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[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
刘晓敏 柴同杰 邹明强 黄蓉 张明亮
【目的】研制魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,为魏氏梭菌病的快速诊断提供新方法。【方法】采用分子生物学方法制备魏氏梭菌α毒素,将其免疫家兔制备多克隆抗体。用制备的抗魏氏梭菌α毒素多克隆抗体作为胶体金标记抗体和检测线上的捕获抗体,制备魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条,对其特异性、敏感性、稳定性和重复性进行检测。用制备的魏氏梭菌α毒素快速诊断金标试纸条对临床样品进行检测,比较其检测结果与PCR检测结果的符合率。【结果】成功制备了魏氏梭菌α毒素多克隆抗体。成功研制了α毒素快速诊断金标试纸条,其检测线上抗体的最适包被质量浓度为0.06μg/mL。研制的试纸条仅与魏氏梭菌α毒素发生反应,且不同批次的试纸...
关键词：
魏氏梭菌 胶体金 免疫层析 α毒素
[期刊] 中国农业科学
[作者]
胡思顺 郑兴华 蔡开妹 彭伏虎 张文泽 李自力 肖运才 刘梅 毕丁仁
【目的】结合胶体金免疫层析技术建立一种适合养鸡业基层生产人员使用的便捷的快速诊断禽流感病毒感染鸡群的方法。【方法】将含禽流感病毒非结构基因ns1的表达载体KG-NS1转化入BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性克隆进行诱导表达,表达产物用GST亲和层析柱进行纯化和Western-blot分析;以NS1重组蛋白为诊断抗原,抗鸡IgFc的单抗标记的胶体金为示踪物,结合免疫层析技术,组装禽流感病毒NS1抗体的免疫胶体金鉴别诊断试纸条,评价其灵敏度和特异性,并对试验感染和临床采集的血样进行检测。【结果】NS1重组蛋白分子量约为52kD,具有免疫学活性。在25min内用肉眼观察到禽流感病毒感染鸡血清和N...
关键词：
禽流感 NS1蛋白 胶体金试纸条
[期刊] 浙江农林大学学报
[作者]
黄巧莲 金庆日 章先 周一媚 陈彦永 徐露凝 杨永春 程昌勇 田广燕 桂海娈 方维焕 宋厚辉
针对霉菌毒素精准检测技术的开发对于保障食品安全至关重要。利用胶体金与赭曲霉毒素Ａ单抗偶联物和赭曲霉毒素Ａ－ＢＳＡ偶联物（ＯＴＡ－ＢＳＡ），开发了一种快速检测赭曲霉毒素Ａ的方法。研究结果表明：１当ＯＴＡ－ＢＳＡ配制终质量浓度为４．８ ｇ·Ｌ～（－１），质控线用羊抗鼠Ｉｇｇ配制终质量浓度为１．５ ｇ·Ｌ～（－１），硝酸纤维素（ＮＣ）膜的包被量为１．０μＬ·Ｃｍ～（－１）时呈现最清晰、最均匀的条带。２赭曲霉毒素Ａ胶体金快速检测试纸条的灵敏度达到１．０μｇ·Ｌ～（－１），检测时间仅为５ ｍＩＮ，非常适合现场快速检测。该检测试纸条具有携带方便、灵敏度高、特异性强等优点。由于本方法检测时间短，灵敏度高，与．．．
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
樊海新 李寒松 李复辉 马良友 朱平 吴金节 王希春
[目的]建立用于快速检测伏马菌素B1(FB1)的胶体金免疫层析试纸条。[方法]首先制备了FB1单克隆抗体和FB1-OVA偶联抗原,然后将FB1单克隆抗体与胶体金制成金标抗体包被在金标垫上,将FB1-OVA抗原和羊抗鼠Ig G包被在硝酸纤维素膜(NC膜)表面分别作为检测线和质控线。采用间接竞争法检测待检样品中的FB1与NC膜上的FB1-OVA抗原竞争结合金标抗体中的FB1单克隆抗体情况,并以检测线和质控线显示检测结果。[结果]本试验优化了金标抗体、检测抗原及羊抗鼠Ig G的包被量,检测FB1的灵敏度可达到2 ng·m L-1,最佳判定质量浓度为40 ng·m L-1。[结论]本试验制备的检测试纸...
[期刊] 水产学报
[作者]
辛志明 樊海平 吴斌 张新艳
采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体分泌细胞株,获取抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体,柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒,选择直径20 nm的胶体金颗粒,标记抗豚鼠气单胞菌单克隆抗体并制备胶体金垫。将胶体金垫与喷涂有抗豚鼠气单胞菌兔多克隆抗体和羊抗鼠抗体的硝酸纤维素膜及样品吸收垫等组装成免疫层析试纸条,建立豚鼠气单胞菌的快速检测方法。用灭活细菌与血清混合的模拟样本测定试纸条的特异性、灵敏度,结果显示,试纸条对嗜水气单胞菌、温和气单胞菌、鳗弧菌、溶藻弧菌、荧光假单胞菌、副溶血弧菌等13种常见病原菌没有交叉反应,与豚鼠气单胞菌显示特异性反应,检测灵敏度为1×106CFU/mL,结果显示时间小...
[期刊] 淡水渔业
[作者]
夏武强 胡叶军 孙琛 张美珍 王伟萍 桑丽雅
通过研究胶体金免疫层析技术，建立了一种快速检测水产品中甲基睾酮含量的方法。将待测样品中的甲基睾酮和试纸条检测线上包被的人工抗原（ＭＴ－ＢＳＡ）竞争性结合金标结合垫上包被的胶体金－甲基睾酮单抗聚合物，根据检测线呈现的红色线条深浅来判定样品的阴阳性。结果显示：试纸条上ＭＴ－ＢＳＡ抗原工作浓度为１．０Ｍｇ／Ｍ Ｌ，羊抗鼠二抗工作浓度为１．５ Ｍｇ／Ｍ Ｌ，试纸条的最低检测限达到１０μｇ／ｋｇ，与甲基睾酮类似物的交叉反应率低；使用甲醇提取，４倍ＰＢＳＴ稀释，整个检测所需时间仅１０～１５ Ｍｉｎ，适用于大规模样品筛选。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王姝婷 桂文君 郭逸蓉 杨挺 朱国念
【目的】研制出一种适合于氯霉素残留快速测定的金标试纸条,并对该试纸条的保护剂进行研究,使得研制出的试纸条保存期足够的长。【方法】根据竞争性金免疫层析法原理,研制了氯霉素速测金标试纸条,并选择了蔗糖、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、牛血清蛋白(BSA)、表面活性剂Tween20、防腐剂等物质,采用经验尝试法配制了一系列的配方,对试纸条不同部位进行处理,通过37℃和60℃下热稳定性测试,并与未经稳定剂处理的对照进行比较,筛选出适宜的试纸条保护剂。【结果】经该复合保护剂处理的氯霉素速测金标试纸条,在4℃、37℃和60℃下分别保存180 d、30 d和10 d,显色基本不变,对于...
关键词：
氯霉素 胶体金 试纸条 保护剂
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
徐正华 杨晗婕 吴思超 张毅
为进一步压缩检测时长、实现进出口食品快速通关，研制阵列装置用于多毒素同步快速检测。设计并以3D打印技术构建了卧式和立式2种适配于胶体金侧流免疫分析（LFIA）试纸的阵列装置，并对装置的性能进行评价。以阵列装置同时集成黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)、玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEN）、赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)以及脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol,DON）等4种真菌毒素的LFIA试纸并应用于玉米、玉米面和麦仁等食品的检测。试验结果显示：4种毒素的检测限分别达0.031、0.190、0.780、0.220 ng/mL，回收率为74.42%～112.40%，结果无交叉反应，包括前处理时间在内单一样品的四指标同步检测可在40 min内完成。
[期刊] 华北农学报
[作者]
王自良 张改平 杨艳艳 张海棠 杨继飞 刑广旭 柴书军
以分泌抗氯霉素单克隆抗体(CAP mAb)杂交瘤细胞株的建立为基础,应用胶体金免疫层析试验(GICA)成功研制出CAP残留快速检测试纸(CAP_Strip),并对其性能进行了测定。结果表明,CAP_Strip的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,目测检测限为0.5μg/L;与氯霉素琥珀酸钠的交叉反应为160%,与其他酰胺醇类和抗菌药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%;10 min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合CAP残留快速检测的推广应用。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
赵丹丹 杨国平 刁有祥 陈浩 提金凤 张璐 张英 李川川
【目的】鸭瘟（ＤＰ）是由鸭瘟病毒（ＤＰＶ）引起的一种急性、败血性传染病，以头颈肿胀、食道黏膜和泄殖腔黏膜出血、黄白色溃疡，头颈部皮下有黄白色胶冻样渗出为特征。该病一旦发生，发病急、死亡快、死亡率高，对养鸭业危害严重。快速诊断是控制鸭瘟的重要措施之一，可以及时确定病原，以便采取有效的防制手段。试验旨在建立鸭瘟病毒（ＤＰＶ）胶体金快速检测方法。【方法】利用生物学软件Ｐｒｏｔｅａｎ分析，选择鸭瘟病毒抗原表位较多的一段序列设计引物，ＰＣｒ扩增目的基因。连接到载体ＰＭＤ－１８ｔ上，测序正确后再连接到原核表达载体Ｐｅｔ－２８ａ上。将获得的重组质粒转化至ｒｏｓｅｔｔａ感受态细胞中进行诱导表达。表达的蛋白经纯．．．
[期刊] 华北农学报
[作者]
刘庆堂 职爱民 邓瑞广 杨艳艳 杨继飞 柴书军 张改平
建立了分泌抗链霉素单克隆抗体(STRmAb)杂交瘤细胞株并生产了STRmAb,采用胶体金免疫层析试验(GICA)技术成功研制出STR残留快速检测试纸(STR-Strip),并对其性能进行了鉴定。结果显示,目测检测限为12.5μg/kg;与氯霉素等药物无交叉反应;其敏感性与竞争ELISA试剂盒相当,符合率为100%。研制的快速检测试纸可以在10min内显示结果,具有快速、敏感、特异、简便等特点,适合STR残留的现场快速检测。
[期刊] 水产学报
[作者]
潘莹 杨家辉 彭发永 黄友华 秦启伟 黄晓红
为建立一种快速灵敏、可视化的适用于临床样品检测新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)的方法，本研究针对SGIV特异基因ORF014L序列设计特异性引物及探针，建立重组酶聚合酶扩增(recombinase polymerase amplification,RPA)技术及结合侧流层析试纸条(lateral flow dipstick,LFD)(RPA-LFD)的SGIV检测技术。RPA反应使用10μmol/L的引物浓度，在40.1°C恒温反应20 min即可完成特异性病毒的检测，最低检测限为10~2个/μL标准质粒。RPA-LFD反应在42°C恒温反应8 min可将检测结果通过试纸条可视化呈现，最低检测限为10~1个/μL标准质粒，且不与其他常见水生动物病原发生交叉反应，临床样品检测结果也与PCR检测结果一致。RPA、RPA-LFD均能特异性检测SGIV，两者的检测限均比常规PCR灵敏。RPA-LFD法具有快捷简单、结果可视化的特点，在临床应用具有较好的应用前景。
[期刊] 华北农学报
[作者]
徐福洲 王金洛 杨兵 宋维平 赖平安 秦泽荣 孟彦妮
利用产肠毒素大肠埃希氏菌(ETEC)标准菌株K88,K99,987P制备灭活苗,免疫待开产母鸡,应用琼脂扩散试验检测母鸡血清抗体和卵黄抗体(IgY)效价,在琼扩效价≥1∶64时收集卵黄,卵黄经氯仿去脂、硫酸胺沉淀后提纯出卵黄抗体,将提纯卵黄抗体对攻毒仔猪口服治疗,结果显示治疗仔猪腹泻状况明显减轻,与对照组相比有显著差异;治疗组未出现死亡而对照组仔猪有33%～67%的死亡率。试验结果表明,研制的IgY对ETEC所致的仔猪腹泻具有明显的效果。
关键词：
仔猪腹泻 产肠毒素大肠埃希氏菌 卵黄抗体
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
刘莹莹 卢瑛 赵勇 潘迎捷
为能够快速检测水产品中副溶血性弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ），本研究首先制备了副溶血性弧菌多克隆抗体，然后将其标记在磁珠上形成特异性磁纳米探针，再分别以副溶血性弧菌多克隆抗体和山羊抗兔ｉｇ ｇ作为检测线ｔ线和质控线ｃ线，建立了双抗夹心模式的磁性免疫层析试纸条。利用正交试验设计的方法，从ｔｗｅｅｎ－２０、ｂｓａ、蔗糖３种因素对层析体进行优化分析，结果表明这３个因素对层析检测的影响效果为ｔｗｅｅｎ－２０＞ｂｓａ＞蔗糖；当ｔｗｅｅｎ－２０含量为５％（Ｖ／Ｖ），ｂｓａ浓度为０．２ ｍｇ／ｍ ｌ，蔗糖浓度为０ ｍｇ／ｍ ｌ时，阳性信号最强，检测的准确性和灵敏度达到最优，通过单纯的．．．
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
孙秀兰 张银志 汤坚 朱瑜
为了扩大金标免疫层析试条(GICA)检测食品和饲料中黄曲霉毒素B1的应用范围,研究了样品基质对试剂条信号强度的影响,探讨了GICA测定饲料和各种发酵类食品样品时,提取液中NaCl、金属离子(Fe3+,Cu2+,Pb2+,As3+)和脂肪含量对检测结果的影响,并研究了消除影响的方法。结果表明,3种阴性样品(大米、玉米和小麦粉)均存在不同程度的非特异性干扰,大米的影响最小,其次为玉米和小麦粉,大米的最佳稀释倍数为10倍,玉米和小麦粉为30倍;随NaCl质量浓度增加,检测结果有偏向假阳性的趋势;4种金属离子对检测结果的影响程度依次为Fe3+>Cu2+>Pb2+>As3+;随着样品中油脂含量的增高,用...
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