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[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
王静 张巨源 王莉 陈雯莉
鱼腥蓝细菌PCC 7120中已有较为成熟的诱导表达系统,但缺乏可控的蛋白降解系统。本研究基于Mesoplasma florum中的Lon蛋白酶(mf-Lon),在蓝细菌中建立可诱导的蛋白降解系统,并通过该系统对关键基因编码产物进行可控降解以研究其生理功能。结果发现降解系统并无预期作用,需进一步改进。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
樊贵安 张巨源 陈雯莉 王莉
鱼腥蓝细菌ＰＣＣ ７１２０是一种光合自养型丝状蓝细菌。缺氮条件下，菌丝上５％～１０％的营养细胞分化为异形胞，发挥固氮作用。异形胞是研究生物固氮和细胞分化的理想材料。为研究异形胞生理功能及其发育过程中的基因表达变化，需要从菌丝中分离高质量的异形胞。用２ｍｇ／ｍＬ溶菌酶与０．１％ＴｒｉＴｏｎ Ｘ－１００同时处理菌丝３０ｍｉｎ，得到了完整性好、纯度高的异形胞。
关键词：
鱼腥蓝细菌PCC 7120 异形胞 分离
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李敏 徐韶足 陈雯莉 王莉
为寻找新型生物吸附剂用于重金属污染环境的修复,本研究通过设置不同时间、质量浓度以及氮源缺乏等条件,检测了鱼腥蓝细菌PCC 7120对Mn(2+)的吸附情况。结果表明:在Mn(2+)质量浓度低于10mg/L时,PCC 7120对Mn(2+)的去除率最高能达到80%,并且PCC 7120对Mn(2+)的吸附过程符合Freundlich等温吸附模型和准二级吸附动力学方程。缺氮后,PCC 7120对Mn(2+)的耐受力降低且吸附能力大大减弱。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李东霞 王莉 陈雯莉
为研究Anabaena sp. PCC 7120中的细胞形态决定蛋白MreB的亚细胞定位和功能,构建了由mreB自身启动子驱动的mreB-gfp融合载体,通过接合转移的方法将其转化到野生型Anabaena sp. PCC 7120中,获得绿色荧光蛋白标记的MreB的鱼腥蓝细菌菌株,同时用MreB的抑制剂A22处理菌株。结果显示,MreB的亚细胞定位随着细胞周期的进程而发生变化,A22处理可导致MreB无法正确聚合定位。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏 波 陈雯莉 王 莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC（all1692）基因与异形胞分化的关系，通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株，对其进行表型分析。结果表明，在缺乏化合态氮源时，MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中，异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
苏波 陈雯莉 王莉
为明确鱼腥蓝细菌PCC 7120中sigC(all1692)基因与异形胞分化的关系,通过同源重组构建了sigC的缺失突变体MsigC和互补菌株,对其进行表型分析。结果表明,在缺乏化合态氮源时,MsigC的异形胞分化频率显著低于野生型,而在互补菌株CsigC中,异源表达的sigC可以互补突变体异形胞分化频率降低的表型。表明sigC参与异形胞分化的调控。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李之萌 王莉 陈雯莉
在鱼腥蓝细菌PCC 7120中,all3555是一个乙酰羟酸合成酶的编码基因,为研究该基因在鱼腥蓝细菌PCC 7120的生长和环境适应过程中的作用,构建了该基因的超表达和缺失突变菌株,结果显示该基因缺失后鱼腥蓝细菌PCC 7120仍可继续生长,但对NaCl胁迫的敏感性有一定程度提高,而超表达该基因则会提高鱼腥蓝细菌PCC 7120对氧化胁迫和NaCl胁迫的抗性,表明all3555对鱼腥蓝细菌PCC 7120的正常生长影响较小,但对菌株的抗氧化胁迫和抗NaCl胁迫等有重要作用。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
牛天彩 胡胜 陈雯莉 王莉
利用单交换法将ｇｆｐ整合到鱼腥蓝细菌ｐＣＣ ７１２０基因组上，构建ｆｔｓＺ－ｇｆｐ的翻译融合菌株，并观察了ｆｔｓＺ蛋白的亚细胞定位。结果表明：通过同源重组，ｇｆｐ与基因组中唯一完整的ｆｔｓＺ融合，既保证了ｆｔｓＺ基因的正常表达又能准确反映ｆｔｓＺ蛋白的亚细胞定位，并且实验周期短、操作方便，是研究蛋白质亚细胞定位的一种简单有效的方法。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
唐国芳 王婧蓝 胡胜 陈雯莉 王莉
为克服传统方法不能实现对特定菌丝或细胞的连续定点观察的难题，利用低熔点琼脂糖培养基将菌丝包埋在玻底培养皿中，制备了鱼腥蓝细菌ＰＣＣ ７１２０菌株实时观察的微型培养体系。结果表明：在该培养体系中，菌丝能进行正常的生长、分裂和分化；利用该系统可以观察细胞分裂蛋白ＦｔｓＺ和ＤＮＡ双链损伤修复蛋白ＲｅＣＮ在细胞分裂过程中的动态变化，实现对同一菌丝进行长时间的连续定点观察。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李松柏 支瑶 李盼 汪方奎 陈雯莉
羧酶体是由致密的外壳蛋白包裹着核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/氧化酶和碳酸苷酶形成的细胞内蛋白质小体,是蓝细菌二氧化碳固定的场所。为解析羧酶体在不同培养条件下的功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有组氨酸标签的CcmK2重组蛋白,制备了其多克隆抗体,探讨了不同质量浓度氯霉素对细胞内羧酶体数目和羧酶体相关蛋白丰度的影响。首先,确定了不同质量浓度的氯霉素对集胞蓝细菌PCC 6803生长的影响,发现5.0μg/mL氯霉素能够完全抑制菌株的生长,但是可以
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
李盼 支瑶 汪方奎 陈雯莉
CcmK2蛋白是集胞蓝细菌PCC 6803羧酶体外壳蛋白的主要组分,在羧酶体的组装与功能行使方面扮演重要角色。为解析其功能,本研究构建了原核表达载体pET28a-CcmK2,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达带有6个组氨酸标签的CcmK2重组蛋白。通过金属亲和层析技术,将CcmK2重组蛋白纯化后免疫家兔,制备抗CcmK2多克隆抗体。基于Dot blot分析的结果显示:该多克隆抗体能够有效检测蓝细菌CcmK2蛋白;进一步的抗体特异性分析显示,CcmK2多克隆抗体与其他羧酶体外壳蛋白存在微弱的抗原抗体反
[期刊] 沈阳农业大学学报
[作者]
胡浪 郭青青 刘烨蓉 胡章立 王江新 雷安平
为研究缺氮胁迫对固氮蓝藻DNA甲基化的影响,本研究以固氮蓝藻鱼腥藻Anabaena sp. PCC 7120为试验材料,比较了正常藻丝、缺氮藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰。DNA甲基化修饰与细胞分化、基因组印记等多种重要生物学过程有关。在高等植物和非固氮蓝藻中,缺氮胁迫可以改变DNA甲基化修饰模式。DNA甲基化修饰也存在于固氮蓝藻细胞中。然而,固氮蓝藻可以通过固定空气中的氮来缓解缺氮压力,缺氮胁迫是否能改变固氮蓝藻的DNA甲基化修饰模式尚不清楚。全基因组重亚硫酸盐测序可以在单碱基水平分析基因组范围内所有胞嘧啶的甲基化修饰模式。利用全基因组重亚硫酸盐测序对正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的胞嘧啶甲基化进行了测序,分别获得6.25,8.38,7.11Gb的干净数据。在正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞中,甲基化胞嘧啶位点占所有胞嘧啶位点的比例分别为1.06%,1.05%和1.05%,甲基化胞嘧啶位点的平均甲基化水平分别为0.61%, 0.54%和0.54%。基于胞嘧啶甲基化修饰模式对这3个样品进行Pearson相关性分析,发现样品间的相关系数在0.976～0.983之间。这些结果说明正常培养的藻丝、缺氮72h的藻丝和异形胞的DNA甲基化修饰模式相似,缺氮胁迫不能引起固氮蓝藻DNA甲基化模式的改变。本结果为固氮蓝藻和非固氮蓝藻采用不同的表观修饰来应对缺氮胁迫提供了证据。
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
曹必溥 傅雪琳 蔡晓丹 何平
【目的】敲除鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０的ａｌｒ０２６７基因，并对其功能进行初步研究。【方法】克隆获得鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因部分片段，通过构建敲除载体，使其与目的基因发生单交换同源重组，从而将鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０中的ａｌｒ０２６７基因敲除，并对敲除体进行纯化和ＰＣｒ鉴定，然后对ａｌｒ０２６７敲除体和野生型固氮异形胞进行形态观察和统计，同时采用实时荧光定量ＰＣｒ，在培养不同时间（０，３，８，２４ｈ和１０ｄ）检测野生型和ａｌｒ０２６７基因敲除体中与异形胞功能相关基因ａｌｌ０８１３、ａｌｌ２７３６、ａｌｒ２８８７的相对表达量。【结果】鱼腥藻ＰＣＣ ７１２０ ａｌｒ０２６７基因被成功敲．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
可小丽 李庆勇 黄秋标 王淼 衣萌萌 刘志刚 卢迈新
为了解罗非鱼-鱼腥草共生系统中鱼草不同配比对池塘水质及细菌群落结构的影响，实验构建了相同池塘覆盖面积不同鱼腥草种植密度(350、450、600和0 g/m~2)(M1)和相同种植密度不同池塘覆盖面积占比(5%、10%、15%和0%)(M2)的两种养殖模式。通过在以上两种模式养殖条件下，研究各组对罗非鱼养殖池塘水质以及水体和鱼体肠道微生物群落的影响，探讨了罗非鱼-鱼腥草池塘共生系统中鱼草的相对最佳搭配比例。结果显示，在M1实验模式下，不同密度组鱼腥草浮床均能显著改善养殖水体氨氮(NH_4~+-N)、亚硝氮(NO_2–-N)、硝酸氮(NO_3–-N)、总氮(TN)、总磷(TP)、正磷酸盐(PO_4~(3–)-P)等水质指标，且在3个月养殖周期内，初始种植密度为450 g/m~2的鱼腥草浮床组与350和600 g/m~2实验组相比，效果相对更加稳定。16S rRNA V4区的高通量测序分析显示，M1模式下各组鱼腥草均能显著优化鱼体肠道和水体的菌群结构，并增加菌群多样性，且养殖时间越长，优化效果越明显。相同月份中，实验组450和350 g/m~2比600 g/m~2优化效果相对更稳定。在不同月份下，环境变化对罗非鱼肠道及水体细菌多样性的影响大于鱼腥草浮床对养殖水体的影响。在M2实验模式中，各组鱼腥草浮床均能显著净化罗非鱼养殖池塘水质，其TN、TP、NH_4~+-N、NO_2~–-N、NO_3~–-N和PO_4~(3–)-P等均呈曲线变化。研究表明，在该养殖周期内，鱼腥草覆盖面积为10%的实验组对养殖水体NH_4~+-N、NO_3~–-N、TN、TP以及PO_4~(3–)-P等指标的净化效率较实验组5%和15%稳定。高通量测序分析结果表明，不同覆盖面积鱼腥草浮床均能增加养殖水体和鱼体肠道的微生物多样性，相对而言，10%覆盖面积组的效果更稳定。此结果为完善罗非鱼-鱼腥草共生养殖模式的鱼草配比提供了数据支撑。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
胡璠 王莉 陈雯莉
为研究在不分化异形胞的钙化裂须蓝细菌Schizothrixcalcicola中schetR基因的功能,本研究构建由强启动子petE驱动的schetR基因的表达质粒,通过三亲本接合转移的方法将此表达质粒转入模式生物鱼腥蓝细菌AnabaenaPCC 7120的hetR突变体中进行功能验证。结果显示:超表达schetR能够互补鱼腥蓝细菌hetR突变体的表型,这说明schetR能够促进异形胞的发育。
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