【目的】花榈木Ormosia henryi是我国特有的珍贵用材树种，但存在种子繁殖过程中幼苗移栽存活率低，生长缓慢，结瘤率低等问题。研制高效根瘤菌剂是解决这一难题的有效途径。结合湖南土壤有效磷含量低的特点，筛选同时具有固氮作用和解磷能力的花榈木根瘤菌，可增加根瘤菌的应用功能和范围，为开发兼具固氮、解磷作用的多功能高效根瘤菌剂提供优良菌株。【方法】采用Vincent JM分离方法，从花榈木根系中分离根瘤菌；利用透明圈法及钼锑抗比色方法测定根瘤菌的解磷能力；通过回接试验研究接种根瘤菌对花榈木幼苗生长的影响。【结果】从花榈木根系中分离到根瘤菌20株，具有解无机磷能力的菌株8株，具有解有机磷能力的菌株14株，菌株XT202016解无机磷和有机磷的透明圈直径均最大，无机磷溶磷量和有机磷溶磷量最高，分别为31.1±0.3、71.2±0.6 mg·L~(-1)。回接解磷根瘤菌后花榈木结瘤数量为8～39个之间，固氮酶活为0.04±0.02～2.54±0.06μmol·g~(-1)·h~(-1)之间。与对照相比，接种了解磷根瘤菌的花榈木幼苗株高、地径、植株干质量、叶绿素含量和氮含量分别增加了2.5%～92.5%、1.7%～22.5%、14.3%～35.0%、4.7%～40%、9.5%～53.3%。接种菌株XT202016的花榈木幼苗结瘤数量、固氮酶活、株高、地径、植株干质量和氮含量均最高。【结论】解磷根瘤菌XT202016具有较强的解磷能力，同时可明显提高花榈木苗木结瘤率、促进幼苗生长，具有进一步制作高效根瘤菌剂的潜力。

根瘤菌接种对黑木相思、灰木相思、银荆和黑荆苗木的生长、结瘤及固氮效应的研究结果表明：接种不同根瘤菌的相思苗木其苗高、总生物量和根瘤生物量分别比不接菌的对照苗木增加３５．３８％～１６０．２６％、１７．８５％～２３８．７９％和２．４％～１０２．６１％。接菌的不同相思树种／种源苗木其苗高、总生物量和根瘤生物量分别比各自不接菌的对照苗木增加２．６４％～１０９．８２％、１．８２％～２８１．４８％和６４．７％～２１１．１５％。接菌苗木的氮含量和总氮量比对照高出８．５８％～７７．５５％和１１．６４％～２６２．５０％。根瘤固定的氮绝大部分运输到植株其它部位，分配到地上部分的氮素多于根部。固氮量与苗木生长量相关...

为筛选促生效果好的花榈木Ormosia henryi根瘤菌菌株,建立良好的共生固氮体系,从贵州、浙江、安徽、福建、江西等不同地区采集花榈木根瘤并进行分离鉴定,将通过16S rDNA序列分析及回接验证的20株纯化菌株接种到1年生盆栽无菌花榈木幼苗上,并测定接种后花榈木幼苗光合速率、蒸腾速率、叶绿素荧光参数、生长指标及结瘤指标。研究结果表明:20个菌株接种后结瘤率均在90%以上,其中7号菌株结瘤率、结瘤数、根瘤质量均最高。接种根瘤菌能显著(P<0.05)提高花榈木幼苗光合速率、蒸腾速率以及叶绿素荧光参数,促进花榈木幼苗的地上地下部分生长及总生物量积累,且接种不同菌株的促生效果差异显著(P

为了探讨不同相思树种根瘤菌互接种的效应,将黑木相思根瘤菌接种到厚荚相思苗木上,采用随机区组盆栽试验方法,研究苗木的结瘤、生长和固氮能力.结果表明:接种黑木相思根瘤菌能明显增加厚荚相思苗木的结瘤,证明不同相思树种之间,其共生的根瘤菌对宿主的要求并不十分的严格;但是,不同菌株对苗木的生长效应和固氮能力上存在明显的差别.因此,在开发根瘤菌资源时,应充分注意树种与菌株的匹配问题,在考察相思树种根瘤菌是否优良时,要综合考虑其侵染结瘤特性、对苗木生长的促进作用以及菌株的固氮酶活性及固氮量等因素.

[目的 ]探究根瘤内生菌群对南洋楹苗木的促生效应，并揭示根瘤优势内生菌组成及其与苗木生长的关系，为南洋楹菌肥研发提供参考。[方法 ]以来源于广东广州、惠州和茂名等3个地区的南洋楹根瘤提取液为接种菌液（YZ、YD和YX），开展南洋楹组培苗接种对比试验，并对回接根瘤进行16S rRNA基因测序鉴定和数据分析。[结果 ]与对照相比，3种接种处理的南洋楹苗木均能成功接根瘤，其苗期生长与结瘤、生物量积累、光合及固氮等相关指标均显著优于对照，其中苗高、根长、相对叶绿素含量和总氮量等表征南洋楹苗木的综合情况的指标分别比对照增加了53.74%～95.65%、52.91%～98.41%、74.04%～86.18%和7.6～15.9倍。3种接种处理中，接种菌液YZ对苗木促生、结瘤和固氮效应最为显著。回接根瘤内生菌群组成存在一定差异，YZ处理的根瘤内生菌的比例最均衡、细菌物种数（OTU数）最多和α多样性（香农指数）最高。根瘤内生菌中一种反硝化Fe-Ⅱ氧化细菌与南洋楹苗高、回接根瘤数呈极显著正相关，与含氮量、总氮量和固氮量呈显著正相关；OTU数和香农指数与南洋楹苗高、根瘤数、总氮量和固氮量等呈极显著或显著正相关关系。[结论 ]南洋楹根瘤提取液能对南洋楹苗期的生长与结瘤、生物量积累、光合及固氮起到积极的促进作用，不同来源的接种菌液对苗木的促生效应及回接根瘤内生菌群组成存在一定差异，根瘤内生菌种类越丰富、相对丰度越均衡，对南洋楹幼苗促生和固氮作用越显著。

对海南、福建、广州、清新分离的根瘤菌和实验室保存的部分根瘤菌进行了解磷能力的研究,从200多株根瘤菌中筛选出40株具有解磷能力的菌株,通过测定根瘤菌在固体培养基和液体培养基中溶解无机磷和有机磷的能力,筛选出2株解磷能力较强的菌株G7-3和菌株DH001。菌株G7-3在无机磷和有机磷培养基中的解磷量分别是4.142、9.944μg.mL-1,与其它菌株有明显的差异;在无机磷液体培养基中,菌株DH001微克菌体解磷量为0.0867μg,和其它菌株有显著差异。对筛选出的菌株进行了16SrDNA测序分析,确定筛选出的菌株除H1-1-1和H2-1-2外,其它菌株均为根瘤菌。

采用盆栽结瘤实验法对从 6省市采集的 18份土样中分离的 16 0株大豆根瘤菌进行了结瘤与共生固氮效率的比较测定 ,从中筛选出固氮效率较高的菌株ZX2 0和SMH12。通过测定 2株菌的竞争结瘤能力 ,确认其可以进入小区田间试验。

以柯斯质粒ｐＬＡＦＲ１为载体先构建快生型花生根瘤菌８５－７菌株总ＤＮＡ的基因文库。在协助质粒ｐＲＫ２０１３帮助下用此基因文库分别同菌株８５－７和另一株慢生型花生根瘤菌菌株Ｃ０２－５作三亲本杂交。转移接合子接种沙培条件下生长的花生，通过结瘤试验初筛选和复筛选，共筛选出３株工程菌ＨＮ１１、ＨＮ１２（以８５－７为受体）和ＨＮ１３（以Ｃ０２－５为受体）。其每植株根瘤的固氮酶活分别比出发菌株的提高３０２％（ＨＮ１１）、３５６％（ＨＮ１２）和２８４％（ＨＮ１３）；每植株干重分别比出发菌株的提高８５％（ＨＮ１１）、８３％（ＨＮ１２）和２８％（ＨＮ１３）。工程菌株的重组质粒酶切分析表明，除载体ｐＬＡＦＲ１外还...

对２２株相思根瘤菌耐酸性的比较结果得出：大多数的相思根瘤菌不耐酸。在ｐＨ５．０条件下大多数根瘤菌生长不好，只有ＩＳ００４、ＩＳ００２、ＣＲ００２和ＬＲ００７菌株生长较好，在培养基ｐＨ３．８６条件下和在ｐＨ４．９土壤悬液中，ＩＳ００４和ＩＳ００２菌株的生长及存活率较其它菌株高，通过在酸性条件下生长与结瘤的试验，初步筛选出耐酸菌株ＩＳ００２。

分离筛选具有高效解磷解钾效果的菌株并进行鉴定及培养条件优化。采用鉴别培养基进行菌株分离筛选,通过生理生化鉴定及16S rRNA基因序列分析进行菌种鉴定,并对其发酵培养基和培养条件进行正交试验确定最佳培养条件。筛选出高效解磷解钾菌株NX-11。测序结果表明,NX-11与Bacillus subtilis subsp.Subtilis亲缘关系接近。确定其最佳发酵培养基配方为:淀粉5.0%,黄豆饼粉1.5%,MgSO40.07%,NaCl 0.05%;最佳培养条件为:种龄20 h、装量30 mL/250 mL三角瓶、接种量4%、pH值8.0培养温度37℃、摇床转速200 r/min。

在盆栽条件下,对加拿大豌豆品种M.P.1824接种8株豌豆根瘤菌菌株,研究其对豌豆生育特征、产量及品质的影响。结果显示:与不接种对照相比,接种根瘤菌可以延长豌豆生育期,促进后期豌豆植株生长,提高产量,增加籽粒粗蛋白质、粗纤维含量,以及降低可溶性糖含量。其中,接种菌株ACCC 16058豌豆初花期、盛花初荚期、盛荚期及成熟期分别推迟3.1、5.2、4.8及12d,盛花初荚期分枝数增加45.5%,成熟期株高增加16.61%,单株荚数、单株粒数、单株籽粒干重及单盆籽粒干重分别提高76.67%、85.54%、65.13%和36.71%,均存在显著差异(P<0.05)。接种商用菌株F98,可显著提高籽粒...

对分离自海南尖峰岭自然保护区木本豆科植物的2个根瘤菌菌株RIF200835和RIF200845进行了鉴定。这两个菌株的16S r DNA序列同模式菌株Rhizobium miluonense CCUAU 41251T的相似度分别为98.28%和98.51%。对这两个菌株进行全细胞脂肪酸组分和全细胞醌组分的分析结果表明,菌株RIF200835和RIF200845在组分上与模式菌株较为一致,但在含量上稍有差异。RIF200835和RIF200845这两个菌株的DNA G+C mol%含量分别为63.68%和60.56%,介于根瘤菌G+Cmol%含量范围(57%65%)之内。这两个菌株的看家基因at...

【背景】花生(Arachis hypogaea L.)是世界上重要的油料和经济作物。在我国南方产区,大部分花生种植地土壤为酸性。酸性土壤不仅pH值低、瘦瘠,而且还有低磷、铝毒等诸多障碍因素,严重限制了花生的生物固氮及产量。【目的】本文旨在分离及应用适应酸性土壤的高效固氮根瘤菌,提高花生固氮效率及产量,改良酸性土壤。【方法】利用平板划线结合镜检的方法,从田间采集的新鲜花生根瘤中分离纯化单菌落;通过PCR技术检测分离物中是否含有结瘤基因nodA和固氮基因nifH,进行根瘤菌的初步分子鉴定;再通过16S rRNA基因序列比对,对根瘤菌进行进一步分子鉴定。候选根瘤菌通过水培回接,检测其与花生的共生结瘤及固氮能力;再通过田间试验评价筛选出来的候选根瘤菌在酸性土壤上的应用效果。【结果】本研究首先从不同酸性土壤种植区域的花生根瘤中分离、纯化得到256个分离物;其中10株含有nodA和nifH,初步确定为根瘤菌。经16S rRNA基因全长序列测定,发现8株为慢生型根瘤菌(Bradyrhizobium),2株为根瘤菌属根瘤菌(Rhizobium)。水培回接试验发现,这10株根瘤菌均能够与花生共生、形成有效根瘤,证实是花生根瘤菌。在此基础上,选取4株固氮效率较高的根瘤菌,在酸性土壤上应用。结果表明,4株根瘤菌均能与花生在酸性土壤上形成根瘤,而未接种的花生根部不能形成根瘤。并且接种根瘤菌后显著改善了花生氮营养,提高了花生的生物量和产量。与不接种的对照相比,接种根瘤菌后,花生生物量、产量和氮含量分别提高了27.1%—38.0%、24.7%—104.2%和73.9%—151.3%。【结论】本研究分离鉴定的花生根瘤菌能够高效固氮和适应酸性土壤,具有重要的应用前景。

研究绘制了相思根瘤菌MZ菌株和解磷菌217菌株在4种培养基中的OD值生长曲线,结果表明:它们都能在BSE培养基中较好的生长;对MZ根瘤菌和217解磷菌的常规培养基进行优化,获得了它们的优化培养基,进一步绘制的生长曲线证明了优化培养基更利于菌株的生长,且活菌数更多。217解磷能力的研究也表明:菌体数量与pH值、解磷强度之间有着密切的关系。

【目的】大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）是微生物肥料重要的功能菌种之一，可通过生物固氮为大豆生长提供氮素，实现节本增效，菌株5873作为其典型代表，已广泛应用于农业生产。筛选并鉴定其特异引物，建立大豆根瘤菌5873菌株水平的快速检测方法，对微生物肥料生产菌种鉴定、产品质量检测和功能评价至关重要。【方法】以商业化菌株大豆根瘤菌5873为供试材料，基于其全基因组序列和NCBI数据库中大豆根瘤菌种内参比菌株相关序列，以及与其高度同源（基因组ANI值大于99.95%）的大豆根瘤菌USDA 6T差异片段，通过多重序列比对，进行特异引物设计和筛选，获得特异性引物对，并通过对PCR反应条件/体系优化、特异性及灵敏度检测，建立大豆根瘤菌5873的快速检测方法。然后，采用盆栽试验，将大豆根瘤菌5873与其他根瘤菌菌株混合接种于大豆根际，应用上述方法对大豆根瘤菌5873竞争结瘤能力进行评价和方法验证。【结果】筛选获得了一组特异引物4-4和Q1(4-4-F 5′-GATAAGGCCACGGGTGAACA-3′/4-4-R 5′-CACTCGATAAGCTCCGCTGT-3′和Q1-F 5′-CCGGTCGTGACTGGAATGAT-3′/Q1-R 5′-TCGAGGCCTACAAGAACGTC-3′)，优化并建立了PCR快速检测方法，即反应体系：Premix Taq~(TM) 12.5μL，引物各1.0μL，基因组DNA 15 ng左右，加ddH2O补足至25μL；反应条件：95℃预热5 min,94℃变性45 s,61℃退火45 s,72℃延伸60 s,30个循环，再72℃延伸10 min。通过凝胶电泳检测目的条带的有无（355和218 bp），即可实现大豆根瘤菌5873的快速检测，该方法检出灵敏度为1 850 CFU/μL。此外，借助该方法可以成功地评价大豆根瘤菌5873竞争结瘤能力，与传统BOX-PCR评价结果一致。【结论】大豆根瘤菌5873快速鉴定方法的建立实现了以菌体发酵液或根瘤破碎提取液为模板，直接进行PCR扩增的鉴定操作，省去了根瘤的分离、根瘤菌分离纯化、培养、DNA提取及测序鉴定等繁琐的环节，大大减少了工作量，只需短短几个小时便可准确检测大豆根瘤菌5873，为微生物肥料中根瘤菌菌剂的产品质量检测和竞争结瘤能力评价提供了参考。