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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹必溥 傅雪琳 蔡晓丹 何平
【目的】敲除鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０的ａｌｒ０２６７基因，并对其功能进行初步研究。【方法】克隆获得鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０中的ａｌｒ０２６７基因敲除，并对敲除体进行纯化和ＰＣｒ鉴定，然后对ａｌｒ０２６７敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量ＰＣｒ，在培养不同时间（０，３，８，２４ｈ和１０ｄ）检测野生型和ａｌｒ０２６７基因敲除体中与异形胞功能相关基因ａｌｌ０８１３、ａｌｌ２７３６、ａｌｒ２８８７的相对表达量。【结果】鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因被成功敲．．．
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
胡浪 郭青青 刘烨蓉 胡章立 王江新 雷安平
为研究缺氮胁迫对固氮蓝藻DNA甲基化的影响,本研究以固氮蓝藻鱼腥藻Anabaena sp. PCC 7120为试验材料,比较了正常藻丝、缺氮藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰。DNA甲基化修饰与细胞分化、基因组印记等多种重要生物学过程有关。在高等植物和非固氮蓝藻中,缺氮胁迫可以改变DNA甲基化修饰模式。DNA甲基化修饰也存在于固氮蓝藻细胞中。然而,固氮蓝藻可以通过固定空气中的氮来缓解缺氮压力,缺氮胁迫是否能改变固氮蓝藻的DNA甲基化修饰模式尚不清楚。全基因组重亚硫酸盐测序可以在单碱基水平分析基因组范围内所有胞嘧啶的甲基化修饰模式。利用全基因组重亚硫酸盐测序对正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的胞嘧啶甲基化进行了测序,分别获得6.25,8.38,7.11Gb的干净数据。在正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞中,甲基化胞嘧啶位点占所有胞嘧啶位点的比例分别为1.06%,1.05%和1.05%,甲基化胞嘧啶位点的平均甲基化水平分别为0.61%, 0.54%和0.54%。基于胞嘧啶甲基化修饰模式对这3个样品进行Pearson相关性分析,发现样品间的相关系数在0.976～0.983之间。这些结果说明正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰模式相似,缺氮胁迫不能引起固氮蓝藻DNA甲基化模式的改变。本结果为固氮蓝藻和非固氮蓝藻采用不同的表观修饰来应对缺氮胁迫提供了证据。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李东霞 王莉 陈雯莉
为研究Anabaena sp. PCC 7120中的细胞形态决定蛋白MreB的亚细胞定位和功能,构建了由mreB自身启动子驱动的mreB-gfp融合载体,通过接合转移的方法将其转化到野生型Anabaena sp. PCC 7120中,获得绿色荧光蛋白标记的MreB的鱼腥蓝细菌菌株,同时用MreB的抑制剂A22处理菌株。结果显示,MreB的亚细胞定位随着细胞周期的进程而发生变化,A22处理可导致MreB无法正确聚合定位。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
樊贵安 张巨源 陈雯莉 王莉
鱼腥蓝细菌ＰＣＣ ７１２０是一种光合自养型丝状蓝细菌。缺氮条件下，菌丝上５％～１０％的营养细胞分化为异形胞，发挥固氮作用。异形胞是研究生物固氮和细胞分化的理想材料。为研究异形胞生理功能及其发育过程中的基因表达变化，需要从菌丝中分离高质量的异形胞。用２ｍｇ／ｍＬ溶菌酶与０．１％ＴｒｉＴｏｎ Ｘ－１００同时处理菌丝３０ｍｉｎ，得到了完整性好、纯度高的异形胞。
关键词：
鱼腥蓝细菌PCC 7120 异形胞 分离
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李敏 徐韶足 陈雯莉 王莉
为寻找新型生物吸附剂用于重金属污染环境的修复,本研究通过设置不同时间、质量浓度以及氮源缺乏等条件,检测了鱼腥蓝细菌PCC 7120对Mn(2+)的吸附情况。结果表明:在Mn(2+)质量浓度低于10mg/L时,PCC 7120对Mn(2+)的去除率最高能达到80%,并且PCC 7120对Mn(2+)的吸附过程符合Freundlich等温吸附模型和准二级吸附动力学方程。缺氮后,PCC 7120对Mn(2+)的耐受力降低且吸附能力大大减弱。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王静 张巨源 王莉 陈雯莉
鱼腥蓝细菌PCC 7120中已有较为成熟的诱导表达系统,但缺乏可控的蛋白降解系统。本研究基于Mesoplasma florum中的Lon蛋白酶(mf-Lon),在蓝细菌中建立可诱导的蛋白降解系统,并通过该系统对关键基因编码产物进行可控降解以研究其生理功能。结果发现降解系统并无预期作用,需进一步改进。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李之萌 王莉 陈雯莉
在鱼腥蓝细菌PCC 7120中,all3555是一个乙酰羟酸合成酶的编码基因,为研究该基因在鱼腥蓝细菌PCC 7120的生长和环境适应过程中的作用,构建了该基因的超表达和缺失突变菌株,结果显示该基因缺失后鱼腥蓝细菌PCC 7120仍可继续生长,但对NaCl胁迫的敏感性有一定程度提高,而超表达该基因则会提高鱼腥蓝细菌PCC 7120对氧化胁迫和NaCl胁迫的抗性,表明all3555对鱼腥蓝细菌PCC 7120的正常生长影响较小,但对菌株的抗氧化胁迫和抗NaCl胁迫等有重要作用。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
汤倩 张淑静 郭蔷薇 王永宏 张兴
【目的】通过同源重组技术敲除嗜线虫致病杆菌（Ｘｅｎｏｒｈａｂｄｕｓ ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ）Ｙｌ００１中ｃｐＸｒ基因，为进一步研究ｃｐＸｒ调节子调控抗菌物质产生的机理奠定基础。【方法】通过融合ｐｃｒ技术，将ｃｐＸｒ基因的上、下游同源片段及质粒ｐＪｃＶ５３上的卡那抗性基因Ｋｍｒ ３个片段连接，克隆到自杀载体ｐｄｍ４中，将重组质粒转化到大肠杆菌ｓ１７－１λｐｉｒ中，经接合转移导入嗜线虫致病杆菌内，通过同源重组敲除ｃｐＸｒ基因；采用琼脂扩散法和抑制菌丝生长速率法分别测定突变菌株对枯草芽孢杆菌和番茄灰霉病菌的抑制作用。【结果】从Ｘ．ｎｅｍａｔｏｐｈｉｌａ Ｙｌ００１基因组中成功敲除ｃｐＸｒ基因，得到了．．．
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏 波 陈雯莉 王 莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC（all1692）基因与异形胞分化的关系，通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株，对其进行表型分析。结果表明，在缺乏化合态氮源时，MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中，异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏波 陈雯莉 王莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC(all1692)基因与异形胞分化的关系,通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株,对其进行表型分析。结果表明,在缺乏化合态氮源时,MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中,异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
原海亮 管仁艳 何璟
为了阐明ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅＳ Ｓａｈａｃｈｉｒｏｉ ａｔｃｃ ３３１５８中Ⅲ型聚酮合酶基因ｏｒｆ１８的功能，利用同源双交换的方法对该基因进行同框敲除，采用异位表达的方法进行了相应的回补实验。通过高效液相色谱及液相色谱－质谱联用分析发现基因ｏｒｆ１８的敲除会明显降低发酵产物中苯甲酸盐的含量，回补该基因能够在一定程度上恢复苯甲酸盐的产量，表明ｏｒｆ１８在原宿主中极有可能参与苯甲酸盐的生物合成。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
杨万风 刘红霞 娄旸 胡白石 许志刚 刘凤权
根据黄单胞菌gacA基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从水稻白叶枯病菌(Xanthom onas oryzaepv.oryzae,Xoo)中克隆了gacA同源基因,命名为gacAXoo。序列比较显示,该基因在黄单胞菌中是相对保守的。蛋白质保守结构域搜索表明,GacAXoo属于LuxR家庭的一员,具有与其他GacA蛋白相似的结构。通过同源重组的方法,构建了gacAXoo的插入突变体,为下一步研究gacAXoo的功能奠定了良好的基础。
关键词：
水稻白叶枯病菌 gacA基因 基因敲除
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王丹丹 唐雨婷 马月辉 王立刚 潘登科 蒋琳
【目的】ZBED6基因是一个调控肌肉生长发育的转录因子,为了探讨ZBED6在心肌生长发育中的调控机制,利用RNA Sequencing(RNA-Seq)技术比较ZBED6基因敲除巴马小型猪(ZBED6-KO)和同日龄正常巴马小型猪(ZBED6-WT)的心脏组织转录组,挖掘ZBED6基因的敲除对家猪心脏组织发育及基因表达的影响。【方法】利用t-test对ZBED6-KO猪和ZBED6-WT猪心脏组织大小的表型特征进行显著性分析,利用实时荧光定量PCR对ZBED6基因的靶基因IGF2的表达量进行定量。通过制作
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
李东昊 姜玲 刘春林 阮颖
以甘蓝型油菜‘湘油15号’为试材,通过生物信息学分析,运用CRISPR/Cas9系统对Bna SDG8第1个外显子上的Bna SDG8–A和Bna SDG8–C保守序列区域进行CRISPR/Cas9敲除位点设计,构建了CRISPR/Cas9敲除载体p CAMBIA1300–sg RNA/Cas9–Bna SDG8;通过遗传转化,获得转化植株19株;经测序比对,4株植株的Bna SDG8被成功编辑;通过对定向敲除植株开花时间的统计分析,初步确定Bna SDG8参与甘蓝型油菜开花时间的调控。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
朱嘉诚 贺婵娟 贾晓会 顾娟 施定基 庄旻敏 冯思豫 贾睿 栾必荣 何培民
转基因蓝藻纯化是研究其生理、生化、分子生物学、营养学、药理学、毒理学等必不可少的环节,更是其作为生产原料的基础。传统纯化方法仅对不同物种间的分离进行了讨论,尚未涉及野生藻种和转基因突变株在实验和生产中相互污染情况下的鉴别和分离。本文的转基因藻纯化方法先后从种群、细胞、分子3个层面纯化分离了藻种。该方法使用平板划线的方法将杂藻杂菌与鱼腥藻分离,再使用核酸电泳、RT-qPCR、Western Blot将鱼腥藻野生种、转空载体突变株以及转目的基因突变株3个亚品系逐步分离。纯化分离后的藻株生长速率得到了提高,目的基因的表达效率增长,生产目的蛋白的产率自然增长。本研究对转基因藻在实验和生产中出现的一些问题提出了相应的解决方案,对转基因微藻的应用具有积极的作用。
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