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[期刊] 中国水产科学
[作者]
吴俊伟 赵金良 赵岩 罗明坤 王燕 赵永华
为了解尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）在碱环境适应过程中氨代谢调节途径，本研究选取了５个氨代谢相关酶：谷氨酰胺合成酶（ｇｌｕｔａｍｉｎｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ，ｇｓ）、碳酸酐酶５ａ（ｃａｒｂＯｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ ５ａ，ｃａ－５ａ）、谷氨酰胺酶（ｇｌｕｔａｍｉｎａｓｅ ２，ｇｌｓ２）、氨甲酰磷酸合成酶（ｃａｒｂａｍｙｌ ｐｈＯｓｐｈａｔｅ ｓｙｎｔｈｅｔａｓｅ １，ｃｐｓ１）、氨转运蛋白（ａｍｍＯｎｉｕｍ ｔｒａｎｓｐＯｒｔｅｒ ｒｈ ｔｙｐｅ ｃ－２ ｌｉｋｅ，ｒｈｃｇｌ２），研究了急性碳酸盐碱度胁迫条件下，尼罗罗非鱼血氨浓度变化、氨代谢相关酶基因表达水平及其酶．．．
[期刊] 淡水渔业
[作者]
涂翰卿 赵金良 赵岩 曹晓颖
为了解罗非鱼在碱水环境适应过程中的氨代谢机制,将尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)放在(2、4、6 g/L)碳酸盐(Na HCO3)碱水环境中进行急性胁迫。检测碱胁迫72 h内的血氨浓度,肝、肾、鳃组织及水体、尿液、血液尿素浓度变化,肝、脑、鳃谷氨酰胺(Gln)浓度,肝、脑谷氨酰胺合成酶(GS)活性,肝氨甲酰磷酸合成酶(CPS)活性,不同组织中GS、CPS、谷氨酰胺酶(GLS)的基因表达变化。结果显示:急性胁迫下尼罗罗非鱼血氨浓度上升,于12 h到达峰值。随着血氨升高,各组织中的尿素浓度0~6 h快速升高,CPS活性0~2 h快速升高,基因相对表达量0~24 h升高,表明尿素代谢途径0-6 h内启动。肝谷氨酰胺浓度0~6 h快速升高到达峰值,肝GS活性0~6 h和12~24 h快速升高,组织中GS、GLS基因相对表达量在0~24 h升高,表明谷氨酰胺代谢途径0~6 h内启动。结果表明,在碱胁迫条件下,尼罗罗非鱼在胁迫早期同时启动尿素代谢途径与谷氨酰胺代谢途径共同参与调节血氨浓度。
[期刊] 中国水产科学
[作者]
梁从飞 赵金良 甘远迪 王飞 Thammaratsuntorn Jeerawat 伍勇 李传阳 罗明坤
为了探讨盐碱胁迫条件下鱼类渗透生理调节机制，以尼罗罗非鱼（ＯｒｅＯｃｈｒＯｍｉｓ ｎｉｌＯｔｉｃｕｓ）为实验材料，Ｐｃｒ扩增得到了ｎａ～（＋）／３ｈｃＯ～（－）共转运子（ｎＢｃｅ１）基因ｃ Ｄｎａ部分序列，比较了单盐（盐度１０、盐度１５）、单碱（１．５ ｇ／ｌ、３ ｇ／ｌ ｎａ ｈｃＯ３）、盐碱混合（盐度１０，碱度１．５ ｇ／ｌ；盐度１５，碱度３ ｇ／ｌ）胁迫后不同时间（０ ｈ、６ ｈ、１２ ｈ、２４ ｈ、４８ ｈ、７２ ｈ、９６ ｈ）血清渗透压、离子浓度（ｎａ～（＋）、Ｋ～（＋）、ｃｌ–、ｃａ２～（＋））以及鳃碳酸酐酶（ｃａ）活性、ｃａ与ｎＢｃｅ１基因ｍ ｒｎａ表达变化。结果显示，不同胁迫条．．．
[期刊] 水产学报
[作者]
赵丽慧 赵金良 Thammaratsuntorn Jeerawat 赵岩
为了解鱼类适应盐碱水环境的生理变化机理,将尼罗罗非鱼从淡水直接转入4个不同盐碱混合梯度组(A组:盐度10,碱度1 g/LNaHCO3;B组:盐度10,碱度2 g/LNaHCO3;C组:盐度15,碱度1 g/LNaHCO3;D组:盐度15,碱度2 g/LNaHCO3)中进行为期96 h的急性胁迫实验,分别检测胁迫后0、6、12、24、36、48、72和96 h时尼罗罗非鱼的血清渗透压、血清Na+、K+、Cl-浓度以及鳃中Na+-K+-ATP酶(NKA)和碳酸酐酶(CA)基因相对表达量的变化过程。结果显示,血清渗透压、离子浓度以及鳃中NKA基因和CA基因mRNA表达量变化程度均与其盐碱胁迫浓度间呈...
[期刊] 中国水产科学
[作者]
么宗利 应成琦 周凯 王慧 来琦芳
以广盐性养殖的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)为研究对象,采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)和定量PCR的方法,研究其在高碳酸盐碱度胁迫下转录组水平的基因表达差异,以期从基因组水平研究对虾对高碳酸盐碱度胁迫的适应机制。结果表明,以高碳酸盐碱度(20 mmol/L)胁迫第4天凡纳滨对虾鳃组织和低碱度(2 mmol/L)对照组鳃组织为材料,通过斑点杂交筛选,发现鳃组织中有158个克隆子表达上调,291个克隆子表达下调。挑选150个高表达差异的克隆子进行测序,获得100个序列,其中50个得到成功注释。经过GO分...
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
魏威 何玉英 李朝霞 周雨欣 李健 谢拥军
采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术获得中国对虾(Fenneropenaeus chinensis) ATG5基因cDNA全长，命名为FcATG5。利用实时荧光定量技术分析了FcATG5的组织表达及其在pH和碳酸盐碱度胁迫下的表达特征，并利用RNAi技术验证其功能。基因分析显示，FcATG5 cDNA全长为2225 bp，开放阅读框为810 bp，编码269个氨基酸，预测其编码的蛋白质分子量为31.10kDa，理论等电点为5.59，为疏水性蛋白，包含一个APG5自噬相关蛋白结构域，无跨膜结构，不包含信号肽。同源性和系统进化分析显示，FcATG5具有高度保守性，与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)同源性最高，达98.14%。组织表达分析显示，FcATG5在中国对虾各组织中均有表达，其中，肌肉中表达量最高(P<0.05)，血淋巴细胞中最低(P<0.05)，表明该基因的表达量越高，越有利于中国对虾存活。结果表明，FcATG5在pH、碳酸盐胁迫下的表达量均显著升高(P<0.05)，推测自噬可能参与中国对虾应对非生物胁迫的调控。本研究结果对水生动物特别是甲壳动物中细胞自噬研究具有重要的借鉴意义，有助于推进中国对虾盐碱水养殖的研究进程。
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李亚伦 何玉英 王琼 管晨惠 周玉洁 李朝霞
为探究急性盐碱胁迫下中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis) ABC转运蛋白(ATP-binding cassette transporter) G5基因的表达特征，本研究应用RACE克隆技术获得中国明对虾ABCG5基因，并将其命名为FcABCG5。该基因cDNA全长为2 718 bp，开放阅读框1 923 bp，共编码640个氨基酸，预测的蛋白分子量为71.39 kDa，理论等电点为9.12，预测基因位于内质网上，为疏水性蛋白，包含一个NBD和一个TMD结构域，不包含信号肽。同源性与系统进化分析结果显示，FcABCG5转运蛋白保守性强，与斑节对虾(Penaeus monodon) ABCG5蛋白同源性最高，达到98.91%。组织特异性分析结果显示，FcABCG5在各组织中均有表达，鳃中表达水平最高(P<0.05)，眼柄中最低(P<0.05)。盐碱胁迫下，FcABCG5在鳃组织中的表达量呈先升高后下降的趋势，胁迫6 h时达最高值(P<0.05)，比对照组高2.12倍，利用dsRNA干扰实验对该基因进行敲降，盐碱胁迫下，沉默FcABCG5基因会使对虾的死亡率高达60%，显著高于对照组40% (P<0.05)，说明该基因的表达量越高，对中国明对虾的存活越有利。本研究中受胁迫的中国明对虾FcABCG5表达量高，可能是由于鳃在直接接触盐碱水环境后，通过FcABCG5介导的物质转运启动渗透压调节，应对渗透压失衡。
[期刊] 海洋渔业
[作者]
刘一萌 包锬 李航 么宗利 孙真 高鹏程 周凯 王菲 来琦芳
通过青海湖裸鲤(Gymnocypris przewalskii)转录组数据获得热激蛋白60基因(GpHsp60)的序列片段,利用RACE克隆完善GpHsp60的mRNA全序列,得到序列全长2 995 bp:包括开放阅读框1 728 bp, 5′UTR和3′UTR分别为137 bp和113 bp;编码氨基酸575个,分子量为61.34 kDa,理论等电点为5.38,具有线粒体Hsp60高度保守序列。通过实时荧光定量PCR检测发现,青海湖裸鲤幼鱼受碳酸盐碱度(29 mmol·L~(-1))胁迫后,GpHsp60基因在脑、鳃、肝、肾、心脏、肠、肌肉、脾脏和皮肤等组织都有所表达。与对照组相比,胁迫组青海湖裸鲤幼鱼鳃(1.99倍)、脑(1.95倍)、肝脏(3.52倍)、心脏(2.29倍)、肌肉(3.53倍)和肾脏(4.34倍)中GpHsp60基因都呈现高表达,说明以上组织细胞中的Hsp60可能被招募参与应答水环境碱度胁迫;而肠(0.257倍)和脾脏(0.251倍)组织中的Hsp60表达量却呈现下降,这可能与组织细胞线粒体功能效率降低有关;皮肤组织在受碱度胁迫后GpHsp60基因表达量无显著变化,表明青海湖裸鲤幼鱼皮肤组织未参与对碳酸盐碱度胁迫的应答。研究结果为揭示Hsp60基因在青海湖高碳酸盐碱度环境中生活的特有物种青海湖裸鲤在碱度胁迫下发挥的作用,为探讨和研究高碳酸盐碱度胁迫下水生生物体内分子响应机制研究提供了基础数据。
关键词：
青海湖裸鲤 热激蛋白60 碳酸盐碱度
[期刊] 中国水产科学
[作者]
宋凌元 程亚美 赵金良
为探讨盐度胁迫对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)肝脂肪酸代谢的影响，本研究分别在盐度8和盐度16的水体中对尼罗罗非鱼进行两周的胁迫实验，比较盐度胁迫过程中肝脂肪酸组成变化，以及脂蛋白脂肪酶(lipoprotein lipase, LPL)、苹果酸酶(malic enzyme, ME)和过氧化物酶体增殖物激活受体α亚基(peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR-α) mRNA表达量变化。结果表明，胁迫12 h，盐度组血浆渗透压升至最高，16盐度组血浆渗透压显著高于8盐度组(P<0.05)，而长链多不饱和脂肪酸(DHA、EPA和ARA为主)含量显著高于淡水组(P<0.05)。盐度组脂蛋白脂肪酶酶(LPL)、苹果酸酶(ME)、过氧化物酶体增殖物激活受体α亚基(PPAR-α)mRNA表达量均显著高于淡水组(P<0.05)。结果表明，盐度胁迫影响了肝脂肪酸组成和脂代谢过程。本研究旨在为鱼类渗透调节中脂类能量利用提供基础资料。
关键词：
尼罗罗非鱼 脂肪酸 脂代谢 盐度胁迫
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
周昊天 张成硕 王艳玲 赵金良 赵岩
设计急性胁迫实验，采用实时荧光定量、生物信息学、双荧光素酶报告和体内miRNA抑制的方法，探究miR-192在尼罗罗非鱼应答碳酸盐碱度胁迫中的作用。结果如下：（1）实时荧光定量PCR实验表明，在急性碱胁迫（6g/L NaHCO_(3)）尼罗罗非鱼6h后，鳃组织中miR-192的表达显著下调，溶质转运蛋白基因(solute carriers16A7,SLC16A7）表达显著上调（P < 0.05）；（2）借助生物信息分析预测到SLC16A7可能是miR-192的靶基因；（3）利用双荧光素酶报告实验发现miR-192会与SLC16A7的3’UTR结合；（4）体内对miR-192抑制后，SLC16A7的表达显著上调（P < 0.05）。综上，本研究证实了miR-192参与了尼罗罗非鱼应答碱胁迫中的调控过程，SLC16A7是miR-192的直接靶基因。本研究为探明miRNAs调控尼罗罗非鱼应答碱胁迫的分子机制提供了一定基础。
[期刊] 上海海洋大学学报
[作者]
何强 常玉梅 苏宝锋 孙博 孙效文 梁利群
采用封闭流水式呼吸室法，研究了不同浓度碳酸盐碱度（以下简称ＣＡ，１０、３０、５０、７０、９０、１１０ ｍｍｏｌ／ｌ）对体质量为（８４．６２±６．７０）ｇ的达里湖瓦氏雅罗鱼耗氧率、氨氮排泄率、血氨含量及排氨基因Ｒｈ家族（ＲｈＡｇ、Ｒｈｂｇ、ＲｈＣｇ１和ＲｈＣｇ２）在鳃组织中表达量的影响。结果表明，随着碱度的升高，瓦氏雅罗鱼的耗氧率和排氨率均表现为先下降后上升的趋势，且都显著低于对照组（Ｐ＜０．０５）。在ＣＡ９０时，耗氧率和排氨率均达到最低值，表明ＣＡ９０可能是达里湖瓦氏雅罗鱼所能承受的最大碱度胁迫。相反，随着碱度的升高，瓦氏雅罗鱼的血氨含量呈现先上升后下降的趋势，在ＣＡ９０时达到峰值。然而在ＣＡ．．．
[期刊] 林业科学
[作者]
姜英淑 陈书明 王秋玉 卢宝明
分别对黄山店欧李进行25d的高浓度NaHCO3溶液处理、干旱处理以及碳酸盐与干旱共同处理,测定胁迫期间该物种各理化指标的变化,研究欧李对不同环境胁迫的抗逆机制。结果表明:欧李的叶绿素a、丙二醛和脯氨酸含量在不同的逆境处理间差异显著;碳酸盐处理的电解质外渗率、POD活性、脯氨酸含量等生理指标变化平缓,与对照差异不明显;干旱处理和盐与干旱协同处理的各项指标波动很大。相关分析表明:不论是碳酸盐胁迫还是干旱胁迫,欧李的电解质外渗率、MDA含量和POD活性存在一定程度的正相关,碳酸盐处理下POD活性与电解质外渗率和MDA含量间达到显著的正相关。
关键词：
欧李 干旱胁迫 碳酸盐胁迫 生理指标
[期刊] 中国水产科学
[作者]
常玉梅 何强 孙言春 梁利群 孙效文
为了从不同层面解析达里湖瓦氏雅罗鱼（Ｌｅｕｃｉｓｃｕｓ ｗａＬｅｃｋｉｉ）耐高碱的生理机制，本研究对达里湖瓦氏雅罗鱼在２个时间段（２２ ｄ和６０ ｄ）和３个不同浓度碳酸盐碱度（１８ ｍｍｏＬ／Ｌ、３０ ｍｍｏＬ／Ｌ和５０ ｍｍｏＬ／Ｌ）胁迫下的１５种血浆游离氨基酸（ＰＦａａｓ）含量的变化趋势进行了分析。结果显示，血浆ＰＦａａｓ总量随着碱度的上升而显著增加，而且随着胁迫时间的延长，由必需氨基酸增量为主转向非必需氨基酸增量为主；作为能量代谢的主要底物，非必需氨基酸中的脯氨酸（Ｐｒｏ）和缬氨酸（ＶａＬ）含量随着碱度的增加而显著增加（Ｐ＜０．０５），尤其是Ｐｒｏ在碱度胁迫组中的含量增幅为对照组的２３倍．．．
[期刊] 中国水产科学
[作者]
朱华平 刘玉姣 刘志刚 卢迈新 高风英 可小丽 黄樟翰
以经过连续多代抗寒选育获得的尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)耐寒品系为实验材料,克隆了尼罗罗非鱼水通道蛋白基因(AQP1)的c DNA序列,并采用实时荧光定量PCR分析方法探讨了低温胁迫对罗非鱼AQP1基因表达水平的影响。序列分析结果显示,尼罗罗非鱼AQP1 c DNA长度为1 098 bp,包含36 bp的5′端非翻译区序列、783 bp开放阅读框(ORF)和279 bp的3′非翻译区序列,编码261个氨基酸。氨基酸序列比对表明,各物种间AQP1序列的同源性较高(96%~59%)。聚类分析表明,尼罗罗非鱼首先与同属鲈形目丽鱼科的斑马拟丽鱼(Maylandia zebr...
[期刊] 海洋渔业
[作者]
郭雯翡 么宗利 来琦芳 史建全 周凯 祁洪芳 李子牛 王慧
采用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,研究了青海湖裸鲤(Gymnocyprisprzewalskii)在高盐碱胁迫下转录水平上的基因表达差异,实验获得差异表达序列91条,其中成功注释60条。以同是鲤科鱼类的斑马鱼(Danio rerio)的基因ID作为参照,用DAVID软件对这些序列进行功能分类,结果从正向文库获得28条功能基因片段,反向文库获得14条。按功能将其分为10类,其中,催化活性、细胞、部分结合相关基因表达上调,结合、免疫相关基因表达下调。分析发现,高盐碱胁迫会改变鱼类的渗透压和酸碱平衡,对免疫系统产生一定的抑制作...
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