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[期刊] 中国农业科学
[作者]
郑雪芳 刘波 朱育菁 陈德局 陈小强
【目的】研究青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)Tn5转座子突变菌株的异质性,筛选出无致病力高效生防菌株。【方法】利用已构建的青枯雷尔氏菌致病力参考指标"弱化指数(attenuation index,AI)"和接种番茄植株的生物测定法对60株供试的青枯雷尔氏菌Tn5转座子突变菌株进行致病力测定;利用高效离子交换色谱法研究不同致病力突变菌株的色谱行为异质性;构建色谱效价指数(chromatography titer index,CTIi),CTIi=Si/(S1+S2+S3)×100
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
周向珍 朱辉
以百脉根根瘤菌MAFF303099为材料,利用转座子Tn5-sacB转座技术得到了约10 000个MAFF303099的转座接合子,构建随机插入突变体库进行保藏;同时建立了一套能从突变体库中快速筛选突变菌株的方法,且鉴定到共同结瘤基因nodB的突变体。结果表明:组成突变体库的接合子基因组中均有Tn5-sacB插入,三亲本转化效率为3.75×10(-5);与野生型相比,MAFF303099 nodB的突变体在表型上不能使其宿主百脉根形成根瘤。
[期刊] 水产学报
[作者]
覃映雪 徐晓津 鄢庆枇 苏永全 刘力铭 李学刚
采用转座子mini-Tn10/Km构建了致病性溶藻弧菌的突变库,采用半固体双层平板初筛到73株运动缺陷突变株,初筛的突变株纯化及重复筛选后获得运动性缺陷表型稳定的突变株ND-01MM,Southern鉴定确定其为单位点插入。野生型菌株ND-01和运动缺陷突变株ND-01MM对致病性溶藻弧菌的天然宿主大黄鱼粘液的趋化、粘附以及在大黄鱼吞噬细胞内存活能力等生理功能的比较研究发现,溶藻弧菌运动缺陷后趋化及粘附能力均极显著下降(P0.05)。采用腹腔注射和浸泡两种方式感染大黄鱼,结果发现运动缺陷对浸泡感染的影响较为明显,但对腹腔注射的...
关键词：
溶藻弧菌 运动缺陷 转座子 毒力
[期刊] 中国农业科学
[作者]
刘波 朱育菁 林抗美 肖荣凤 葛慈斌 蓝江林 冒乃和
【目的】通过分析青枯雷尔氏菌在不同寄主发病植株、在同一寄主不同侵染状态植株和同一寄主不同发病阶段植株体内分布及其致病力的异质性,从生态位角度来初步探讨该病原菌与植物之间的相互关系。【方法】采用田间采样,室内测定样本的含菌量及其病原菌的致病性(弱化指数),统计分析比较青枯雷尔氏菌在寄主植株体内的分布和致病力的异质性。【结果】番茄和茄子病株体内青枯雷尔氏菌的平均含菌量>100×108cfu/g,显著高于烟草、花生和生姜(中部以上茎>中部以下茎;茄子和花生从根到上部茎依次含菌量逐渐降低;烟草根部和中部茎的含菌量显著高于下部和上部茎;...
关键词：
青枯雷尔氏菌 分布 致病力 生态位
[期刊] 西北农林科技大学学报(自然科学版)
[作者]
卫亚红 段敏 向照举 曲东 王瑶
【目的】敲除布洛芬福斯质粒文库克隆菌株４Ｆ６中的邻苯二酚－２，３－双加氧酶基因（Ｃ２３Ｏ），构建其Ｔｎ５插入突变体，为布洛芬降解调节因子的深入研究奠定基础。【方法】以构建好的３Ｇ７Ｔｎ５突变体菌株为基础，借助ｐＫＤ４６质粒的λ－ｒｅＤ同源重组酶，将转座子Ｔｎ５从菌株３Ｇ７中电击转化至４Ｆ６，消除ｐＫＤ４６质粒，敲除４Ｆ６菌株中的Ｃ２３Ｏ基因，测定出发菌株３Ｇ７、４Ｆ６及Ｔｎ５插入突变体菌株３Ｇ７－Ｇ９、３Ｇ７－Ｈ５、４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５间位苯环的裂解活性。【结果】４２℃条件下消除了Ｔｎ５插入突变体受体菌４Ｆ６中的ｐＫＤ４６质粒，构建了４Ｆ６－Ｇ９和４Ｆ６－Ｈ５突变体。Ｔｎ５转座子插入突变．．．
[期刊] 中国农业科学
[作者]
高苗 杨金广 刘旭 刘伟 孙航军 申莉莉 钱玉梅 杨清林 余广宏 李锡宏 王凤龙
【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;...
[期刊] 南京农业大学学报
[作者]
马欣 刘俊 乔俊卿 伍辉军 高学文
为了鉴定枯草芽孢杆菌定殖和促进植物生长相关基因,用携带转座子TnYLB-1的穿梭载体pMarA转化枯草芽孢杆菌OKB105菌株。高温诱变条件下,筛选了2 000个转座子插入突变的单克隆,构建了OKB105菌株的突变体文库。对随机挑选的15个突变体采用PCR及Southern杂交验证,结果表明:转座子TnYLB-1以单拷贝、随机方式插入到OKB105菌株的染色体上。
[期刊] 西南农业学报
[作者]
张荣胜 刘永锋 刘邮洲 罗楚平 刘长河 李美荣 陈志谊
通过离子注入技术对枯草芽孢杆菌生防菌Bs-916突变选育,得到一株拮抗性能比出发菌Bs-916提高15%以上的突变菌株H-74。通过对其抗菌物质的高效液相色谱(HPLC)分析表明,H-74分泌的脂肽类抗菌物质主要是表面活性素。在PDA平板上的水稻纹枯病菌菌丝抑制试验中,它能有效抑制新生菌丝的生长,并使细胞内含物外泄。盆栽控病试验表明,它对水稻纹枯病菌的相对防效达到73.35%。将H-74分泌的脂肽类抗菌物质单喷于水稻植株上,测定与植物抗病相关的超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化,发现其对植物抗病相关酶活性表达有明显的诱导作用。结果还显示同时接种脂肽类...
[期刊] 水产学报
[作者]
储卫华 陆承平
以携带质粒ｐＡＭ１２０（Ａｐｒ、Ｔｃｒ／Ｔｎ９１６）的大肠杆菌ＣＧ１２０株为供体菌，与受体菌嗜水气单胞菌Ｊ－１株，采用滤膜接合法进行接合转移，在选择平板（含Ｔｃ、ｃｆｚ和脱脂奶）上进行筛选，筛选出６株蛋白酶缺失株（ＥＣＰａｓｅ－），ＥＣＰａｓｅ－菌株其生长速度，对正常鲫血清的抗性降低，用脱脂奶平板法及底物法检测，蛋白酶产霞明显降低。与亲本Ｊ－１株相比，突变株致病力降低，对鲫的半数致死量大于１０~８（Ｊ－１株对鲫的半数致死量为５×１０~３）。用ＥＣＰａｓｅ－突变株 ＭＪ－１株的１８ｈ培养物（５ ×１０~６ＣＦＵ）接种健康鲫，不产生亲本 Ｊ－１株引起的病变及死亡。用ＭＪ－１活菌免疫鲫，在第５周产生...
关键词：
嗜水气单胞菌 胞外蛋白酶 Tn916诱变
[期刊] 渔业科学进展
[作者]
李倩 李贵阳 李杰 莫照兰
鳗弧菌(Vibrio anguillarum)的运动能力、菌膜形成能力、胞外蛋白酶产生能力等表型特征的变化与细菌的致病性相关。为了寻找影响鳗弧菌表型变化的基因，本研究使用转座子mini-Tn10 (pLOF/Kana)构建了鳗弧菌M3突变株文库，筛选影响表型变化的菌株及相关基因，证明了这些表型变化的突变子与毒力存在一定的相关性。对M3突变文库的1152突变子进行筛选，获得泳动能力改变的突变子1个(编号为6G＿1)，酪蛋白酶活性发生改变的突变子3个(编号为5A＿11、7B＿12和7E＿12)，明胶酶活性发生改变的突变子1个(编号为7H＿1)，以及菌膜形成能力发生显著变化的突变子3个(编号为5E＿2、6A＿2和6E＿12)。对转座子插入位点进一步分析显示，一个磷酸二酯酶相关基因突变引起泳动能力增强(P<0.05)，leuD、rseB和thiQ突变引起酪蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，potD突变引起明胶蛋白酶活性显著减弱(P<0.05)，leuO、ilvH和grpB的突变引起菌膜形成能力明显减弱(P
[期刊] 工业技术经济
[作者]
王莉明
采用Dowex Prakt CI-和Dowex Prakt +阴阳离子交换混合柱,甲醇为流动相,运用示差折先仪将未磺化物检出并记录。其相对平均误差和精密度分别为4.0％和0.6％。该法适用于测定脂肪醇硫酸盐,脂肪醇醚硫酸盐,烷基苯磺酸等中的未磺化物。
关键词：
未磺化物 磺化产品 离子交换色谱
[期刊] 中国农业科学
[作者]
车建美 蓝江林 刘波
【目的】采用电击法对青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)进行gfp/luxAB基因双标记,研究标记前后菌株的生长差异、以及侵染性和致病性的变化。【方法】通过电击法进行青枯雷尔氏菌的遗传转化,采用番茄组培苗对标记菌株的侵染条件和侵染过程进行初步研究。【结果】成功地采用gfp/luxAB基因标记了青枯雷尔氏菌。标记后的菌体细胞形状与亲本菌株形状相同,均为长椭圆形,近杆状,整个细胞呈现绿色荧光,PCR结果表明,从标记青枯雷尔氏菌菌株的基因组DNA中扩增出约3.0kb的gfp基因片段。标记菌在对数生长期,荧光素酶活性快速增加,到稳定期,荧光素酶活性降低。在无选择压力条件下连续移...
[期刊] 西南农业学报
[作者]
郭俊 聂亚锋 陈志谊
生防菌sf-628对油菜菌核病菌有较强的抑菌活性。为进一步提高其拮抗性,能获得高效菌株,利用不同剂量的N+对sf-628进行离子注入诱变。经过初筛、复筛和定量筛选,从500个诱变处理的菌株得到10株拮抗性能比出发菌sf-628提高15%以上的突变菌株。对筛选出的高效菌株进行室内抑菌和盆栽防病测定,结果表明,N+离子注入拮抗菌sf-628的最适剂量为100~150×5.3×1013N+/cm2;突变菌株的拮抗能力比sf-628提高了18.5%~41.7%;防病效果比sf-628提高了1.14%~14.80%。
[期刊] 华中农业大学学报
[作者]
况成尘 吴谋成
本文报道用DEAE Sephadex A-25作固定相、硫酸钾溶液作流动相的离子交换色谱法,从菜籽中分离4-羟基-3-甲基吲哚硫代葡萄糖苷的方法。
[期刊] 中国农业科学
[作者]
王秋红 陈亮 林营志 朱育菁 蓝江林 杨淑佳 刘波
【目的】利用气相色谱技术检测福建省的40株青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)菌株细胞内的脂肪酸,分析其脂肪酸分布的多态性;研究青枯雷尔氏菌脂肪酸多态性与青枯雷尔氏菌现有种下分化方法之间的关系。【方法】对40株青枯雷尔氏菌脂肪酸进行气相色谱分析,比较同一寄主分离的青枯雷尔氏菌和不同寄主分离的青枯雷尔氏菌脂肪酸的分布;对40株青枯雷尔氏菌脂肪酸进行聚类分析,分析聚成的各类青枯雷尔氏菌脂肪酸的特点以及脂肪酸多态性与其生理小种、生化型和致病性之间的关系。【结果】同一寄主分离的青枯雷尔氏菌和不同寄主分离的青枯雷尔氏菌,其脂肪酸都存在着明显的多态性;对40株青枯雷尔氏菌的脂肪酸进...
关键词：
青枯雷尔氏菌 脂肪酸 多态性 气相色谱
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