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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
樊贵安 张巨源 陈雯莉 王莉
鱼腥蓝细菌ＰＣＣ ７１２０是一种光合自养型丝状蓝细菌。缺氮条件下，菌丝上５％～１０％的营养细胞分化为异形胞，发挥固氮作用。异形胞是研究生物固氮和细胞分化的理想材料。为研究异形胞生理功能及其发育过程中的基因表达变化，需要从菌丝中分离高质量的异形胞。用２ｍｇ／ｍＬ溶菌酶与０．１％ＴｒｉＴｏｎ Ｘ－１００同时处理菌丝３０ｍｉｎ，得到了完整性好、纯度高的异形胞。
关键词：
鱼腥蓝细菌PCC 7120 异形胞 分离
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李敏 徐韶足 陈雯莉 王莉
为寻找新型生物吸附剂用于重金属污染环境的修复,本研究通过设置不同时间、质量浓度以及氮源缺乏等条件,检测了鱼腥蓝细菌PCC 7120对Mn(2+)的吸附情况。结果表明:在Mn(2+)质量浓度低于10mg/L时,PCC 7120对Mn(2+)的去除率最高能达到80%,并且PCC 7120对Mn(2+)的吸附过程符合Freundlich等温吸附模型和准二级吸附动力学方程。缺氮后,PCC 7120对Mn(2+)的耐受力降低且吸附能力大大减弱。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王静 张巨源 王莉 陈雯莉
鱼腥蓝细菌PCC 7120中已有较为成熟的诱导表达系统,但缺乏可控的蛋白降解系统。本研究基于Mesoplasma florum中的Lon蛋白酶(mf-Lon),在蓝细菌中建立可诱导的蛋白降解系统,并通过该系统对关键基因编码产物进行可控降解以研究其生理功能。结果发现降解系统并无预期作用,需进一步改进。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李东霞 王莉 陈雯莉
为研究Anabaena sp. PCC 7120中的细胞形态决定蛋白MreB的亚细胞定位和功能,构建了由mreB自身启动子驱动的mreB-gfp融合载体,通过接合转移的方法将其转化到野生型Anabaena sp. PCC 7120中,获得绿色荧光蛋白标记的MreB的鱼腥蓝细菌菌株,同时用MreB的抑制剂A22处理菌株。结果显示,MreB的亚细胞定位随着细胞周期的进程而发生变化,A22处理可导致MreB无法正确聚合定位。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李之萌 王莉 陈雯莉
在鱼腥蓝细菌PCC 7120中,all3555是一个乙酰羟酸合成酶的编码基因,为研究该基因在鱼腥蓝细菌PCC 7120的生长和环境适应过程中的作用,构建了该基因的超表达和缺失突变菌株,结果显示该基因缺失后鱼腥蓝细菌PCC 7120仍可继续生长,但对NaCl胁迫的敏感性有一定程度提高,而超表达该基因则会提高鱼腥蓝细菌PCC 7120对氧化胁迫和NaCl胁迫的抗性,表明all3555对鱼腥蓝细菌PCC 7120的正常生长影响较小,但对菌株的抗氧化胁迫和抗NaCl胁迫等有重要作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏 波 陈雯莉 王 莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC（all1692）基因与异形胞分化的关系，通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株，对其进行表型分析。结果表明，在缺乏化合态氮源时，MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中，异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏波 陈雯莉 王莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC(all1692)基因与异形胞分化的关系,通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株,对其进行表型分析。结果表明,在缺乏化合态氮源时,MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中,异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李松柏 支瑶 李盼 汪方奎 陈雯莉
羧酶体是由致密的外壳蛋白包裹着核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶和碳酸苷酶形成的细胞内蛋白质小体,是蓝细菌二氧化碳固定的场所。为解析羧酶体在不同培养条件下的功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有组氨酸标签的CcmK2重组蛋白,制备了其多克隆抗体,探讨了不同质量浓度氯霉素对细胞内羧酶体数目和羧酶体相关蛋白丰度的影响。首先,确定了不同质量浓度的氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803生长的影响,发现5.0μg/mL氯霉素能够完全抑制菌株的生长,但是可以
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李盼 支瑶 汪方奎 陈雯莉
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
胡浪 郭青青 刘烨蓉 胡章立 王江新 雷安平
为研究缺氮胁迫对固氮蓝藻DNA甲基化的影响,本研究以固氮蓝藻鱼腥藻Anabaena sp. PCC 7120为试验材料,比较了正常藻丝、缺氮藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰。DNA甲基化修饰与细胞分化、基因组印记等多种重要生物学过程有关。在高等植物和非固氮蓝藻中,缺氮胁迫可以改变DNA甲基化修饰模式。DNA甲基化修饰也存在于固氮蓝藻细胞中。然而,固氮蓝藻可以通过固定空气中的氮来缓解缺氮压力,缺氮胁迫是否能改变固氮蓝藻的DNA甲基化修饰模式尚不清楚。全基因组重亚硫酸盐测序可以在单碱基水平分析基因组范围内所有胞嘧啶的甲基化修饰模式。利用全基因组重亚硫酸盐测序对正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的胞嘧啶甲基化进行了测序,分别获得6.25,8.38,7.11Gb的干净数据。在正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞中,甲基化胞嘧啶位点占所有胞嘧啶位点的比例分别为1.06%,1.05%和1.05%,甲基化胞嘧啶位点的平均甲基化水平分别为0.61%, 0.54%和0.54%。基于胞嘧啶甲基化修饰模式对这3个样品进行Pearson相关性分析,发现样品间的相关系数在0.976～0.983之间。这些结果说明正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰模式相似,缺氮胁迫不能引起固氮蓝藻DNA甲基化模式的改变。本结果为固氮蓝藻和非固氮蓝藻采用不同的表观修饰来应对缺氮胁迫提供了证据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹必溥 傅雪琳 蔡晓丹 何平
【目的】敲除鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０的ａｌｒ０２６７基因，并对其功能进行初步研究。【方法】克隆获得鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０中的ａｌｒ０２６７基因敲除，并对敲除体进行纯化和ＰＣｒ鉴定，然后对ａｌｒ０２６７敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量ＰＣｒ，在培养不同时间（０，３，８，２４ｈ和１０ｄ）检测野生型和ａｌｒ０２６７基因敲除体中与异形胞功能相关基因ａｌｌ０８１３、ａｌｌ２７３６、ａｌｒ２８８７的相对表达量。【结果】鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因被成功敲．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
贾方芳 方玉鹏 孟娜 石文立 王妍 李勤凡
【目的】探索鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb.)中是否存在产槲皮素的内生真菌。【方法】采用组织块法对鱼腥草内生真菌进行分离培养,分离纯化后收集菌丝利用薄层色谱(TLC)和高效液相色谱(HPLC)检测其代谢产物中的槲皮素,并分析其产量。采用形态学和内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列分析鉴定产槲皮素的内生真菌。【结果】从鱼腥草不同部位共分离得到9株内生真菌,其中由根中分离得到的菌株YXC-G1具有产生槲皮素的能力,为笋顶孢属(Acrostalagmus sp.)真菌,菌丝中槲皮素的含量为8.296 mg/g。【结论】从鱼腥草根部分离到1株产槲皮素的内生真菌YXC-G1,其可作为生产槲皮素的备选菌株。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
靳松 尹利方 夏体渊 李冰 徐胜光 任禛 张永福 牛燕芬 刘一鸣
对污染蓝莓组培苗的细菌进行分离和鉴定，为防治蓝莓组织培养过程中细菌污染提供科学依据。采用ＮＡ培养基分离纯化细菌，通过形态特征、生理生化指标结合１６Ｓ ｒ ＤＮＡ序列同源性分析，对引起蓝莓组培苗污染的细菌进行鉴定。引起蓝莓组培苗污染的细菌为菌株ＬＭ５３和ＬＭ８５，１６Ｓ ｒ ＤＮＡ序列分析结果表明，ＬＭ５３和Ｂ．ＡＭｙＬｏＬｉｑｕｅｆＡｃｉｅＮＳ（Ｈｑ７２７９７１）、Ｂ．ｖＡＬＬｉＳＭｏｒｔｉＳ（ｆＪ３８６５４１）、Ｂ．ＬｉｃＨｅＮｉｆｏｒＭｉＳ（ｅｆ６４４４１４）、Ｂ．ＳｕＢｔｉＬｉＳ（Ａｙ５８３２１６）聚在同一系统发育分支，同源性为９９．９％～１００％；ＬＭ８５与苏云金芽孢杆菌Ｂ．ｔＨｕｒｉ．．．
关键词：
蓝莓 组织培养 污染 细菌 分离 鉴定
[期刊] 西南农业学报
[作者]
项燕华 覃美玲 李宜海 何秀苗
【目的】对广西北部湾近海海域内部分鱼类、虾类和蟹类的体内和体表产胞外多糖（EPS）细菌进行分离及生物学活性分析，为该海域近海海洋动物共附生微生物资源的开发利用提供参考。【方法】以广西北部湾近海海域内采集到的部分鱼类、虾类和蟹类体内和体表共附生海洋细菌为研究对象，用黏液比色法进行初筛后，再用醇沉法和Sevage法提取、纯化细菌所产EPS，用苯酚硫酸法测定多糖含量，筛选出产EPS的海洋共附生细菌，通过16S rDNA序列对细菌种属进行鉴定和多样性分析，并通过1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基的清除率及对鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）的抗病毒能力初步评估代表菌株EPS的生物学活性。【结果】共分离到37株产EPS的共附生海洋细菌，基于代表菌株的16S rDNA序列分析，菌株分别属于3纲4目6科6属10种，其中优势菌是芽孢杆菌属，占代表菌株42.86%，其次是普罗威登斯菌属（25.00%）和弧菌属（21.43%）；EPS含量测定结果显示不同菌株之间产糖量具有明显差异；DPPH清除率测定结果显示，代表菌株所产的EPS均具有一定抗氧化活性，且不同属菌株之间、同属不同种菌株之间DPPH清除率差异明显；优势芽孢杆菌的代表菌株所产EPS具有抑制IBDV在鸡胚上复制的能力。【结论】广西北部湾近海海域内的海洋动物共附生微生物中产EPS细菌存在种属多样性，所产EPS具有抗氧化活性和抗病毒活性。研究结果能为广西北部湾近海海洋动物共附生细菌资源利用提供科学依据。
[期刊] 林业科学
[作者]
赵博光 梁波 徐梅 赵林果
用荧光染色显微生测法检测液体培养基的无细胞滤液毒性,研究从松材线虫虫体上分离鉴定的荧光假单胞GcM5-1A菌株在寄主体外培养的产毒现象。结果表明:GcM5-1A液体培养的无细胞滤液对黑松细胞的毒性随培养天数增加而增强,培养到第4天时,无细胞滤液的毒性开始进入相对稳定期。因此,在进行该菌株毒素的分离鉴定工作中,可将4d作为其培养时间。使用DM-36透析膜对培养4d的GcM5-1A无细胞滤液透析后的毒性测定结果显示:其膜内和膜外组分生测毒性分别与对照培养基的无细胞滤液毒性之间的t检验差异显著,证明其透析膜内、膜外组分均有毒性。该结果表明:GcM5-1A菌株的毒素不是单一化合物,而是由比较多的物质组...
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