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[期刊] 水产学报
[作者]
刘佳琪 高帅 段可馨 郭梦婷 杜航 康海燕 张英 唐立杰 李一经 刘敏
为比较鱼源乳酸菌表达系统口服疫苗在不同免疫程序下诱导鱼免疫应答水平的差异,确定鱼源乳酸菌表达系统口服免疫虹鳟幼鱼的免疫程序。本研究构建了重组表达IPNV VP2-VP3蛋白的鱼源植物乳杆菌L1212,将重组菌pPG612-VP2-VP3/L1212包裹颗粒饲料,口服免疫虹鳟幼鱼。免疫程序分为连续免疫组、免疫1 d后间隔1 d再免疫1 d组、连续免疫4 d后32 d加强免疫1次组和间隔免疫后32 d加强免疫1次组。免疫后进行尾动脉采血,间接ELISA方法检测各组血清抗体效价,免疫接种66 d后,腹腔注射IP
[期刊] 中国水产科学
[作者]
周勇 曾令兵 范玉顶 罗晓松 徐进 肖艺
根据GenBank中草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)VP6蛋白的全基因序列(AF403394)和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)的基因序列(M17874),设计并合成特异性引物,从感染草鱼呼肠孤病毒(GCRV)的草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肾细胞(CIK)中提取病毒核酸作为模板,进行RT-PCR扩增,得到约1.3 kb的GCRV VP6基因读码框片段,同时提取大肠杆菌(Escherichia coli)H44815全基因组作为模板,进行PCR扩增得到约370 bp的LTB基因读码框片段。将获得的2个目的片段分别克隆到pCR2....
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
刘朋 徐宏军 王麒文 王永恒 董婷婷 杨倩
[目的]通过给母猪口服表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)S蛋白的重组枯草芽胞杆菌以评估其产生的乳源性免疫力,从而为仔猪提供相应的保护。[方法]分别给母猪口服2 mL重组枯草芽胞杆菌(1×10~9 CFU·mL~(-1))和肌肉注射2 mL灭活PEDV疫苗(1×10~7 TCID_(50)·mL~(-1)),产后1 d收集相应的样品。首先检测了乳汁中特异性SIgA及乳汁细胞中特异性IgA,然后对口腔和鼻腔分泌物中特异性SIgA和细胞因子(INF-γ和TGF-α)的水平进行了检测;最后评估乳汁中的中和抗体滴度。[结果]口服重组枯草芽胞杆菌后乳汁中SIgA及其乳汁细胞中IgA特异性抗体水平显著提高(P<0.05,P<0.01),同时乳汁及其乳汁细胞中INF-γ和TGF-α的水平也显著提高(P<0.05,P<0.01);鼻腔和口腔分泌物中特异性SIgA显著增加(P<0.05,P
[期刊] 中国农业科学
[作者]
徐义刚 崔丽春 葛俊伟 唐丽杰 赵丽丽 李一经
【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)VP2基因的细胞表面表达型载体pPG-VP2电转化干酪乳杆菌L.casei393,获得阳性重组菌pPG-VP2/L.casei393。重组菌以2%乳糖为诱导物,在MRS培养基中进行诱导,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,目的蛋白获得表达。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种Balb/c小鼠,收集粪便及肠黏液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性sIgA,采集血液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性IgG,并对获得的抗体进行PPV中和活性的测定。【...
[期刊] 湖南农业大学学报(自然科学版)
[作者]
徐诗英 李婧慧 邹勇 刘林 贡成良 曹广力 薛仁宇 陈辉
为探明呼肠孤病毒(GCRV)外衣壳蛋白VP7基因工程亚单位疫苗产生的抗体效价水平和免疫保护力,用RT-PCR方法,从GCRV中扩增到VP7基因片段,并克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,得到重组质粒pET-VP7,酶切鉴定后,将pET-VP7转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,产生的重组蛋白经变性和复性后,按0.5、1.0、2.0 mg/尾的注射剂量分为3个免疫组,以等体积的氢氧化铝为佐剂进行注射。经SDS-PAGE电泳分析,发现了相对分子质量为34 000的蛋白表达带;Western Blot检测结果显示表达的蛋白具有很好的抗原性;间接凝集试验结果表明,3个免疫组均有抗体产...
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
郝凤奇 李景梅 杨洲红
【目的】制备抗肠致病性大肠杆菌(EPEC)的重组嗜酸乳酸杆菌,并初步探索其免疫效果。【方法】采用DNAStar软件选取EPEC E2348/69的eae全基因中抗原性较高的984bp片段(编码328个氨基酸残基,命名为eae Int328)为目标序列,以EPEC E2348/69基因组为模板,PCR扩增eae Int328基因,构建重组表达载体pSIP409-eae Int328,电转化法获得相应的重组嗜酸乳酸杆菌,采用SppIP诱导重组菌表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白。以BALB/c雌性小鼠为受试动物,灌胃重组嗜酸乳酸杆菌15d后,再灌胃EPEC,第21天...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
刘敏 赵丽丽 葛俊伟 欧笛 王相清 刘弈 张伟 李一经
根据传染性胰腺坏死病毒(IPNV)VP3蛋白的全基因序列,设计并合成引物,以IPNV(ATCC VR-1318)细胞培养毒提取的核酸为模板,对传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统进行了构建研究。结果显示:进行RT-PCR扩增得到截短的VP3基因约615 bp目的片段,将其克隆到pMD18-T Simple载体,经酶切、PCR扩增和序列测定后显示目的片段正确;将目的片段分别亚克隆到乳酸菌细胞表面表达型载体和分泌表达型载体,电转化于干酪乳杆菌,获得了阳性重组菌株。结果表明,通过本实验方法可构建表达传染性胰腺坏死病毒VP3蛋白的干酪乳杆菌表达系统,为实现IPNV VP3蛋白在乳酸菌中的表...
[期刊] 水产学报
[作者]
杨新月 王春元 于永翔 王印庚 李京泽 刘定远 张正
为研究百里香精油、牛至精油和肉桂精油对海水养殖经济鱼类主要致病菌美人鱼发光杆菌美人鱼亚种(PDD)的抑菌作用，实验采用二倍稀释法分别测定3种植物精油对6株不同致病力PDD菌株的最小抑菌质量浓度(MIC)和最小杀菌质量浓度(MBC)。采用分光光度计法检测添加精油后6株PDD生长曲线的变化；以2株高致病性PDD菌株为研究对象，分析不同浓度精油对PDD毒力基因表达量及胞外产物(ECP)活性的影响；分析了3种精油存储不同时间后以及在金属离子影响下的药效稳定性。结果显示，3种精油对6株PDD菌株均具有较好的抑菌和杀菌作用，MIC为32～128μg/mL,MBC为64～192μg/mL;3种精油对2株高致病性PDD菌株的毒力基因表达及ECP的磷脂酶活性和溶血活性均有抑制作用，其中低浓度精油对PDD主要毒力基因的抑制作用最明显。3种精油于室温下避光存储35 d，对实验菌株的杀菌率均大于99%，显示其良好的药物稳定性；水环境中不同浓度Na~+、Mg~(2+)、Ca~(2+)、K~+等对3种精油的杀菌效果无显著影响。研究表明，3种精油均适宜开发为防治水产动物细菌性疾病的新型渔药或饲料添加剂。本研究可为拓展芳香类植物精油在水产疾病防控上的应用提供借鉴与参考。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
应碧 昌晓宇 刘志文 周通 陈瑶 钟平安 徐波
【目的】研究亚硝酸盐胁迫下植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WU14亚硝酸盐还原酶(nitrite reductase,Nir S)的作用机制,为发酵食品中应用乳酸菌纯种培养技术降解亚硝酸盐奠定基础。【方法】在37℃培养条件下,测定含0.02%—0.16%Na NO2的MRS培养液中L.plantarum WU14 24 h的生长密度、p H及Na NO2降解量。通过PCR扩增和TA克隆得到Nir S,并克隆到乳酸乳球菌食品级细胞内高效诱导表达载体p RNA48中,获得重组菌L.lactis NZ9000/p RNA48-Nir S。重组菌经30 ng·m L-1 n...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
周勇 范玉顶 徐进 李艳秋 肖艺 曾令兵
以据草鱼呼肠孤病毒(GCRV)VP6蛋白的全基因序列(GeneBank AF403394)为模板,采用RT-PCR构建了草鱼呼肠孤病毒VP6蛋白基因植物表达载体的构建。结果显示:实验构建的pCR 2.1-VP6重组质粒含有NcoⅠ和BglⅡ酶切位点;pCR 2.1-VP6重组质粒经PCR扩增和测序显示含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因读码框片段。将目的片段VP6酶切、克隆到携带有绿色荧光蛋白(GFP)基因的植物表达载体pCAMBIA1302中,再经酶切、PCR扩增和序列测定显示,pCAMBIA1302-VP6含有1.3 Kbp的草鱼呼肠孤病毒VP6基因片段,说明已插入植物表达载体pC...
[期刊] 北京林业大学学报
[作者]
陆海 吴薇 曾庆银 李义 蒋湘宁 王沙生
为了研究在大肠杆菌BL2 1(DE3)中重组蛋白的表达特点 ,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点 ,从表达载体中表达了植物ACC合成酶 .经SDS PAGE电泳与双波长扫描分析 ,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加 .但是其最佳表达时间为 2 5h ,菌液密度OD6 0 0 为 0 6 ,IPTG的最佳浓度为 0 6mmol L ,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高 .植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在 ,未能检测到可溶性蛋白的表达
关键词：
ACC合成酶 SDSPAGE 包涵体
[期刊] 水产学报
[作者]
王梦美 吕成杰 杨顶珑 赵建民
为探究植物乳杆菌LP HMX-3对仿刺参生长性能、消化酶活性、免疫能力和肠道菌群的影响，选择初始体质量为（4.22 ± 0.05）g的仿刺参，随机分为对照组（C组）和LP HMX-3添加组即10~(5 )CFU/g的LL组和10~(7 )CFU/g的LM组，进行为期8周的养殖实验。结果显示，①LP HMX-3显著提高了仿刺参的终体质量、增重率以及特定生长率，且LL组的生长指标更优；②LL组的肠道淀粉酶和LM组的肠道脂肪酶活性显著高于C组，说明LP HMX-3可能提高仿刺参的消化利用率；③LL组和LM组体腔液的碱性磷酸酶和过氧化氢酶活性以及LM组的酸性磷酸酶活性均显著高于C组，此外，LL组和LM组体腔细胞Aj-p105和Aj-catalase表达量以及LM组的Aj-C3表达量显著高于C组，说明LP HMX-3可增强仿刺参的免疫力；④由16S rDNA V4区测序可知，α多样性指数显示LP HMX-3显著提高了仿刺参肠道微生物丰富度和均匀度，但LL组和LM组差异不大；β多样性分析显示，LL组和LM组的物种组成结构相似，但明显不同于C组；⑤在门水平上，LL组和LM组变形菌门丰度显著低于C组，LL组厚壁菌门丰度以及LL组和LM组拟杆菌门、蓝藻门和Campilobacterota丰度显著高于C组，属水平上，LL组和LM组乳杆菌属、双歧杆菌属、链球菌属和梭菌属的丰度高于C组，说明LP HMX-3显著提高了仿刺参潜在益生菌的丰度。上述结果表明，饲粮中添加植物乳杆菌LP HMX-3可以促进仿刺参的生长，在一定程度上提高仿刺参的消化能力、增强免疫力，并能积极调节肠道微生物菌群。综上，本研究可为益生菌在水产养殖中的应用提供技术支持和科学依据，并为水产养殖病害防治提供新的思路。
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
陆兆新 孟凡强
植物乳杆菌素(plantaricin)是由多个氨基酸组成的多肽类抗菌素。它是一类重要细菌素,具有种类多、抑菌谱广、不易产生耐药性、安全性高等优点,因此在食品、饲料和医药等领域有潜在应用价值。然而,因植物乳杆菌素产量低而影响了其在食品和医药中的应用。本文从植物乳杆菌素种类、群体感应系统及植物乳杆菌素基因簇等方面介绍植物乳杆菌素诱导及调控的最新研究进展。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
李明 何孔旺 陆承平
根据猪链球菌2型(Streptococcussuistype2,SS2)溶菌酶释放蛋白(muramidase-releasedprotein,MRP)和胞外蛋白因子(extracellularproteinfactor,EPF)的基因序列,各设计合成一对引物,以猪链球菌2型江苏分离株SS2-1的基因组为模板,扩增mrp基因1801~2513位序列和epf基因1783~2563位序列,分别构建原核表达载体pET32a-mrp、pET32a-epf,确定诱导表达的两种蛋白都具有免疫原性后,提取阳性克隆质粒各自进行双酶切并纯化,通过PCR串联两片段,将目的片段定向克隆到表达载体pET-32a中,重组...
[期刊] 中国农业科学
[作者]
陈柳 余斌 倪征 华炯钢 叶伟成 云涛 张存
【目的】鸭瘟和小鹅瘟是番鸭和鹅的两种重要传染病，鸭瘟最主要的防治措施是定期接种鸭瘟病毒减毒活疫苗。根据２０１２年国际病毒分类委员会（ＩＣＴＶ）的报告，ＤＥＶ被归为疱疹病毒科的α疱疹病毒亚科马立克氏病毒属。疱疹病毒如伪狂犬病毒、马立克氏病毒、火鸡疱疹病毒等已广泛用于病毒活载体的研究，而近几年也有关于鸭瘟病毒（ＤＥＶ）作为疫苗活载体的报道。为了为免疫防控鸭瘟和小鹅瘟提供新手段，本研究拟在鸭瘟病毒疫苗株感染性克隆的基础上，构建表达小鹅瘟病毒（ＧＰＶ）主要免疫原蛋白ＶＰ２的重组病毒ｒＤＥＶ－ＶＰ２，并研究其生物学特性，进而探讨重组病毒ｒＤＥＶ－ＶＰ２作为防治ＤＥＶ和ＧＰＶ的二联重组活载体疫苗的可能性。．．．
关键词：
鸭瘟病毒 鹅细小病毒 VP2 重组病毒
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