台湾鳖群体和黄河鳖群体)中华鳖的pomc基因,比较4个地理群中华鳖的pomc基因的同源性,构建遗传进化树,对其亲缘关系进行分析,并用AccⅡ、BscBⅠ、AsuⅠ和TscⅠ4种限制性内切酶对pomc基因进行酶切分析。结果显示:4个不同地理群的中华鳖均能扩增出786 bp的pomc基因。亲缘关系分析表明:在遗传上台湾鳖和沙鳖亲缘关系较近,而太湖鳖与黄河鳖亲缘关系较近。用酶切分析pomc基因扩增产物,结果表明:用AccⅡ内切酶对4种中华鳖po...
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