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[期刊] 渔业科学进展
[作者]
于佐安 王崇明 任伟成 蔡玉勇 李赟
多年来由于水产动物病毒病的流行,在世界范围内给水产养殖业,尤其是鱼类、对虾类和贝类养殖产业带来了严重的危害。病毒的分离纯化作为研究病毒病的必要手段,作用十分重要。因此,国内外学者对此进行了大量的研究,并取得了许多成果。本文综述了这3种水产动物病毒分离纯化的研究概况。
关键词：
水产动物 病毒 分离纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
王崇明 王秀华 宋晓玲 黄倢 宋微波
Electron microscopic examinations of ultrathin sections reveal the presence of spherical virus like particles in the digestive gland, kidney, and the intestine of moribund scallop Chlamys farreri collected during a severe mortality in Jiaozhou Bay (Qingdao, China) in 2000. The virions are approxima...
[期刊] 水产学报
[作者]
林华娟 秦小明 章超桦 长岛裕二
为了获得麻痹性毒素标准品,以毒化扇贝为试验材料,对扇贝中的麻痹性毒素(PSP毒素)进行了提取和分离纯化。以酸性80%乙醇溶液反复提取麻痹性毒素,得到了总毒性为6170MU的毒素粗提液。毒素粗提液经过超滤、Bio-GelP-2凝胶柱层析和Bio-Rex70离子交换柱层析等二次层析柱分离纯化后得到以膝沟藻毒素群(GTXs)为主的纯化PSP毒素。HPLC分析结果显示,扇贝中主要含有膝沟藻毒素GTX3,GTX1、GTX2、GTX3、和GTX4的组成比例约为2∶4∶14∶1(以HPLC上的峰面积比例计)。纯化后的毒素可以作为标准物质用于GTX1-4的HPLC分析。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
张星朗 周小愿 张辉
【目的】确定陕西省略阳县某大鲵养殖场高致死性疾病的病原,分析其主要衣壳蛋白(MCP)的基因特征。【方法】采集患病大鲵,观察其临床症状,取其脏器组织,处理后分别分离细菌和接种鲤鱼上皮瘤(EPC)细胞,观察细胞病变,分离病毒;对病原进行增殖,采用蔗糖密度梯度(20%,30%,40%,50%,60%)离心法进行纯化,电镜观察纯化样品。克隆分离病毒的MCP基因,测定其序列并进行系统进化树分析。【结果】患病大鲵背部有溃疡、头部胀大且有出血点,尾部有轻微的溃烂。取病鲵内脏组织样品分离病原,未分离到细菌;处理的内脏组织感染EPC细胞,出现细胞病变。电镜观察证实,在蔗糖密度梯度为50%~60%的样品中,病毒粒...
关键词：
大鲵 虹彩病毒 纯化 MCP 系统进化树
[期刊] 水产学报
[作者]
姚翠鸾 王志勇 张瑞英 韩学哲 张子剑 孔鹏 冀培丰 黄珊珊
经过CM-纤维素批量层析、Separdex G-100柱层析、DEAE-纤维素柱层析等步骤,从凡纳滨对虾肌肉组织分离得到精氨酸激酶,经SDS-PAGE检测达到电泳纯,分子量约为40kDa。对该酶的性质进行分析结果表明,精氨酸激酶的最适作用温度为55℃,当温度高于65℃时,酶活力显著下降;pH8时酶活力较高,低浓度的精氨酸对酶活力有促进作用,高浓度时表现抑制作用,而底物类似物精胺和氨基胍则对酶促反应表现出完全的抑制。NaCl,KCl对酶的活力具有促进作用,低浓度(10mmol.L-1)MgCl2对酶活力表现出激活作用,而CuCl2与MnCl2则表现出完全抑制酶活力,CaCl2与ZnCl2在低浓度...
关键词：
凡纳滨对虾 精氨酸激酶 纯化 性质
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
荣雅利 周婷婷 施文正 汪之和 李燕
南极磷虾生活在在极寒环境，其体内特殊的蛋白酶系统是其维持正常新陈代谢的关键因素。羧肽酶为南极磷虾蛋白酶系统中一类主要且关键的蛋白酶，酶学性质研究对其后续基础研究开展及商业利用都具有指导意义。本研究以南极磷虾为原料，采用缓冲液提取、硫酸铵分级盐析，DEAE-琼脂糖凝胶FF阴离子层析和Sephadex G-100凝胶层析，从南极磷虾匀浆液中分离纯化出一种羧肽酶，SDS-PAGE结果显示其分子量为30ku。酶学性质研究结果显示：该酶最适温度为30℃；最适pH为8.0。热稳定性较差，即使在4℃下保温超过2h酶活性会急剧下降。金属离子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)具有激活作用，且激活作用依次增强；而Ca~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)起抑制作用，Cu~(2+)抑制效果最明显。对巯基有修饰作用的抑制剂DTT、β-巯基乙醇对其有抑制作用，推测该酶活性中心存在二硫键；金属蛋白酶抑制剂EDTA、1,10-菲罗啉对该酶活性有明显的抑制作用，说明了其具有金属蛋白酶特性；而丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF对该酶抑制作用并不强烈。以脲酰-L-苯丙氨酸为底物溶液，测得该酶Km为0.0059mg/mL、Vmax为4.9091U/min。
关键词：
南极磷虾 羧肽酶 分离纯化 酶学性质
[期刊] 水产学报
[作者]
林娜 马德蓉 刘志东 倪玲 段蕊 张俊杰
为了探究南极磷虾致敏问题，从南极磷虾中筛选、鉴定、分离纯化其主要过敏原，并对过敏原的性质进行研究，实验通过缓冲盐溶液提取南极磷虾蛋白；采用SDS-PAGE和Western blot (WB)筛选南极磷虾过敏原；使用高效液相色谱-串联质谱鉴定过敏蛋白；通过等电点沉淀、硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析分离纯化过敏原；采用SDS-PAGE及WB分析南极磷虾主要过敏原的耐热性及对模拟胃肠液的消化稳定性。结果显示，南极磷虾肌浆蛋白(SP)和肌原纤维蛋白(MF)电泳条带丰富且分子量范围广。南极磷虾蛋白与虾蟹过敏患者血清能发生免疫反应，其中至少有4个蛋白条带发生了阳性反应；免疫反应最强烈的蛋白分子量约为35 ku，能够被所有的患者血清识别，经液质联用鉴定此过敏蛋白为南极磷虾原肌球蛋白(TM)。硫酸铵分级盐析纯化TM的最佳饱和度为50%；分离纯化后得到了纯度较高的TM，其等电点为4.4，热稳定性好，能与虾蟹过敏患者血清发生强烈的免疫反应。TM随着模拟胃液消化时间的延长，主条带分子量逐渐降低，最后稳定在33 ku左右，并且分子量为15和12 ku的降解片段含量逐渐增多且稳定存在；这些降解条带仍然能与过敏患者血清发生较强的免疫反应。随着模拟肠液消化时间的延长，TM原始片段逐渐减少直至消失，最后完全降解成分子量更小的多肽；TM经肠液消化后其降解产物免疫活性大大降低。研究表明，南极磷虾中存在过敏原，TM是其最主要的过敏原，且具有免疫反应性。TM还具备了过敏原的一般特性，比如耐高温、耐胃蛋白酶消化、对胰蛋白酶消化部分稳定。研究结果对于阐明南极磷虾潜在致敏问题的预警和防控具有现实意义，也为南极磷虾加工利用及过敏原消减技术构建提供基础信息。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李联泰 高健 安贤惠 许宁 张晓磊 阚飞
通过研究冻融海蜇触手,Sephadex G-10凝胶过滤层析脱盐,SP Sephadex C-25离子交换层析等分离纯化技术,从海蜇Rhopilema esculentum触手中分离到RE-5-6毒素,初步测定其分子量约为66.2kD并对其性质进行了初步研究。结果表明,RE-5-6具有下列性质。(1)对鸡血表现出较强的溶血活性;(2)可大大提高小白鼠的对热痛阈值即有明显的镇痛效果,且镇痛作用随着注射浓度的增加而加强;(3)对小白鼠皮肤和眼睛分别表现中度和轻度刺激性;(4)对革蓝氏阴性菌大肠杆菌以及真菌白色念珠菌等有抑制作用。但未检测到丝氨酸蛋白酶抑制剂活性。
关键词：
海蜇 毒素 溶血活性 刺激实验
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
王金丽 梁文艳 陈莉
通过萃取和常压柱层析色谱技术的合理组合,建立了从实验室培养的铜绿微囊藻中提纯微囊藻毒素MCLR的有效方法。MCLR粗提液先经过正己烷萃取脱脂、固相萃取净化,再用Sephadex LH-20凝胶过滤层析色谱分离去除杂质和色度,流出液分管收集,通过测定流出组分在238nm处的吸光度值,并对峰值组分进行鉴定,证明第2个洗脱峰为MCLR,其纯度为40.5%。最后利用DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换层析进一步纯化,以水为初始缓冲液,以3mmol/L NaCl水溶液洗脱MCLR,得到MCLR在238nm的特征吸收峰,MCLR的纯度达90%以上,最终得率为66.2%。
关键词：
MCLR 纯化 萃取 柱层析色谱
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
王建武 陈孝珊 贺建华
为了开拓植物蛋白质饲料资源 ,对桐粕中的醇溶性毒素进行了探讨 .桐籽去油后经有机溶剂提取得到醇溶性毒素 ,再经苯 +正己烷 (3∶ 2 ) ,苯 +乙酸乙酯 (3∶ 2 ) ,苯 +乙酸乙酯 (1∶ 1) ,苯 +乙酸乙酯 (1∶ 3)等 4种洗脱剂能分离出 TN1,TN2 ,TN 3等 3种毒素 ,其 Rf分别是 :0 .0 90 ,0 .30 1,0 .494(展开剂为 :苯 +正己烷 (3∶ 2 ) ) .其中醇溶性毒素和 TN3对试验鱼有明显的毒性 ;2 4h L D50 分别为 :0 .192 ,2 .75 4μg/m L ,48h L D50 分别为 :2 .495 ,0 .187...
关键词：
桐粕 毒素 分离纯化 性质
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
汪浩 乔绪稳 陈瑾 李图帅 张元鹏 侯继波 郑其升 孙卫东
[目的]验证利用革兰氏阳性增强基质颗粒(GEM)浓缩纯化口蹄疫病毒(FMDV)抗原的可行性。[方法]将含有3个自溶素基序的锚钩蛋白基因(PA)与针对O型口蹄疫病毒特异性纳米抗体基因(VHH)串联克隆入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建原核表达载体p ET-VPA,将其转化大肠杆菌宿主菌BL21(DE3),表达获得融合重组蛋白VPA。先将GEM颗粒与重组蛋白VPA在37℃孵育30 min,离心,取沉淀用适量的FMDV抗原液重悬,再经一步低速离心,获得沉淀即为浓缩纯化的口蹄疫病毒抗原。利用SDS-PA
关键词：
GEM技术 口蹄疫病毒 抗原纯化
[期刊] 水产学报
[作者]
薛清刚 罗挽涛 宋庆云 王文兴 杨虹
阐述一种从对虾肝胰腺组织中纯化肝腺细小病毒的方法。将对虾肝胰腺组织样品研磨并进行适当脱脂处理后，进行一系列的浓缩和过３５％（ｗ／ｗ）蔗糖垫离心，然后通过一个不连续的酒石酸钾－甘油密度梯度离心纯化。结果证实，该方法对样品中的病毒颗粒的分离和纯化效果均较理想，可以满足有关研究工作的需要。经与ＣｓＣｌ密度梯度离心法比较，提示两者效果相似，但本方法更加经济实用
[期刊] 中国水产科学
[作者]
安贤惠 梁建国 李卫国 徐春花 吕毅 王旭 董靖 张崇星 张克云
以水产病害的病原菌为目标菌,从中国对虾(Penaeus chinesis)体液中分离筛选抗菌肽,通过Sephadex G-50、RP-HPLC等分离纯化技术,得到一种抑制水产病原菌的抗菌肽PC-V-2。经初步鉴定,该抗菌肽具有广谱抗性,不仅抗鲁克氏耶尔森氏菌(Yersinia ruckeri),而且对金黄色葡萄球菌(Staphyloccus aureus)、枯草杆菌(Bacillus subttilis)等革兰氏阳性菌,大肠杆菌(Escherichia coli)等革兰氏阴性菌和白色念珠菌(Candida albicans)等真菌也有较强的抗性。另外,该抗菌肽还有一定的抑制凝血的活性,但没有检...
[期刊] 华北农学报
[作者]
张萌 万秀清 乔婵 李若 李秀兰 孙剑萍 郭兆奎
针对烟草野火病原菌的鉴定和分离纯化，设计合成其特异ＰＣＲ鉴定引物，应用ＰＣＲ技术对分离的烟草野火病病原细菌进行了纯化分离，并通过接种鉴定方法对纯化分离的病原菌进行了致病性评价，结果表明，经ＰＣＲ鉴定的阳性和阴性细菌与接种鉴定试验结果一致。从而证实了烟草野火病菌特异ＰＣＲ鉴定引物及应用ＰＣＲ技术进行野火病病原细菌分离纯化方法的实用性和可靠性。
关键词：
PCR方法 烟草野火病 分离 纯化
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
杜蕾 李新华 陈芳芳
探索大孔树脂分离纯化黑花生衣色素的最优工艺。通过静态吸附、解吸试验选出AB-8大孔树脂,以黑花生衣色素的吸附量、洗脱率为指标,评价AB-8大孔树脂分离纯化黑花生衣色素工艺中,上样液质量浓度、吸附流速、上样液用量、洗脱剂蒸馏水用量、洗脱剂乙醇体积分数及其用量对吸附和解吸效果的影响,从而确定最优工艺。AB-8大孔树脂对黑花生衣色素有较好的分离效果,其最优工艺条件为:黑花生衣色素上样液质量浓度2.0mg.mL-1,吸附流速为1.5mL.min-1,饱和吸附量为4倍树脂体积,洗脱剂蒸馏水的用量为5倍树脂体积,体积分数70%乙醇的用量为4倍树脂体积。利用该工艺精制后黑花生衣色素色价提高32.80%。采用...
关键词：
黑花生衣色素 大孔树脂 分离纯化
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